腹腔镜联合术前介入栓塞在原发性腹膜后肿瘤中的应用体会

目的:探讨经腹腔入路腹腔镜手术联合术前介入栓塞在原发性腹膜后肿瘤中的临床应用。方法:回顾分析2019年5月至2021年4月为24例患者行术前介入栓塞联合经腹腔入路腹腔镜原发性腹膜后肿瘤切除术的临床及病理资料,观察术中情况、术后恢复、随访及生存情况。结果:17例行完全腹腔镜腹膜后肿瘤切除术,5例因重要血管骑跨、被肿瘤包绕或粘连严重中转开腹,2例经腹腔镜辅助小切口完成切除术。肿瘤肉眼完整切除(R0/R1)23例,其中6例联合脏器切除;1例腹腔镜探查见多处侵犯无法根治切除,中转开腹行肿瘤部分(R2)切除。手术时间平均(361±137.6)min,术中出血量200(100,575)mL,术后住院7.5(6,9.75)d。术后发生轻度并发症6例,无围术期死亡病例。22例患者获得随访,随访17~40个月,中位随访25.5个月,1例高分化脂肪肉瘤合并粘液样脂肪肉瘤患者于术后24个月复发,予以保守治疗,术后26个月肾衰竭死亡;1例血管平滑肌脂肪瘤,术后21个月因冠心病死亡;余者均无瘤生存。结论:经充分评估后行术前介入栓塞联合经腹腔入路腹腔镜原发性腹膜后肿瘤切除术安全、可行,复杂腹膜后肿瘤建议行术前栓塞治疗。

Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化中的重要作用

目的探讨Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化(EMT)及侵袭中的重要作用。方法通过缺氧培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,以常氧培养作为对照。Transwell小室侵袭试验检测各组MDAMB-231细胞的侵袭能力;Western blot检测HIF-1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平。通过shRNA稳定转染乳腺癌细胞,再次通过Transwell小室侵袭试验检测缺氧对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,Western blot检测HIF-1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平。结果缺氧可明显诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭,并上调HIF-1α、Gli-1和vimentin蛋白,下调E-cadherin蛋白。靶向沉默Gli-1基因后,缺氧失去了对乳腺癌细胞侵袭和EMT的诱导作用。结论缺氧通过上调Gli-1表达活化Hedgehog通路,诱导乳腺癌细胞侵袭及EMT过程。

外科实验教学中存在的问题与几个重要观念的建立

外科实验教学是外科教学中的关键环节,在培养学生正确临床观念、基础操作技能方面具有重要意义。文章通过观察教学中存在的问题,提出教学中应该重视的几个观念,以及建立这些观念的策略。

Hedgehog信号通路通过上皮细胞间质转分化调控乳腺癌细胞侵袭

目的研究Hedgehog信号通路对乳腺癌细胞侵袭能力的影响及其可能机制。方法通过Western blot和Real-time RT-PCR,检测人乳腺癌细胞MDA-231和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A中SHH、SMO和Gli-1蛋白和mRNA表达。通过小干扰RNA转染MDA-231,以未转染细胞为正常对照组,转染siRNA Control为阴性对照组,Western blot和RT-PCR法检测靶向沉默SMO基因的效果,Transwell小室侵袭试验检测各组MDA-231细胞的侵袭能力,Western blot检测Gli-1、Snail、MMP-9、E-cadherin和Vimentin的表达变化。结果人乳腺癌细胞MDA-231高表达SHH、SMO和Gli-1。通过RNA干扰技术靶向沉默MDA-231细胞SMO基因,其细胞侵袭能力显著下调,其Gli-1、Snail、MMP-9、Vimentin表达下调,E-cadherin表达增强。结论 Hedgehog通路的异常激活与乳腺癌细胞侵袭相关,其机制可能与诱导乳腺癌上皮细胞间质转分化有关。

