微残清颗粒逆转复发/难治性急性髓系白血病(非APL)耐药的临床观察

[目的]观察微残清颗粒逆转复发/难治性急性髓系白血病(R/R AML)耐药的疗效及其机制。[方法]将纳入的72例R/R AML患者随机分为治疗组(39例,微残清颗粒联合常规化疗)和对照组(33例,单用常规化疗)。统计分析两组治疗前后血常规、骨髓原始细胞比例、微小残留病(MRD)、WT1、骨髓缓解率、总生存率(OS)、缓解时间(RT)和不良反应。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、流式细胞术法检测治疗前后患者骨髓细胞多药耐药基因1(MDR1)、P-糖蛋白(P-gp)和细胞周期。[结果]治疗后两组骨髓原始细胞(原始+幼稚)比例和外周血白细胞计数均明显改善(P<0.05);治疗后与对照组比较,治疗组在外周血象和骨髓原始细胞比例方面均得到明显改善(P<0.05)。治疗后两组MRD、WT1水平均较治疗前降低,但与对照组比较治疗组MRD、WT1水平降低较显著(P<0.05)。治疗后骨髓缓解率治疗组(61.54%)明显高于对照组(36.36%,P<0.05)。治疗后12个月总生存率治疗组(69.23%)高于对照组(45.45%,P<0.05),但24个月总生存率治疗组(40.05%)与对照组(27.27%)比较无统计学差异(P>0.05)。对照组12例患者骨髓缓解,最长缓解时间21个月,最短缓解时间5个月,中位缓解时间8.5个月,平均缓解时间9.83个月;治疗组有24例患者病情缓解,最长缓解时间21个月,最短缓解时间2个月,中位缓解时间14个月,平均缓解时间13.63个月。两组之间的平均缓解时间有统计学差异(P<0.05)。治疗后治疗组的P-gp比例低于对照组(P<0.05),而对照组的MDR1表达增加,治疗组的MDR1表达显著降低(P<0.05)。治疗后,治疗组骨髓细胞周期S期和G2/M期比例增加,G0期比例下降,与治疗前和对照组相比有统计学差异(P<0.05)。两组均有骨髓抑制、胃肠道反应、肝肾功能不全、脱发等不良反应,对症治疗后改善,两组不良反应发生率未见统计学差异。[结论]微残清颗粒联合化疗可提高R/R AML患者的临床疗效,其机制可能与微残清颗粒降低MDR1编码P-gp蛋白的表达,诱导白血病细胞进入细胞周期,从而提高化疗药物的敏感性有关。

山茱萸提取物对小鼠造血系统辐射损伤的作用研究

目的研究山茱萸提取物对辐射诱导小鼠造血系统损伤的防护作用。方法选取6~8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠16只,体重20~22 g,随机选取1只分离股骨,体外培养其骨髓细胞,设置细胞对照组、细胞照射组、0.001 mg/ml山茱萸组、0.01 mg/ml山茱萸组。细胞对照组正常培养,细胞照射组进行照射(1 Gy),0.001 mg/ml山茱萸组、0.01 mg/ml山茱萸组给予相应浓度的山茱萸提取物30 min后照射,18 h后观察四组细胞活力,根据细胞活力选择后续实验的山茱萸提取物浓度。比较细胞对照组、细胞照射组、0.001 mg/ml山茱萸组凋亡程度及活性氧水平。将剩余15只小鼠采用随机区组法分为对照组、照射组、山茱萸组,每组5只。照射组、山茱萸组给予2 Gy全身照射,山茱萸组照射前1 h给予山茱萸提取物DMSO溶液0.2 ml(400 mg/kg),对照组和照射组给予等量含8%DMSO的生理盐水。给药7 d后,检测三组外周血血常规和单侧股骨骨髓单个核细胞(BMNC)、造血祖细胞(HPC)、造血干细胞(HSC)数量及其活性氧生成和DNA(γH2AX)损伤程度。结果细胞照射组细胞活力低于细胞对照组,凋亡细胞比例、活性氧水平高于细胞对照组(P<0.05)。0.01 mg/ml山茱萸组细胞活力与细胞照射组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。0.001 mg/ml山茱萸组细胞活力高于细胞照射组,凋亡细胞比例、活性氧水平低于细胞照射组(P<0.05)。照射组白细胞、红细胞、血小板、HPC、HSC水平均低于对照组(P<0.05)。三组BMNC水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。山茱萸组红细胞、HPC水平高于照射组(P<0.05),两组白细胞、血小板、HSC水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。三组BMNC、HPC、HSC中活性氧水平及BMNC中γH2AX水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。照射组HPC、HSC中γH2AX水平高于对照组,山茱萸组HPC、HSC中γH2AX水平低于照射组(P<0.05)。结论山茱萸提取物对造血系统辐射损伤有一定的预防作用。

