植物病原细菌基因敲除技术在本科开放实验中的设计与实践

基因敲除技术在植物病原细菌和寄主互作研究中发挥着重要作用。近年来,该技术在植物病理学研究领域得到了广泛应用。文章以植物病原细菌基因敲除技术为教学内容,以构建野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris)的RNA聚合酶σ54因子编码基因rpoN2的突变体为例,探讨了基因敲除技术在本科开放实验教学中的设计与实践。通过rpoN2基因敲除载体构建、野油菜黄单胞菌的遗传转化以及菌落PCR筛选重组子等多方面的教学内容的设计与实践,提高了学生对植物病原细菌基因敲除原理的理解和掌握,培养了学生相关实验操作技能、数据分析和解读能力,以及团队合作精神和科学探究意识。

哈氏弧菌脂酰-ACP合成酶的体外功能

【目的】系统鉴定哈氏弧菌脂酰-ACP合成酶(Acyl-ACP synthetase,Aas S)以不同链长游离脂肪酸和非脂肪链羧酸作为底物的体外催化反应。【方法】利用非变性蛋白质凝胶电泳和紫外分光光度计法从定性和定量两个方面分析了Aas S的体外催化功能与活性。【结果】Aas S能够催化不同链长直链的自由脂肪酸合成脂酰-ACP,其中以C6–C12作为底物时活性最高;以羟基脂肪酸作为底物的情况下,Aas S催化C8–C14的羟基脂肪酸有较高的活性。非脂肪链羧酸类作为底物的反应中,20种蛋白质氨基酸、苯甲酸和水杨酸均可以作为Aas S的底物,合成相应的脂酰-ACP。【结论】本研究系统地证明了哈氏弧菌脂酰-ACP合成酶(Aas S)对不同底物的不同催化活性,为生物体内氨基酸代谢和菌黄素合成代谢的研究提供了可行性的分析依据。