氟化物对人多形核白细胞SOD活力变化的影响

目的 通过测定超氧化物歧化酶 (SOD)活力变化 ,观察刀豆蛋白 A(Con A )及与 Na F对多形核中性粒细胞 (PMN)超氧阴离子自由基 (· O2 - )释放的影响。方法 采用体外实验。结果 研究表明 :1在 1ml的反应体系中 ,37℃温育含粒细胞悬液 0 .5 m l(终浓度 1× 10 9/ L ) ,SOD(5 0 NU / m l) ,当加入 Con A后 ,SOD活力明显下降 ,即 · O2 - 的释放量明显高于对照组 ,且 Con A浓度为 2 0 0 mg/ L时 ,SOD活力下降明显 ,即 · O2 - 的释放量最大 ;2上述条件不变 ,加入 Con A(2 0 0 m g/ L) ,当加入 Na F(10 m g/ L) ,温育 30 s时 ,SOD活力下降最明显 ,即·O2 - 释放量最大 ;Na F达到 (5 0 .0 ,10 0 .0 mg/ L)时 ,· O2 - 释放量不增加且趋于平稳。结论 提示 :一定浓度 Con A是人粒细胞产生 · O2 - 有效诱发剂 ;低剂量 Na F(10 .0 m g/ L )可能是粒细胞产生活性氧自由基的耗氧性刺激剂 ,且在较短时间 (30 s)即可刺激产生大量· O2 - ;而高剂量 Na F可能通过产生蓄积性毒性 ,损害 PMN的结构和功能 ,从而影响 · O2 - 的释放。

氟对大鼠脂质过氧化和抗氧化能力的影响

目的 探讨氟对大鼠血和各组织丙二醛 (MDA)水平、超氧化物歧化酶 (SOD)活力及全血谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH- Px)活力的影响。方法 运用动物实验 ,采用饮水加氟的方法。结果 染氟可使大鼠血清、肝脏、肾脏、脑中 MDA含量显著增加 ;全血和肝脏、肾脏、心脏、睾丸的 SOD活性显著降低 ;全血 GSH- Px活性降低。结论 氟可促进机体脂质过氧化 ,抑制抗氧化酶 (SOD,GSH - Px)的活力。

口服谷胱甘肽对氟所致大鼠脂质过氧化的影响

目的 探讨口服不同剂量的谷胱甘肽 (GSH)对氟所致大鼠脂质过氧化的影响。方法 对事先饮用 10天 15 0mg/L 氟化钠 (Na F)的雄性 Wistar大鼠分别给予 6 0、30 0和 6 0 0 mg/kg GSH灌胃 12周 ,同时设对照组 (饮蒸馏水 )和单纯氟染毒组 (15 0 mg/L Na F) ,测定血清 (全血 )、肝、肾、心、睾丸和脑组织中超氧化物歧化酶 (SOD)活性和丙二醛 (MDA)含量。结果 单纯氟染毒可使大鼠血清、肝、肾、脑 MDA含量显著增加 ,全血、肝、肾、心、睾丸 SOD活性显著降低 ;口服GSH后 ,血清、肝、肾、脑 MDA的生成减少 ,肝、肾、心、睾丸和 SOD活性显著上升 ,同时 30 0 mg/kg GSH可显著促进尿氟的排出。结论 氟可使大鼠脂质过氧化作用增强 ,抗氧化能力降低 ,口服 GSH可拮抗氟致脂质过氧化作用 ,增加抗氧化能力。

硒与GSH联合对氟致大鼠脂质过氧化作用的影响

目的 研究抗氧化剂硒及与不同剂量 GSH联合对氟所致脂质过氧化作用的影响。方法 采用动物实验。结果 饮含氟化钠 (15 0 mg/ L)水可使大鼠肝、肾及血清中 L PO含量显著增加 ;SOD活性、GSH- Px活性、GSH含量均显著下降 ;饮含氟水同时给亚硒酸钠 ,可使血清中 L PO含量显著下降 ;SOD活性、GSH- Px活性、GSH含量显著升高。说明硒对氟引起的脂质过氧化有拮抗作用。饮含氟水同时给 Se与不同剂量 GSH后 ,结果显示 :Se与低、中、高 3个剂量 GSH均可使血清中 L PO含量显著下降 ,全血中 SOD活性显著增强 ,呈剂量—效应关系 ,使肝、肾及全血中 GSH- Px活性不同程度增强 ,表明 Se与 GSH联合可有效拮抗氟所致的脂质过氧化作用 ,恢复机体抗氧化能力。结论 1氟可引起大鼠肝、肾及全血中脂质过氧化物含量升高 ,抗氧化能力下降 ;2硒及与不同剂量 GSH联合具有不同程度拮抗氟诱导的脂质过氧化作用 。

氟中毒对机体一氧化氮含量的影响

通过测定染氟大鼠体内GSH和NO的主要代谢物亚硝酸根和硝酸根离子 (NO-2 \NO-3 )的含量 ,来探讨氟对机体NO含量的影响。结果显示 ,无论是尿氟还是粪氟的含量 ,染氟组均高于对照组。与对照组相比 ,染氟组大鼠全血及各器官的GSH含量显著下降 (P <0 0 5 )。染氟可使大鼠肾脏和脑的NO-2 \NO-3 含量下降 ,显著低于对照组 ;而心脏和肝脏的NO-2 \NO-3 含量与对照组相比却显著增高。提示 ,氟可引起机体GSH水平的降低 ,NO含量的异常变化。