聚乳酸微球的制备

利用聚乙烯醇和阿拉伯胶作为修饰剂,采用溶剂挥发法制备聚乳酸微球,通过正交实验设计研究了不同的修饰剂、有机溶剂、聚乳酸浓度、 表面活性剂、搅拌速度等因素对微球粒径的影响,并对制备的微球粉体学性质进行了初步研究.结果表明,在本文的工艺流程下制备的微球具有较均一的粒径,平均粒径为2.0～3.0μm,微球表面平滑,呈球形.

辐射对小鼠免疫系统损伤远期影响的研究

目的:探讨4Gy 137Csγ射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对LPS刺激反应性的远期影响。方法:将C57BL/6实验小鼠分为假照射组和照射组,照射组给予4 Gy照射。照射10周后小鼠按组别分别提前24 h和1 h腹腔注射LPS(20mg/kg),对照组注射生理盐水。取外周血进行白细胞计数及CD4、CD8、B220细胞比例检测,脾脏与胸腺称重,计算脏器指数。冲洗单侧股骨进行有核细胞计数。结果:与假照射对照组小鼠比较,照射对照组小鼠的CD4,CD8细胞比例和脾脏、胸腺指数显著升高,B细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS刺激1 h后,照射组小鼠的CD4细胞较假照射组小鼠显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LPS24 h后,与假照射组小鼠相比,照射组小鼠CD8细胞比例显著降低,胸腺指数显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:小鼠4 Gy照射10周后,免疫系统尚未完全恢复;在接受LPS刺激后,两组小鼠反应也有差异。辐射对小鼠免疫系统损伤的远期影响有待进一步研究。

p38抑制剂对辐射损伤小鼠中免疫细胞的作用

目的:探讨利用p38抑制剂SB203580(SB)抑制p38通路对6Gy受照小鼠免疫细胞辐射损伤的作用。方法:取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、照射组和SB组,每组10只。SB组和照射组小鼠接受以6Gy137Csγ射线的全身照射。SB组小鼠照射24h后腹腔注射SB(15mg/kg),每2d1次,共给药5次,其余2组小鼠腹腔注射对照溶液。小鼠受照10d后处死,取外周血计数,流式细胞仪检测CD4、CD8、B220表达,取骨髓细胞测定ROS水平。结果:照射组外周血白细胞(WBC)、CD8、B220细胞比例较对照组明显下降,骨髓ROS水平升高(P<0.01)。SB组外周血CD8比例较照射组上升,骨髓ROS水平下降(P<0.01)。结论:SB对小鼠6Gy照射后造血免疫损伤有一定的缓解作用,其机制可能与其降低照射后骨髓细胞ROS水平有关。

p38 MAPK通路在造血系统调节中的作用

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)超家族是介导细胞反应的重要信号系统。研究发现,该超家族亚族p38 MAPK通路在造血细胞调节过程中占据重要地位,抑制p38 MAPK通路可一定程度缓解衰老或者疾病引发的造血细胞功能下降。深入研究p38 MAPK通路在造血系统中的下游作用底物,将对临床造血干细胞的应用以及造血系统疾病发病机制研究提供新的思路。

