地塞米松对人肝癌细胞系酪氨酸转氨酶mRNA表达的影响

目的 :观察地塞米松 (Dex)对人肝癌细胞系 (SMMC- 772 1细胞 )酪氨酸转氨酶 m RNA表达的影响。 方法 :采用定量逆转录 -多聚酶链反应 (RT- PCR)检测酪氨酸转氨酶 m RNA。 结果 :Dex能够诱导 SMMC- 772 1细胞酪氨酸转氨酶 m RNA的表达 ,且具有剂量依赖性和时间依赖性特点 ,但诱导倍数偏低。 结论 :SMMC- 772

地塞米松对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞酪氨酸转氨酶活性诱导能力丧失的机制研究

目的:通过测定人肝癌SMMC 7721细胞酪氨酸转氨酶(TAT)cDNA序列,并观察其糖皮质激素受体(GR)通路是否存在异常,以探讨地塞米松(Dex)丧失诱导SMMC-7721细胞TAT活性的机制。方法:RT-PCR扩增SMMC-7721细胞全长TAT cDNA并进行测序;采用实时定量PCR观察Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA表达的影响,并与HepG2细胞作对照;采用电穿孔法将GR特异性报告基因GRE-tk-LUC及GRE-MMTV CAT分别瞬时转入SMMC-7721细胞中,观察Dex对荧光素酶(LUC)和氯酶素乙酰转移酶(CAT)表达的影响,并与HepG2细胞作对照。结果:SMMC-7721细胞TAT cDNA中第576位碱基存在同义突变;Dex能够诱导SMMC-7721细胞中TAT mRNA的表达,最大诱导倍数为2.22,明显低于HepG2细胞(15.1倍,P<0.01);Dex诱导了SMMC-7721细胞LUC及CAT的表达,与HepG2细胞无显著差异。结论:Dex对SMMC-7721细胞TAT mRNA诱导水平降低,可能是TAT活性不增高的主要原因。

miR-296靶向FGFR1对卵巢癌细胞生长、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-296靶向成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)对卵巢癌细胞生长、迁移及侵袭的影响。方法体外培养人SK-OV-3细胞,并将细胞分为对照组、miR-296 NC组、miR-296 mimics组、miR-296 mimics+FGFR1 NC组、miR-296 mimics+FGFR1组。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-296、FGFR1 mRNA水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力;Transwell法检测细胞迁移和侵袭能力;蛋白免疫印迹(WB)法检测增殖、迁移和侵袭蛋白的表达;双荧光素酶报告实验分析miR-296与FGFR1的靶向关系。结果与对照组比较,miR-296 mimics组miR-296表达显著升高,FGFR1 mRNA表达显著降低(P<0.05);与miR-296 mimics组比较,miR-296 mimics+FGFR1组miR-296表达差异无统计学意义(P>0.05),FGFR1 mRNA表达显著升高(P<0.05)。与对照组比较,miR-296 mimics组细胞活力、迁移和侵袭细胞数目、蛋白FGFR1、增殖蛋白β-catenin、CyclinD1、迁移蛋白MMP-2、侵袭蛋白N-cadherin表达显著降低,E-cadherin蛋白表达显著升高(P<0.05);与miR-296 mimics组比较,miR-296 mimics+FGFR1组细胞活力、迁移和侵袭细胞数目、蛋白FGFR1、β-catenin、CyclinD1、MMP-2、N-cadherin表达显著升高,E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05);双荧光素酶报告实验表明miR-296和FGFR1存在靶向关系。结论miR-296可能通过靶向FGFR1抑制SK-OV-3细胞EMT途径,抑制细胞生长、迁移和侵袭。

创伤患者p38MAPK活化和炎症因子表达的变化

目的探讨不同创伤程度患者体内p38MAPK活化和炎症因子表达的变化及其意义。方法不同创伤程度患者在创伤后6h内和第1、3和7天分别采集外周血,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测白细胞中p38MAPK的活化(磷酸化)水平,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血液中TNFα和IL-6水平。结果创伤6h内患者血液中p38MAPK的活化水平与正常人比较显著增加且达到高峰(P<0.01),并持续活化至第7天(P<0.05);创伤患者体内的TNFα和IL-6水平也显著增强(P<0.05),且都在创伤后第1天达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降,在创伤后第7天逐渐恢复至正常水平(P>0.05);p38MAPK的活化程度及TNFα、IL-6水平都随创伤程度的增加而升高(P<0.05),p38MAPK的活化水平与TNFα、IL-6水平呈正相关(P<0.05),TNFα水平与IL-6水平也呈正相关(P<0.05)。结论创伤患者体内的p38MAPK信号通路被激活,p38MAPK活化引起炎症因子表达升高,表明p38MAPK信号通路在创伤后的炎症反应中发挥重要作用。