Con A诱发人粒细胞超氧阴离子自由基释放模型的建立

运用体外实验，采用测定超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活力的方法，研究人粒细胞在刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）的刺激下超氧阴离子自由基（Ｏ－·２）的释放。结果表明：在１ｍｌ的反应液中，当含有０５ｍｌ的粒细胞悬液（终浓度１×１０６／ｍｌ）、５０Ｕ／ｍｌ的ＳＯＤ和２００ｕｇ／ｍｌ的ＣｏｎＡ，反应条件为ｐＨ＝７４、３７℃温育１分钟时，Ｏ－·２的释放量最大（Ｐ＜００５）。建立起一个新的粒细胞Ｏ－·２释放模型和测定方法。

ELISA高通量筛选PIM靶向抑制剂的研究

背景与目的:Pim家族是具有丝氨酸/苏氨酸激酶活性的原癌基因,包括Pim-1、Pim-2、Pim-3。研究发现,Pim能够抑制细胞凋亡,促进细胞增殖,导致肿瘤发生。本研究利用ELISA反应原理建立高通量筛选体系,对Pim抑制剂进行筛选,为药物的应用和解决恶性肿瘤临床治疗的难题提供研究基础。方法:通过计算机辅助药物设计的手段,以蔓生百部碱母核三环酰胺作为核心结构合成系列衍生物;利用Pim重组蛋白和Bad重组蛋白可以与Ni2+特异性结合的亲和层析原理进行重组蛋白的纯化精制;利用ELISA方法,通过Pim激酶磷酸化促凋亡蛋白分子Bad在112位丝氨酸的反应,建立筛选Pim靶向抑制剂的体系。结果:0.01 mmol/L的IPTG在37℃条件下,诱导Bad蛋白2 h,可以获得最大量的可溶性Bad重组蛋白;0.02%的阿拉伯糖在37℃条件下,诱导Pim-1、Pim-2、Pim-3蛋白3 h,可以获得最大量的Pim重组蛋白;ELISA结果显示,Pim激酶与Bad底物之间的作用存在剂量依赖性反应关系,进而成功建立药物筛选体系;初步筛选出低分子化合物T-18,在体外能有效抑制Pim激酶活性。结论:利用ELISA反应原理建立的筛选药物方法,是一种经济、简单、快速、高效、敏感的筛选手段,并初步筛选出小分子化合物T-18,能够抑制Pim激酶活性,阻断Pim对凋亡蛋白分子Bad的磷酸化过程,进而抑制肿瘤的发生。

异常高表达TCTP通过上调Bcl-xL抑制胰腺癌细胞的细胞凋亡

背景与目的:胰腺癌是一种常见的恶性肿瘤,病死率高,5年生存率<5%,目前尚无很好的治疗方法。翻译控制肿瘤蛋白(translationally controlled tumor protein,TCTP)是一个生长相关的蛋白质,有促进肿瘤生长,抗细胞凋亡的作用,目前有研究显示TCTP在肝癌、结直肠癌中异常高表达,但其在胰腺癌中的相关研究报道较少。本研究通过对TCTP在胰腺癌细胞中的表达及其生物学作用机制分析,致力于寻找新的肿瘤分子靶点,为胰腺癌的靶向治疗提供依据。方法:采用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织中TCTP表达情况;RT-PCR检测胰腺癌细胞株中TCTP的mRNA表达,Western blot方法检测胰腺癌细胞株中TCTP和Bcl-xL蛋白表达水平;免疫荧光染色方法检测TCTP在胰腺癌细胞中的定位;小分子RNA干扰技术沉默胰腺癌细胞中TCTP表达后,利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测胰腺癌细胞的细胞周期和细胞凋亡等生物学指标。结果:与正常胰腺组织相比,胰腺癌组织中TCTP异常高表达,并且主要位于胰腺癌细胞的细胞质中;不同胰腺癌细胞株中TCTP也呈高表达;siRNA沉默胰腺癌细胞中的TCTP,显著抑制细胞的增殖速度和细胞周期进程,促进细胞的凋亡;在胰腺癌细胞中Bcl-xL表达与TCTP表达呈正相关,沉默TCTP可以下调Bcl-xL的蛋白表达。结论:异常高表达TCTP,通过上调Bcl-xL抑制细胞凋亡,从而促进胰腺癌的发生和发展。

低表达miR-33a诱导胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药

背景与目的:胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤。由于其对一线化疗药物吉西他滨的耐受,往往导致预后较差。Micro RNA(mi RNA,mi R)是一类非编码小RNA,参与肿瘤的多种生物学功能。mi R-33a作为代谢相关的mi RNA被广泛研究,而与耐药之间关系的报道较少。该研究通过探讨mi R-33a参与胰腺癌吉西他滨耐药及其作用解析,为胰腺癌化疗提供新的理论依据。方法:采用原位杂交方法检测胰腺癌组织中mi R-33a的表达情况;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各胰腺癌细胞系中mi R-33a的表达情况。利用SW1990和Miapaca-2胰腺癌亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株(SW1990res,Miapaca-2res)及mi R-33a稳定表达细胞株(SW1990-mi R-33a,Miapaca-2-mi R-33a、SW1990res-mi R-33a和Miapaca-2res-mi R-33a);采用细胞毒性实验检测mi R-33a的表达对胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的影响。结果:mi R-33a在胰腺癌组织样本中普遍低表达。与HEK293T正常人胚肾细胞相比,其在各胰腺癌细胞系中均呈低表达。mi R-33a过表达可以增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,能有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。结论:mi R-33a在胰腺癌组织中低表达,导致胰腺癌患者对吉西他滨获得性耐药。增加mi R-33a表达,从而增强了胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,为开发新型胰腺癌分子靶向治疗药物,联合化疗提供新的理论依据。