造血干细胞衰老机制研究

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)具有自我更新功能和生成多个系列免疫造血细胞的多分化功能,终生维持机体造血。证据显示HSC会出现衰老,并与机体老龄化及各种损伤情况下出现造血系统应激能力下降有关。DNA损伤反应在诱导HSC衰老的各种机制中起重要作用。HSC发生衰老的机制的研究将对降低放化疗毒副作用,保护辐射等环境因素的损伤,了解白血病的干细胞起源及治疗逃逸机制提供有价值的科研资料,为药物筛选的靶点提供试验依据。

肿瘤干细胞靶向治疗

多种肿瘤中都存在肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC),这部分细胞具有自我更新能力和分化潜能,是肿瘤生长、增殖和转移的根源。此外,肿瘤干细胞具有正常干细胞的自我保护特性,如有效的DNA修复、高表达多药耐药型膜转运蛋白以及处于相对静止状态及拥有特定的微环境,使其能够逃逸现有的肿瘤治疗手段,导致肿瘤复发。针对这些保护机制,并利用肿瘤干细胞与正常干细胞的之间的差异进行靶向治疗,可能达到根治肿瘤的疗效。

右旋蛋氨酸对小鼠造血系统辐射损伤的作用

本研究旨在探讨右旋蛋氨酸(D-methionine,D-met)对造血系统辐射损伤的影响。将C57BL/6小鼠分为对照组、照射组、D-met 300 mg/kg组+照射组和D-met 1000 mg/kg+照射组。对照组小鼠接受假照射,其余3组小鼠接受7.5 Gy,1、4、8 Gy和1 Gyγ线的全身照射,分别用于小鼠存活率、骨髓细胞存活率、外周血白细胞数及其分类数以及骨髓细胞集落形成能力的检测。D-met于照射前30 min腹腔注射。结果表明,300和1000 mg/kg D-met均未显著提高7.5 Gy照射小鼠的存活率;10-2、10-3和10-4mol/L D-met能明显提高1、4、8 Gy照射小鼠骨髓细胞的存活率;300和1000 mg/kg D-met虽能使受1 Gy全身照射小鼠的外周血白细胞数有所增加,但与照射小鼠相比却无统计学差异,而对骨髓细胞集落形成能力具有明显的促进作用。结论:D-met可有效缓解辐射对骨髓细胞的杀伤作用,提高受照小鼠骨髓细胞的存活率,促进照射小鼠造血功能的恢复。

SB203580对受辐射小鼠免疫细胞的影响

目的探讨p38抑制剂SB203580(SB)对辐射诱导免疫细胞的影响。方法将C57BL/6小鼠分为对照组、照射组、SB组。对照组接受假照射,其余2组进行2Gy全身照射。SB 15 mg/kg腹腔注射,照射24 h后开始给药,隔日1次,共给药5次。SB末次给药24 h后处死小鼠,取外周血进行分型CD4、CD8、B220检测,取骨髓测定细胞内活性氧(ROS)。结果照射组外周血白细胞,B220比例明显下降,CD4细胞比例及骨髓细胞ROS水平显著增加,与对照组比较差异显著(P<0.05)。SB组外周血淋巴细胞比例升高,骨髓ROS水平下降,与照射组相比差异显著(P<0.05)。结论 p38抑制剂对辐射引起的免疫细胞分型变化有一定的影响。

SB203580对受照小鼠免疫细胞的作用研究

目的:探讨p38抑制剂SB203580(SB)在免疫细胞辐射损伤中的作用。方法:将C57BL/6小鼠分为对照组、照射组、SB组。对照组接受假照射,对其余两组进行4G y全身照射。SB203580 15m g/kg腹腔注射,照射24h后开始给药,隔日给药共给药5次。SB末次给药24h后处死小鼠,取外周血进行分型CD4、CD8、B220检测,取骨髓测定ROS。结果:SB组与照射组比较,外周血白细胞增加,骨髓ROS水平与照射组比较有所下降(P<0.05)。结论:p38抑制剂能降低受照小鼠骨髓细胞的ROS水平,对4G y照射后的外周血无显著保护作用。