姜黄素对缺氧诱导的人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响

目的探讨姜黄素对缺氧诱导下人原发性肝癌细胞HepG2上皮细胞间充质转化的影响及其可能机制。方法将HepG2细胞分3组:正常对照组、氯化钴(CoCl2)组和CoCl2加10μmol/L姜黄素组。采用MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Real-timeRT-PCR检测缺氧诱导因子-1α(hy-poxia-induciblefactor-1α,HIF-1α)mRNA表达,Westernblot检测HIF-1α蛋白、E-钙黏蛋白(epithelial-cadher-in,E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达。结果 HepG2细胞被CoCl2诱导缺氧后,细胞增殖及迁移能力增强,HIF-1α蛋白表达上调,上皮标志蛋白E-cadherin表达下降而间质标志蛋白Vimentin表达上调,与正常对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。姜黄素干预缺氧HepG2细胞后,其增殖与迁移能力被明显抑制,同时HIF-1α蛋白表达下降,E-cadherin蛋白表达上调,Vimentin蛋白表达下降,与CoCl2组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3组HIF-1αmRNA表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论缺氧诱导肝癌细胞HepG2增殖和迁移能力的增强可被姜黄素逆转,可能与姜黄素抑制缺氧诱导的HIF-1α蛋白上调和上皮细胞间充质转化有关。

CXCL12/CXCR4轴在胰腺癌-神经交互作用中的研究

目的本研究旨在阐述CXCLl2/CXCR4轴对胰腺癌神经相互作用的影响,探讨CXCLl2/CXCR4在胰腺癌嗜神经过程中的相关分子机制。方法体外培养胰腺癌Panc-1、Miapaca-2细胞,实验分为空白对照组、外源性CXCLl2组及CXCR4受体特异性阻断剂AMD3100组。采用RT-PCR检测胰腺癌细胞CXCR4及CXCL12mRNA的表达,检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及人尿激酶型纤溶酶原激活物(human urokinase plasminogen activator,uPA)mRNA的表达;采用Transwell侵袭实验观察各实验组中细胞侵袭性的变化;提取大乳鼠脊髓背根神经节,建立胰腺癌细胞Miapaca-2与脊髓背根神经节(DRG)共培养模型,倒置显微镜成像系统动态观察不同实验组中神经轴突生长差异。结果胰腺癌细胞Panc-1、Miapaca-2细胞存在CXCR4mRNA的表达,而CXCL12mRNA无表达;两种胰腺癌细胞之MMP-2、MMP-9及uPAmRNA在AMD3100组、对照组、CXCLl2组中的表达差异具有统计学意义(P<0.01);Transwell细胞侵袭性实验中,外源性CXCLl2明显增强Panc-1、Miapaca-2细胞的侵袭性,而AMD3100有效抑制肿瘤细胞的侵袭能力,组间存在显著差异(P<0.05)。胰腺癌细胞与脊髓背根神经节共培养模型中,外源性CXCLl2明显增强神经轴突的生长,促使胰腺癌细胞与神经轴突接触,而AMD3100有效抑制神经轴突生长及与肿瘤细胞接触;细胞共培养144h后各组神经生长轴突数差异有统计学意义(P<0.01)。结论 CXCLl2/CXCR4一方面增强胰腺癌细胞的侵袭能力,促进胰腺癌细胞神经浸润;另一方面,神经元与施万细胞等构成神经纤维分泌CXCL12并通过化学趋化作用,诱导表达CXCR4的胰腺癌细胞向神经迁移,导致神经浸润的发生。

COX-2、VEGF在腹腔粘连组织中的表达及其意义

目的探讨COX-2、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在人体腹腔粘连组织中的表达及其与腹腔粘连发生发展生物学行为的关系。方法收集40例二次手术患者的粘连组织和20例初次手术患者的正常腹膜组织标本,采用免疫组化方法检测粘连组织COX-2、VEGF及微血管密度(microvessel density,MVD)的表达情况并作相关分析。结果 COX-2、VEGF、MVD在粘连组织中的阳性表达显著高于正常腹膜组织(P<0.05);COX-2表达与腹腔粘连程度相关(P<0.05);VEGF表达与腹腔粘连程度及二次手术时间间隔相关(P<0.05);COX-2、VEGF、MVD呈两两正相关。结论 COX-2、VEGF参与人体术后腹腔粘连的发生、发展,可能与COX-2介导的上调VEGF表达等途径促进粘连组织血管生成有关,可作为粘连形成机制中血管发生的重要生物学指标。

血管生成素受体Tie2在直肠癌中的表达及作用

目的探讨Tie2在直肠癌中的表达及其与直肠癌侵袭、转移的关系。方法利用免疫组化S-P法,对10例正常直肠组织与40例直肠癌组织中的Tie2受体表达进行研究。结果Tie2受体定位于癌组织中血管内皮细胞胞浆及胞核,部分癌细胞胞浆也存在阳性表达,直肠癌组织中的Tie2表达阳性率明显高于正常直肠组织(P<0.05),Tie2受体的表达与临床病理中的分化程度、浸润深度、Dukes分期无关(P>0.05),而与淋巴结转移相关(P<0.05)。结论Tie2受体在直肠癌的发展及淋巴结转移中具有重要意义。

