聚合酶链反应-增强化学发光检测结核分枝杆菌

目的 探讨微孔板杂交技术结合增强化学发光 (ECL)检测结核分枝杆菌 (MTB)。方法 同时应用聚合酶链反应 (PCR) ECL、PCR 比色法与PCR电泳检测 6 0例活动性肺结核和 5 4例健康对照痰标本 ,比较结果。结果 PCR ECL、PCR 比色法与PCR电泳总阳性率分别为 76 .7%、6 3.3%、5 0 .0 % ,其中PCR ECL阳性率显著高于PCR电泳 (P <0 .0 5 ) ;对涂片阳性标本 ,阳性率分别为 85 .7%、85 .7%、71.4% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;对涂片阴性标本 ,阳性率分别为 73.9%、5 6 .5 %、43.5 % ,PCR ECL阳性率高于PCR电泳 (P <0 .0 5 )。另外PCR ECL、PCR 比色法与PCR电泳特异性分别为 92 .6 %、96 .3%、96 .3% ,差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 PCR ECL灵敏度高 ,能提高临床标本MTB检出率 ,尤其是对涂片阴性痰标本 ,并且该方法操作简单 ,结果客观。

重组分枝杆菌噬菌体检测分枝杆菌的发光研究

采用生物发光方法检测重组的分支杆菌噬菌体对不同细菌的发光反应 ,并比较了仅在特定的温度范围内才能繁殖的温敏噬菌体Phage 88和正常噬菌体Phage 40对分枝杆菌感染活力测定时发光强度的差异 ,以建立用不同类型重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性的方法和条件 .结果显示两种噬菌体对各种分枝杆菌作用后均有发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核分枝杆菌的发光值最低 ;温敏噬菌体Phage 88的检测灵敏度大于正常噬菌体Phage 40 ,差异显著 .因此可认为两株噬菌体均可特异地检测结核分枝杆菌 ,但Phage 88的效果优于Phage 40 .

用Phage88快速检测结核分枝杆菌

目的 建立一种特异性强、灵敏度高的致病性分枝杆菌的检测及药敏试验方法。方法 应用可表达荧光素酶的结核分枝杆菌噬菌体 Phage88,采用生物发光方法对不同细菌的发光反应和药敏试验进行检测。结果 Phage88特异地对各种分枝杆菌发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性 ,不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,结核杆菌的发光值最低 ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核杆菌的发光强度比非耐药结核杆菌强 ,其强度有明显差异。结论 用 Phage88噬菌体检测结核分枝杆菌是一种快速、敏感的检测和药敏试验方法。

结核性胸膜炎患者胸水ADA、TB-DNA联合检测的临床应用

目的为了探索诊断结核性胸膜炎的最佳方法。我室采用的酶法连续监测法检测胸水中A-DA,用PCR方法检测胸水中TB-DNA,经过计算分析发现ADA,TB-DNA联合检测对诊断结核性胸膜炎有较大的诊断价值。方法全自动分析仪连续监测法测定ADA,全自动荧光定量检测TB-DNA。结果ADA、TB-DNA联合检测对诊断结核性胸膜炎的敏感度、特异度、准确度分别是90.2%、86.2%、88.4%。结论联合检测胸水ADA、TB-DNA有助于结核性胸膜炎的诊断和提高临床应用的价值。

利用发光自显影技术快速筛选结核杆菌的利福平耐药性

目的 利用发光自显影技术建立一种快速、简便的结核分支杆菌利福平耐药性筛选方法。方法 利用重组的分支杆菌噬菌体可在活菌内增殖的原理 ,来检测结核杆菌在含利福平液体培养基中的生长状况 ;采用发光自显影方法检测发光强度并确定活菌数 ,对 4 3份结核杆菌样本进行快速检测 ,并与L J培养基检测结果进行对比。结果 发光自显影方法与L J培养法相比 ,阳性率和真阴性率分别为 95.7%、90 % ,最佳检测的细菌浓度为 10 7～ 10 8CFU/ml,最佳药敏试验的利福平浓度为 1mg/ml ,利福平与结核分支杆菌孵育 4 8小时后即可进行发光自显影分析。结论 生物发光方法可用于快速筛选结核分支杆菌的利福平耐药性 ,是一种简单、快速、灵敏、实用的利福平药敏筛选方法。

氟康唑治疗肺结核合并肺部真菌感染57例

目的 :观察氟康唑对肺结核合并肺部真菌感染的治疗效果。方法 :5 7例肺结核合并肺部真菌感染病例 ,口服氟康唑 10 0～ 2 0 0mg·d 1 ,平均应用 14d。结果 :总有效率 94.7% ,不良反应发生率 7.0 % ,无严重不良反应。结论 :氟康唑对肺结核合并肺部真菌感染的治疗安全有效。

