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中国人神经生长因子基因(β-NGF)的扩增、克隆及序列分析
被引量:
8
1
作者
李御宇
黄秉仁
蔡良琬
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994年第5期334-338,共5页
从正常人血白细胞中提取基因组DNA,以此基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增神经生长因子基因,把得到的基因片段重组到质粒pUC12上,经转化、筛选和鉴定得到含有中国人神经生长因子基因(β-NGF)的克隆。用双链末端...
从正常人血白细胞中提取基因组DNA,以此基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增神经生长因子基因,把得到的基因片段重组到质粒pUC12上,经转化、筛选和鉴定得到含有中国人神经生长因子基因(β-NGF)的克隆。用双链末端终止法测定其全部354bp核苷酸顺序。测出的核苷酸顺序与文献报道的顺序有6处不同,据此推导出的氨基酸顺序有3处变化。推测中国人神经生长因子基因具有特殊性。
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关键词
神经生长因子
聚合酶链反应
克隆
分子
序列分析
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职称材料
包涵体中重组人神经生长因子的纯化、复性及鉴定
被引量:
1
2
作者
王欣
马晓骊
+1 位作者
黄秉仁
李御宇
《中国神经免疫学和神经病学杂志》
CAS
1998年第3期152-156,共5页
目的利用简单的纯化工艺,获得具有生物活性的重组人神经生长因子(rhNGF)。方法利用PET-11d-NGF/BL21工程菌表达rhNGF,通过改变培养基成份优化发酵条件。建立了一种在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析的简单、快速、重复性好的rh...
目的利用简单的纯化工艺,获得具有生物活性的重组人神经生长因子(rhNGF)。方法利用PET-11d-NGF/BL21工程菌表达rhNGF,通过改变培养基成份优化发酵条件。建立了一种在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析的简单、快速、重复性好的rhNGF纯化方法。纯化产物用鸡胚背根神经节伸长法测定其生物学活性。结果优化发酵条件后,表达量提高至约占总菌体的10.9%。经一步层析,重组蛋白的纯度可达到80%以上。1BU(生物活性单位)约为0.5μg/mL。结论包涵体复性表明,包涵体的复性与复性液中氧化型与还原型含疏基化合物的比例密切相关。抑制杂菌生长,可明显提高rhNGF的表达量。纯化的rhNGF为分析NGF结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。
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关键词
神经生长因子
包涵体
纯化
复性
鉴定
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职称材料
油菜叶绿体4.5S rRNA与高梁ctDNA杂交及作为探针的应用
3
作者
周强
韩晓光
+4 位作者
许卫东
蒋五玲
程振起
李御宇
赵微平
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
1992年第5期384-387,共4页
提取纯化了油菜叶绿体核糖体4.5S RNA(4.5S rRNA)并在其5’端标记^(32)P,作为探针与高梁叶绿体DNA(ctDNA)进行分子杂交。结果证明油菜4.5Sr RNA可作为公用探针,对一般植物,特别是高等植物进行分子杂交研究。杂交的结果得到两条带。
关键词
分子杂交
4.5S
RRNA
CTDNA
探针
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职称材料
题名
中国人神经生长因子基因(β-NGF)的扩增、克隆及序列分析
被引量:
8
1
作者
李御宇
黄秉仁
蔡良琬
机构
中国医学科学院
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994年第5期334-338,共5页
文摘
从正常人血白细胞中提取基因组DNA,以此基因组DNA为模板,应用PCR方法扩增神经生长因子基因,把得到的基因片段重组到质粒pUC12上,经转化、筛选和鉴定得到含有中国人神经生长因子基因(β-NGF)的克隆。用双链末端终止法测定其全部354bp核苷酸顺序。测出的核苷酸顺序与文献报道的顺序有6处不同,据此推导出的氨基酸顺序有3处变化。推测中国人神经生长因子基因具有特殊性。
关键词
神经生长因子
聚合酶链反应
克隆
分子
序列分析
Keywords
nerve growth factor
polymerase chain reaction
cloning,molecular
sequence analysis
分类号
R338 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
包涵体中重组人神经生长因子的纯化、复性及鉴定
被引量:
1
2
作者
王欣
马晓骊
黄秉仁
李御宇
机构
中国医学科学院基础医学研究所
中国协和医科大学基础医学院分子生物学国家重担实验室
出处
《中国神经免疫学和神经病学杂志》
CAS
1998年第3期152-156,共5页
文摘
目的利用简单的纯化工艺,获得具有生物活性的重组人神经生长因子(rhNGF)。方法利用PET-11d-NGF/BL21工程菌表达rhNGF,通过改变培养基成份优化发酵条件。建立了一种在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析的简单、快速、重复性好的rhNGF纯化方法。纯化产物用鸡胚背根神经节伸长法测定其生物学活性。结果优化发酵条件后,表达量提高至约占总菌体的10.9%。经一步层析,重组蛋白的纯度可达到80%以上。1BU(生物活性单位)约为0.5μg/mL。结论包涵体复性表明,包涵体的复性与复性液中氧化型与还原型含疏基化合物的比例密切相关。抑制杂菌生长,可明显提高rhNGF的表达量。纯化的rhNGF为分析NGF结构与功能及探讨其临床应用提供了材料。
关键词
神经生长因子
包涵体
纯化
复性
鉴定
Keywords
recombinant human nerve growth factor
inclusion body
purification
renaturation
分类号
R338 [医药卫生—人体生理学]
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职称材料
题名
油菜叶绿体4.5S rRNA与高梁ctDNA杂交及作为探针的应用
3
作者
周强
韩晓光
许卫东
蒋五玲
程振起
李御宇
赵微平
机构
清华大学生物科学与技术系
北京师范学院生物系
出处
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
1992年第5期384-387,共4页
文摘
提取纯化了油菜叶绿体核糖体4.5S RNA(4.5S rRNA)并在其5’端标记^(32)P,作为探针与高梁叶绿体DNA(ctDNA)进行分子杂交。结果证明油菜4.5Sr RNA可作为公用探针,对一般植物,特别是高等植物进行分子杂交研究。杂交的结果得到两条带。
关键词
分子杂交
4.5S
RRNA
CTDNA
探针
分类号
S188 [农业科学—农业基础科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中国人神经生长因子基因(β-NGF)的扩增、克隆及序列分析
李御宇
黄秉仁
蔡良琬
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
1994
8
下载PDF
职称材料
2
包涵体中重组人神经生长因子的纯化、复性及鉴定
王欣
马晓骊
黄秉仁
李御宇
《中国神经免疫学和神经病学杂志》
CAS
1998
1
下载PDF
职称材料
3
油菜叶绿体4.5S rRNA与高梁ctDNA杂交及作为探针的应用
周强
韩晓光
许卫东
蒋五玲
程振起
李御宇
赵微平
《生物化学与生物物理进展》
SCIE
CAS
CSCD
北大核心
1992
0
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职称材料
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