热应激对大鼠肝组织及人前列腺癌PC-3细胞RhoB表达的影响

目的:观察烫伤后大鼠肝脏组织及热应激后前列腺癌PC-3细胞小G蛋白RhoB表达的变化,探讨热应激对体内外RhoB表达的影响。方法:制备雄性SD大鼠30％体表面积Ⅲ度背部烫伤模型,烫伤后2、4、8、16 h取相应大鼠肝脏组织(n= 6),应用RT-PCR和Western印迹分析测定RhoB mRNA和蛋白水平,并以正常大鼠肝脏组织作对照(n=6)。制备人前列腺癌PC-3细胞热应激模型,热应激后0．5、1、2、4、8 h取细胞检测RhoB的表达,并以未处理细胞作对照。结果:烫伤后4 h,大鼠肝组织RhoB mRNA表达量最高,为正常对照的3．2倍(P<0．01),8 h开始下降;而RhoB蛋白表达量在烫伤后8 h最高(P<0．01)。PC-3细胞RhoB mRNA在热应激后2 h时开始上调;4 h时达到最大值,约为对照的2．8倍(P<0．01);热应激后8 h RhoB蛋白表达量最高(P<0．01)。结论:在体内、体外实验中热应激均能上调小G蛋白RhoB mRNA和蛋白的表达。

创伤患者p38MAPK信号通路的变化及其临床意义

目的探讨不同创伤程度患者体内p38MAPK信号通路的变化及意义。方法不同创伤程度住院患者150例，根据创伤度评分（ISS）分为三组：ISS≤15分（L-ISS）组、ISS 16～25分（M-ISS组）、ISS≥25分（H-ISS）组，每组50例，同时选取30名健康献血者作为对照组。不同创伤程度患者在创伤后6h内和第1、3、5、7天分别采集外周血，对照组采集外周血一次，采用实时定量PCR（RQ-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测白细胞中p38MAPK的基因表达、蛋白表达及活化（磷酸化）水平变化。结果创伤6h内不同创伤程度患者血液中p38MAPK的基因表达与正常人比较均显著增加（P〈0．05），在创伤后第1天达到高峰（P〈0．01），并持续高表达至第7天（P〈0．05）；在创伤后第1天不同创伤程度患者体内的p38MAPK蛋白表达和活化（磷酸化）水平也显著增强（P〈0．05）；进一步的试验发现，p38MAPK的基因表达、蛋白表达和活化（磷酸化）程度都随创伤级别的增加而升高（P〈0．05）。结论创伤患者体内的p38MAPK信号通路被激活，且创伤程度与p38MAPK的表达和活化呈正相关，表明p38MAPK信号通路在创伤的病理机制中发挥重要作用。

长学制临床医学专业病理生理学自主设计性实验教学探讨

病理生理学在医学教学中是联系基础医学和临床医学的"桥梁"课程。实验教学在病理生理课程教学过程中占据着非常重要的地位。传统的验证性实验是一种"从书本来,到书本中去"的教学模式,不利于发挥学生的主观能动性和培养创造性思维。自主设计性实验教会学生如何发现问题、提出假说、搜集资料、设计实验、实验步骤与方法等技能,培养学生创新、实践能力。第二军医大学在长学制临床医学专业开设病理生理学自主设计性实验,锻炼了学生的创新思维能力,也暴露了课程设置上的不足,为之后课程的优化提供参考。

肺表面活性物质治疗呼吸窘迫综合征给药方式的研究进展

肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)作为一种"救命药"已常规用于新生儿呼吸窘迫综合征的防治,但对急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的治疗效果仍存在一定的争议。PS的给药方式作为影响其疗效的关键因素受到了医学界的广泛重视,现有的PS给药方法主要有气管导管滴入法、经纤维支气管镜滴入法和超声雾化吸入法,各有优缺点,而操作简便的、非侵袭性的、有效的给药方式是未来继续研究的方向。

雾化吸入肺表面活性物质对急性肺损伤大鼠血液氧合水平的影响

目的探讨雾化吸入肺表面活性物质(PS)对油酸型急性肺损伤(ALI)大鼠血液氧合水平的影响。方法 43只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雾化生理盐水组和雾化PS组。颈外静脉注入油酸(0.2 ml/kg)复制ALI模型,约1 h后雾化生理盐水组和雾化PS组分别雾化吸入生理盐水和160 mg PS。实验过程中测定大鼠血气分析指标和呼吸频率(BR)。计算大鼠存活率。结果雾化吸入PS后,大鼠动脉血氧分压(PaO2)及动脉血氧饱和度(SaO2)均逐渐增加,至雾化吸入4 h后,PaO2及SaO2分别增加至99.4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)及98.2%,与雾化生理盐水组相比,差异有统计学意义(P<0.05);大鼠BR自雾化吸入PS 0.5 h后即开始下降,雾化吸入PS 4 h后,BR降至100次/min,低于同时间点的雾化生理盐水组(P<0.05)。雾化PS组大鼠的存活率为100%,与雾化生理盐水组(60%)相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论雾化吸入PS能明显提高ALI大鼠血液的氧合状况,改善大鼠的肺功能及提高其存活率。

“以学生为中心”的教学理念在长学制医学生病理生理学教学中的实践与体会

长学制医学教育要达到的目标是培养学生成为＂有高尚的思想道德和良好的职业素质,富有人文精神和创新意识,实践能力强,发展潜力大,能参与国际医学科学竞争的高级临床医学专门人才＂。病理生理学是一门研究疾病发生、发展、转归的规律和机制的学科,是临床医学与基础医学之间的＂桥梁＂。