肺结核合并肺部真菌感染57例临床分析

目的 探讨肺结核患者合并肺部真菌感染的危险因素。诊断和治疗。方法 分析武汉市结核病防治所1997年5月-1998年8月57例肺结核合并肺部真菌感染病例临床资料。结果 肺结核病灶范围广泛，空洞，结核性支气管扩张，肺不张，广谱抗生素和糖皮质激素使用，结核患者营养状况差为真菌感染易发因素。结论 肺结核合并肺部真菌感染的治疗要注意抗真菌，抗结核和对症支持综合治疗。氟康唑治疗肺部真菌病有较好疗效。

利用重组分支杆菌噬菌体快速筛选耐利福平结核分支杆菌

目的 采用基因工程技术构建的可表达荧光素酶的结核分支杆菌噬菌体进行结核分支杆菌利福平药敏试验研究 ,建立一种特异、灵敏、快速的利福平药敏试验方法。方法 采用生物发光方法分别检测重组分支杆菌噬菌体对不同细菌在不同浓度利福平培养基中的发光水平 ,并与罗氏培养基进行药敏试验比较。结果 在不同细菌中 ,噬菌体均特异地对分支杆菌有发光反应 ,分支杆菌的发光值与大肠杆菌相比差异有显著性 ,而大肠杆菌的发光值与阴性对照差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;在各分支杆菌中 ,BCG的发光值最高 ,mc15 5次之 ,结核分支杆菌最低。在含利福平的培养基中 ,耐药结核分支杆菌的发光强度比非耐药结核分支杆菌强 ,其强度差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;通过对不同浓度利福平进行筛选试验 ,得出最适于利福平药敏试验的利福平浓度为 2 μg/ml;采用该浓度的利福平对结核分支杆菌标准株和临床分离株进行药敏试验 ,结果与罗氏培养法的结果一致。温敏噬菌体Phage88的检测灵敏度在各种分支杆菌中均大于正常噬菌体Phage 40 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。 结论重组噬菌体可特异地检测结核分支杆菌利福平耐药性 ,灵敏度高 ,可在 72h内得到结果 ,Phage 88的效果优于Phage 40 ,采用温敏株可提高检测的灵敏度和特异性。

用重组噬菌体检测结核分枝杆菌耐药性

目的 建立一种特异性强 ,灵敏度高的结核分枝杆菌 (结核菌 )的检测及药敏试验方法。方法 采用生物发光技术检测可表达荧光素酶的分枝杆菌噬菌体phage 40 ,对不同细菌的发光反应和药敏试验进行测定 ,探讨噬菌体生物发光检测方法的灵敏度和特异性。结果 phage 40对各种分枝杆菌均有特异性发光 ,对非分枝杆菌发光值很低 ,两者差异有显著性意义 ;不同的分枝杆菌发光值有差异 :卡介苗的发光值最高 ,在 4 2× 10 6 ml时最大发光值为 2 84 7mV ,结核菌的发光值最低 ,H37Ra在 6 4× 10 6 ml时最大发光值为 72 4mV ,H37Rv在 7 6× 10 6 ml时的最大发光值是 74 3mV ;在含抗结核药物的培养基中 ,耐药结核菌的发光强度比非耐药结核菌强 ,其强度差异有显著性意义。phage40的药敏试验结果与常规罗氏培养基法符合率一致 ,可在 72h内得到结果。结论 生物发光技术可快速、敏感地检测结核菌 ,通过发光分析 ,建立了一种简便。

结核分枝杆菌能量代谢对吡嗪酰胺抗结核作用的影响

目的研究结核分枝杆菌能量代谢对吡嗪酰胺抗结核作用的机制和作用靶点。方法将饥饿3、5和10 d 的结核分枝杆菌及未经过营养饥饿的结核分枝杆菌分别加入100μg/ml 吡嗪酰胺和脂肪酸、苯甲酸和水杨酸进行处理,观察营养饥饿处理过程对于吡嗪酰胺抗结核分枝杆菌作用的影响,以及酸性物质对吡嗪酰胺抗菌活性的影响。同时用流式细胞仪检测结核分枝杆菌膜电位和平均荧光强度,以探讨吡嗪酰胺的作用机制。结果未经过营养饥饿的结核分枝杆菌和饥饿3、5和10 d的结核分枝杆菌经吡嗪酰胺处理后,菌落形成单位(CFU)分别减少23.08%、37.75%、82.32%和81.03%;营养饥饿5 d 后,结核分枝杆菌的膜电位明显降低,经吡嗪酰胺处理后的膜电位则大幅降低,加入能量物质葡萄糖后,因吡嗪酰胺作用而降低的膜电位可得到恢复。脂肪酸、苯甲酸和水杨酸对于正常生长的和营养饥饿后的结核分枝杆菌均有促进吡嗪酰胺抗菌效果的作用,对营养饥饿后的结核分枝杆菌作用更明显。结论饥饿状态和弱酸能增强吡嗪酰胺对结核分枝杆菌的抗菌作用,吡嗪酰胺可能是通过干扰结核分枝杆菌的膜电位及其能量代谢而产生作用。