血必净注射液对2Gy照射小鼠造血系统的保护作用

目的:探讨血必净注射液对辐射诱导小鼠造血系统损伤的影响。方法:将ICR小鼠分为对照组、照射组、血必净组。对照组接受假照射,对其余两组进行2Gy全身照射。血必净组小鼠0.4ml/kg腹腔注射,照射前3d开始给药,持续给药8d。血必净末次给药24h后处死小鼠,取外周血和单侧股骨细胞进行计数,取胸腺和脾脏计算脏器指数,检测骨髓细胞CFU-GM。结果:与对照组比较,照射组小鼠外周血白细胞和骨髓有核细胞计数、胸腺和脾脏指数、CFU-GM均明显下降(P<0.05),而血必净组小鼠除胸腺指数外也均显著下降(P<0.05)。与照射组相比,血必净组小鼠外周血白细胞、胸腺指数及CFU-GM有显著提高(P<0.05)。结论:血必净注射液对辐射引起的造血系统损伤有一定的保护作用。

肿瘤治疗的新靶标:肿瘤干细胞

近年来研究显示,在一些肿瘤中存在一些能够自我更新和分化增殖的干细胞即肿瘤干细胞。本文重点介绍了关于肿瘤干细胞的理论,研究现状,研究方法以及问题,推测肿瘤干细胞的深入研究将会对今后肿瘤防治产生巨大影响。

二肽基肽酶-4在造血和移植中的作用

二肽基肽酶-4(DPP-4)具有剪切多肽N端第2个氨基酸为丙氨酸、脯氨酸的功能,其作用底物包括许多与造血系统调节有关的趋化因子、克隆刺激因子和白细胞介素。近期研究表明,DPP-4对集落刺激因子的剪切会改变其功能,进而影响造血干祖细胞及移植,但关于DPP-4的调节以及对大部分因子剪切后的影响仍未阐明,本文总结了DPP-4抑制的相关研究进展,提出今后的研究方向。

血必净注射液对受射小鼠造血系统的保护作用

血必净注射液是临床上用于治疗呼吸系统和泌尿系统炎症及多器官功能障碍综合征等多种疾病的一种复方中药，本实验初步探讨了血必净注射液对辐射诱导小鼠造血系统损伤的作用及机制。在ICR小鼠接受7．5Gy全身照射后，分别给予腹腔注射高剂量（1．2ml／kg）、

辐射对小鼠免疫系统损伤远期影响研究

目的：免疫系统对辐射极为敏感，受照后会形成损伤，且恢复也很缓慢。本研究探讨4Gy Csy射线一次性全身照射小鼠免疫细胞对LPS刺激反应性的远期影响。

乳酸乳球菌L9所产类细菌素Lactococcin GJ-9的初步研究

采用双层平板法 ,自 117株分离的乳酸菌中筛选出一株具有较广抑菌活性的菌株L9,经鉴定为乳酸乳球菌 (Lactococcuslactics)。在排除酸性产物和过氧化氢的干扰后 ,L9菌株发酵液对溶壁微球菌 (Micrococcuslysodeikticus)、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)和枯草杆菌 (Bacillussubtilis)等革兰氏阳性菌以及大肠杆菌 (Escherichiacoli)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium )等革兰氏阴性菌有强烈的抑制作用。表明该菌株产生一具有广谱抑菌活性的物质。经胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K处理后发酵液抑菌活性不变 ,表明该活性物质为非蛋白成分 ,属于类细菌素 ,命名为LactococcinGJ 9。它具有很好的热稳定性 ,在酸性条件下稳定且活性高 ,对蛋白酶不敏感 。