沉默CXCR4基因表达抑制胰腺癌增殖和侵袭的体外研究

目的利用RNAi技术构建CXCR4 shRNA表达载体,观察CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖及侵袭能力的变化。方法在不同分化程度胰腺癌细胞株中筛选出CXCR4高表达胰腺癌细胞株,RNAi技术构建CXCR4 shRNA表达载体,转染胰腺癌CXCR4高表达细胞Miapaca-2并应用G418筛选出稳定表达株,Real-time PCR、Western blot实验观察RNAi对CXCR4基因的抑制效率;MTT实验检测CXCR4基因干扰后胰腺癌细胞增殖,应用Transwell侵袭小室观察CXCR4干扰对胰腺癌细胞侵袭转移力的影响。结果胰腺癌细胞株Miapaca-2 CXCR4表达异常增高,特异性CXCR4基因沉默能够在基因和蛋白水平稳定、高效、特异地抑制CXCR4的表达,抑制效率达70%以上。特异性CXCR4 shRNA能够抑制细胞生长,细胞达到对数生长期的时间延长(P<0.05)。Transwell实验证明CXCR4基因干扰后细胞侵袭能力减低(P<0.05),即使SDF-1的刺激也不能够使细胞侵袭能力增加。结论成功构建了针对胰腺癌细胞CXCR4的siRNA载体;CXCR4基因沉默能抑制胰腺癌细胞增殖、侵袭和成瘤能力。

选择性COX-2抑制剂Celecoxib预防大鼠术后腹腔粘连的实验研究

目的探讨Celecoxib对大鼠术后腹腔粘连形成的预防效果及其机制。方法80只SD大鼠随机分为5组:接受腹膜擦损术为A组,接受腹膜擦损术+40 mg/(kg.d)Celecoxib为B组,接受腹膜擦损术+20 mg/(kg.d)Cele-coxib为C组,接受腹膜擦损术+透明质酸钠凝胶为H组,仅接受开、关腹操作的假手术为S组。各组随机半数大鼠于术后第8天和15天处死,肉眼评估大鼠一般情况和腹腔粘连程度,免疫组化法检测粘连组织VEGF和CD34。结果5组大鼠术后粘连程度组间差别具有显著性意义(P<0.01),B组、C组的粘连评分均明显小于H组、A组。VEGF蛋白表达量A组最强,次之分别为H组、C组、B组,S组最弱。CD34表达量A组最强,次之分别为H组、C组、B组,S组最弱。结论术后短期口服Celecoxib可有效预防大鼠术后腹腔粘连形成,效果优于透明质酸钠凝胶。机制可能与抑制COX-2活性后下调VEGF表达,抑制粘连组织新生血管发生有关。

缺氧激活胰腺星状细胞促进胰腺癌进展

目的探讨缺氧在星状细胞活化及胰腺癌进展中的重要作用。方法通过缺氧培养胰腺星状细胞(PSCs)及共培养PSCs与胰腺癌Panc-1细胞,以常氧培养作为对照,免疫荧光检测各组PSCs的活化状态,ELISA检测各组PSCs白介素-6(IL-6)、基质衍生因子-1(SDF-1)、血管内皮生长因子A(VEGF-A)的分泌量,Westernblot检测胰腺癌细胞E-cadherin和Vimentin蛋白表达,Transwell小室侵袭实验检测各组Panc-1细胞的侵袭能力。HIF-1αshRNA稳定转染胰腺癌细胞,免疫荧光检测各组PSCs的活化状态,ELISA检测各组PSCsIL-6、SDF-1、VEGF-A的分泌量。结果缺氧可激活胰腺星状细胞,增加星状细胞IL-6、SDF-1、VEGF-A的分泌量,明显增加星状细胞,促进胰腺癌Panc-1细胞的侵袭能力,并上调HIF-1α和Vimentin蛋白,下调E-cadherin蛋白。靶向沉默HIF-1α基因后,缺氧失去了活化胰腺星状细胞及胰腺癌细胞侵袭和EMT的诱导作用。结论缺氧通过HIF-1α激活胰腺星状细胞诱导胰腺癌细胞侵袭及细胞上皮-间质转分化过程。

