β冠状病毒通用RT-PCR检测方法建立及昆明地区动物带毒状况调查

为调查昆明地区猪、牛及鼠β冠状病毒携带状况及充当重症急性呼吸综合征冠状病毒(SARS-CoV)-2中间宿主的可能性,建立基于β冠状病毒属RNA依赖性RNA聚合酶(RdRp)的特异性逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测方法,并用于2020—2021年昆明9个县区具有呼吸道或消化道症状的猪(186份)、牛(164份)及随机捕获的鼠(140份)的β冠状病毒核酸检测;对RdRp阳性样品进一步进行SARS-CoV-1和SARS-CoV-2刺突蛋白(S)基因特异性扩增。建立的RT-PCR方法能特异扩增β冠状病毒属各病毒种,对SARS-CoV-2核酸检测的灵敏度为310个质粒拷贝;应用该法检测的490份样品中,猪、牛、鼠的β冠状病毒检出率分别为5.91%、9.76%和8.57%,但RdRp阳性样品未检出SARS-CoVs的S基因同源片段。成功建立可特异检测β冠状病毒属的通用RT-PCR方法,应用该法联合S基因扩增调查昆明地区猪、牛及鼠,未发现其携带与SARS-CoVs的S基因有联系的β冠状病毒。