小鼠铁过载模型的建立及其对骨髓造血功能的影响

目的通过给小鼠腹腔注射右旋糖酐铁,建立小鼠铁过载模型并观察铁过载对小鼠骨髓造血功能的影响。方法使用随机区组法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、低剂量铁剂组(质量浓度为12.5 mg/ml)、中剂量铁剂组(质量浓度为25 mg/ml)和高剂量铁剂组(质量浓度为50 mg/ml)。对照组小鼠腹腔注射生理盐水0.2 ml/次,低、中、高剂量铁剂组小鼠腹腔注射右旋糖酐铁0.2 ml/次,每3天注射1次,共注射6周。6周后观察小鼠状态及骨髓、肝脏、脾脏等脏器改变,分析骨髓单个核细胞(BMMNCs)可变铁池水平,并检测外周血象及BMMNCs数目和功能。结果小鼠肝脏、脾脏、骨髓均出现铁过载,骨髓铁过载主要存在于骨髓基质中,BMMNCs内可变铁池无改变;低、中、高剂量铁剂组小鼠骨髓细胞粒-单系集落形成单位数和对照组相比均显著下降(P<0.05);且中、高剂量铁剂组小鼠骨髓细胞红系集落形成单位数、混合系集落形成单位数和对照组相比也显著下降(P<0.05);BMMNCs计数无变化;低、中、高剂量铁剂组外周血白细胞、血小板、红细胞、血红蛋白和对照组相比,差异均无统计学意义,血小板数低剂量铁剂组(780.7±39.60)×109/L、中剂量铁剂组(676.2±21.43)×109/L、高剂量铁剂组(587.3±19.67)×109/L,和对照组(926.0±28.23)×109/L相比有轻度下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过腹腔注射右旋糖酐铁,成功建立了小鼠铁过载模型。进一步研究显示铁过载不但对肝脏、脾脏造成损害,而且可以损伤骨髓造血功能,但对正常骨髓功能的损伤未引起外周血象的改变。本模型为深入研究铁过载对骨髓造血功能的影响及作用机制提供了实验基础。

乳酸乳球菌L9产类细菌素lactococcin GJ-9发酵条件的研究

对产类细菌素乳酸乳球菌L9的发酵条件进行了研究。结果表明 :产类细菌素最适培养基为MRS,培养基的最适初始pH值为 6 5 ;产类细菌素最适温度为 32℃ ;0 2 %Tween 80最适类细菌素的产生。并通过正交试验确定L9产类细菌素的最佳培养基为 :大豆蛋白胨 1 %、酵母膏1 5%、葡萄糖 1 2 5 %、K2 HPO40 2 %、NaAc 0 5 %、MgSO4·7H2 O 0 0 58%、柠檬酸三铵 0 2 %、MnSO4·4H2 O 0 0 0 5 %、Tween 80 0 2 % ;初始 pH6 0。经过优化 ,发酵液效价提高了 61 0 7%。

不同剂量137Csγ-射线辐射后造血干/祖细胞辐射敏感性差异研究

目的探讨不同剂量^(137)Csγ-射线辐射后不同时间点C57BL/6小鼠造血细胞辐射敏感性的差异。方法采用随机区组法将72只雄性C57BL/6小鼠分为对照组和2、4、6 Gy照射组。照射组给予2、4、6 Gy^(137)Csγ-射线一次性全身照射,对照组给予假照射。分别于受照后14 d、35 d和56 d断颈处死小鼠,取外周血进行血象测定,取骨髓细胞测定有核细胞(BMNCs)、造血干细胞(HSCs)和造血祖细胞(HPCs)数目。结果与对照组相比,照射组小鼠造血系统受到不同程度损伤。外周血白细胞计数(WBC)、红细胞数(RBC)、血小板(PLT)和血红蛋白含量(HGB)均有不同程度的降低,其中HGB对辐射较不敏感,RBC在受照后35 d已基本恢复至正常值,WBC和PLT对辐射较敏感;6Gy照射对WBC和PLT影响较重,恢复缓慢。照射后14 d,照射组BMNCs、HSCs和HPCs数目均低于对照组;照射后35 d和56 d,6 Gy照射组BMNCs和HPCs数目均低于对照组(均P<0.05),2、4 Gy照射组BMNCs和HPCs数目与对照组差异无统计学意义。照射后35 d,照射组HSCs数目均低于对照组;照射后56 d,4、6 Gy照射组HSCs数目均低于对照组(均P<0.05),2 Gy照射组HSCs数目与对照组差异无统计学意义。结论不同剂量^(137)Csγ-射线辐射对小鼠造血系统造成不同程度的损伤,且辐射对HSCs的损伤是持久性的。