慢性放射性肠炎的外科治疗

目的:探讨慢性放射性肠炎的外科治疗指征及方法。方法:回顾性分析2002年3月至2005年12月西安交通大学第一附属医院普通外科治疗的15例慢性放射性肠炎的临床资料。结果:6例肠梗阻行肠切除术,6例肠瘘中有4例一期行肠瘘切除,2例行乙状结肠双腔造瘘术,2例肠穿孔行一期肠造瘘,二期肠切除,1例肠出血行Miles手术。均获成功,所有患者肠功能,营养状态改善,随访6个月至18个月,效果满意。结论:慢性放射性肠炎出现严重并发症应积极手术治疗,肠切除和肠造瘘术配合营养支持是较理想的方法。

白藜芦醇通过抑制炎症因子表达预防术后腹腔粘连的实验研究

目的研究白藜芦醇是否能通过抑制炎症反应预防术后腹腔粘连形成。方法通过开腹术后擦拭腹膜诱导粘连形成。SD大鼠32只分为4组:单纯开腹组、阳性对照组、透明质酸钠组和白藜芦醇组。手术后第8天,通过肉眼观察法进行粘连分级评估;通过组织天狼星红染色评估粘连组织间沉积胶原量;通过酶联免疫吸附法检测血清中白介素-6(IL-6)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平;通过免疫印迹试验检测炎症相关分子环氧合酶-2(COX-2)在大鼠腹膜或粘连组织中的表达。结果白藜芦醇显著减轻大鼠模型的腹腔粘连形成,减少纤维蛋白沉积(P<0.05);明显降低血清IL-6和TGF-β1水平(P<0.05);下调COX-2在大鼠腹膜或粘连组织中的表达(P<0.05)。结论白藜芦醇可以有效预防大鼠模型术后腹腔粘连的形成,可能与其通过抑制大鼠损伤腹膜中炎症因子的表达有关;可能是一种有效的新的抗粘连药物,具有潜在应用价值。

内皮抑素的表达与直肠癌侵袭行为的关系

目的研究内皮抑素(ES)与直肠癌血管形成的关系,探讨其在直肠癌侵袭行为中的作用。方法应用免疫组化方法,检测10例正常直肠组织与40例直肠癌组织中ES蛋白的表达以及微血管密度(MVD)。结果ES在正常直肠组织中的表达明显高于直肠癌组织(P<0.05)。随直肠癌浸润深度的增加及淋巴结转移的发生,组织中ES蛋白的表达与MVD呈负相关关系(P<0.05)。结论ES表达降低,肿瘤血管生成增加,MVD升高,可促进直肠癌的局部浸润及淋巴结转移。

基于数据挖掘分析软组织肉瘤中PRC1的表达与意义及其对肉瘤细胞生长的影响

目的通过数据库挖掘,深入探讨细胞分裂蛋白调节因子1(PRC1)在软组织肉瘤(STS)中的表达及意义,以及沉默PRC1对脂肪肉瘤(LPS)细胞增殖和周期的影响。方法Oncomine数据库提取PRC1在STS组织和癌旁正常组织中的表达数据,随后以TCGA数据库加以验证;OncoLnc数据库提取PRC1的预后信息,分析PRC1表达水平与STS患者预后的关系;CCLE数据库提取PRC1在STS细胞中的表达数据;String网站获取PRC1的共表达分子并绘制PRC1的共表达网络。Western blotting和Real-time PCR检测LPS细胞株SW872及人皮下前脂肪细胞株HPA-s中PRC1的表达;应用siRNA构建沉默PRC1的SW872细胞(SW872-siPRC1),MTT和流式细胞术分别检测沉默PRC1后对SW872增殖及细胞周期的影响。结果Oncomine数据库中共11项研究涉及STS组织和癌旁正常组织中PRC1的表达,PRC1在STS中高表达(P<0.05)。TCGA数据库的验证结果与Oncomine数据库挖掘结果一致。OncoLnc数据库的预后分析结果显示,高表达PRC1的STS患者总体生存率较差(P<0.05)。CCLE数据库的结果提示,PRC1在STS细胞中呈普遍高表达(P<0.05)。String网站绘制PRC1的共表达网络,包括11个节点和55个连接。PRC1在LPS细胞SW872中呈高表达,细胞增殖曲线显示,沉默PRC1的SW872-siPRC1细胞培养48、72 h,较癌旁对照组SW872-NC细胞增殖明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与SW872-NC细胞比较,SW872-siPRC1组细胞G1期的细胞比例明显下降[(40.27±7.42)%vs.(62.01±4.89)%];G2/M期的细胞比例明显上升[(25.65±1.54)%vs.(8.17±0.96)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论PRC1在STS组织和细胞中呈现高表达,与STS预后相关;沉默PRC1基因抑制LPS SW872细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期,可能为STS特别是LPS的临床治疗和预后研究提供潜在靶点。

通过抑制ERK1/2通路诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡的研究

目的应用细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂U0126研究ERK1/2在肝癌细胞增殖、凋亡中的作用。方法以肝癌SMMC-7721细胞株为材料,分为空白对照组及不同浓度的U0126处理组。以MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期及细胞凋亡情况。结果不同浓度的U0126处理后均可明显抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),使处于G0/G1期的细胞明显增多(P<0.05)且呈剂量依赖性,并诱发细胞凋亡发生(P<0.05)。结论阻断ERK1/2通路有可能成为肝癌治疗的重要手段。

头侧优先混合入路:腹腔镜右半结肠癌全系膜切除术的新选择

目的:探讨采用头侧优先混合入路(头侧-尾侧-中间)行腹腔镜右半结肠全系膜切除术的临床效果及应用价值,以期为手术入路提供新的选择。方法:收集2017年6月至2019年4月采用头侧优先混合入路施术的39例右半结肠癌患者(研究组),并与同期接受传统中间入路的44例患者(对照组)进行短期疗效分析。结果:手术均顺利完成,两组患者性别、年龄、BMI等临床资料差异无统计学意义(P>0.05),研究组手术时间\短于对照组,两组术中出血量、手术标本肿瘤直径、淋巴结清扫数量、中转开腹率、吻合口并发症与术后并发症(切口、肺、泌尿系感染、肠梗阻、出血等)发生率、术后住院时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:基于完全结肠系膜切除的理论,头侧优先混合入路在手术难点处理、提高手术安全性与质量控制、教学推广普及方面具有优势,是腹腔镜右半结肠切除术新的入路选择。

混合现实技术在专科医师培训中辅助腹膜后肿瘤手术临床教学的应用研究

目的探讨混合现实技术在普通外科腹膜后肿瘤组专科医师培训中提高原发性腹膜后肿瘤手术临床教学质量方面的应用价值。方法选择2018年4月—2019年11月在西安交通大学第一附属医院普通外科腹膜后肿瘤学组参加专科医师培训的49名学员为研究对象,按照随机抽签的方式将其分为两组,对照组采用以PPT为主的传统教学模式,实验组采用以混合现实技术(MR)为主的教学模式。授课结束后,对两组学员进行试卷考核和满意度问卷调查。结果实验组和对照组的总成绩分别为(76.60±4.58)分、(66.25±4.68)分,二者的差异具有统计学意义(P<0.01)。实验组对混合现实技术教学模式的满意度高于对照组以PPT为主的传统教学模式,差异具有统计学意义(P>0.05)。结论混合现实技术在腹膜后肿瘤手术临床教学中有助于提高教学质量,并激发专科医师的学习兴趣,提升他们对解剖知识的空间理解力。

胰腺癌上皮与间质:环境选择与肿瘤演化

胰腺癌(胰腺导管腺癌,pancreatic ductal adenocarcinoma,PDAC)的一个显著的特征是其丰富的间质反应。胰腺星状细胞(pancreatic stellate cells,PSCs)在胰腺癌的间质反应中是重要的细胞成分,大量的体内外实验表明间质反应在胰腺癌的发展、浸润、转移、耐药性等方面均有重要作用。而针对间质及在间质反应中发挥关键作用的旁分泌Hedgehog通路的临床试验却没有取得预期的效果。更有甚者,去除胰腺星状细胞后加速了胰腺癌的发生发展。胰腺癌基质在肿瘤发生发展中的不同阶段表现出相悖的作用。因此必须进一步探究胰腺癌与间质关系,寻找可能的靶点,在降低胰腺癌对放化疗耐药性、延长胰腺癌中位生存期等方面提供有效指导。