组织因子:过去和现在

组织因子作为因子Ⅶ的辅因子和受体,是生理性凝血过程中最重要的启动因子。近年来,在组织因子分子结构、基因的表达调控以及与因子Ⅶ之间相互作用等方面的研究取得了很大进展。对组织因子的进一步研究可能获得通过控制组织因子表达治疗相关疾病的方法。

以转化医学的理念指导病理生理学教学探讨

病理生理学是联系基础医学和临床医学的桥梁课程,为临床课程的学习打下坚实的基础。转化医学是以临床上的需求来确定基础研究的方向和内容,再将研究的成果用于临床实践。它涉及基础医学、临床医学等多学科,是跨学科的研究。病理生理学与转化医学的核心理念都是将基础医学与临床医学紧密联系。在病理生理学的教学中充分体现转化医学的思想,以提高教学质量。

MicroRNA在乳腺癌中的作用

MicroRNA是一种小分子RNA,在基因的转录后调控中发挥着重要作用。研究证实microRNA与乳腺癌之间有很强的相关性。它能够通过抑制雌激素受体、抑制乳腺癌干细胞以及作用于乳腺癌相关蛋白等多种方式抑制乳腺癌的发生,同时它在乳腺癌的发生及其转移中也可起到一定的促进作用。本文对一些乳腺癌相关的microRNA及其作用作一综述。

糖皮质激素受体与肿瘤发生发展的关系

糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)被激活后,通过与核内靶基因上的一段特定DNA序列结合,从而调控基因转录,发挥各种生物效应。GR广泛参与了生物体内多种生物学行为,在肿瘤发生发展调控方面,发挥了非常复杂的作用,表现出明显的组织特异性,在不同来源组织及细胞中的作用差异巨大。本文分析了GR与肿瘤迁移、侵袭、增殖等方面的关系。此外,本文还针对GR与其他核受体及microRNA之间的相互作用,对肿瘤的影响进行了综述,进一步阐述GR介导的生物学效应对肿瘤治疗及预后的影响。

核受体共激活因子及其转录调节

共激活因子是包括核受体在内的转录因子调节基因转录过程中所需要的。它们通常以复合物的形式存在,能介导核受体和基础转录机器成分之间的相互作用,并能修饰组蛋白,导致染色质重构,从而促进基因表达。共激活因子本身的特异性和活性也受到各种共价修饰的调节。

PC-3细胞中雄激素受体突变体的表达和转录激活功能的研究

目的:探讨前列腺癌中发现的4 种雄激素受体(androgen receptor,AR)的点突变对AR转录激活功能的影响。方法:将野生型AR(wtAR)或AR突变体的表达载体与报告基因(pMMTV LUC)及内参照基因(pRLSV40 LUC)质粒共转染入PC 3细胞中,分别用雄激素受体的激动剂二氢睾酮(DHT)以及其他甾体激素(雌二醇及孕激素)处理细胞,24 h后用双荧光素酶报告基因分析系统检测报告基因的活性,同时用Western印迹法检测AR蛋白。结果:在DHT作用下,G142V、D221H突变体对报告基因的诱导水平高于wtAR,是wtAR的近1.30 倍(P<0.05),其余突变体与wtAR相比对报告基因的诱导水平无显著差异;在雌二醇(E2)与孕激素(PROG)作用下,E872Q对报告基因的诱导水平高于wtAR,分别为wtAR的1.27、1.47倍(P<0.05)。结论:G142V、D221H点突变使AR突变体转录激活功能增强,E872Q点突变可能影响了AR的配体结合特异性,上述结果有助于阐明前列腺癌由雄激素依赖性转为非依赖性的机制。

血小板激活因子和维甲酸对中性粒细胞功能和ICAM－1，ELAM－1表达的影响

目的：探讨血小板激活因子（ＰＡＦ）和维甲酸（ＲＡ）对多形核中性粒细胞（ＰＭＮ）功能和肺微血管内皮细胞（ＰＭＶＥＣ）ＩＣＡＭ－１和Ｅ－选择素（ＥＬＡＭ－１）表达的影响。方法：采用作者创建的无创性分离法分离培养ＰＭＶＥＣ；将ＰＡＦ和ＲＡ分别加入培养有ＰＭＶＥＣ的９６孔板中，观察二者对ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ粘附的影响；ＥＬＩＳＡ法测定ＰＭＶＥＣ上ＥＬＡＭ－１和ＩＣＡＭ－１的表达；测定ＰＡＦ和ＲＡ对ＰＭＮ的趋化性、聚集和酸性磷酸酶的释放的影响。结果：（ｌ）ＰＭＶＥＣ用ＰＡＦ处理３．５ｈ后，它与ＰＭＮ的粘附率从５７．３％增加到７２．８％（Ｐ＜０．０１）。而用ＰＡＦ处理ＰＭＮ同样可增加ＰＭＮ－ＰＭＶＥＣ的粘附率。（２）ＲＡ可阻断未刺激ＰＭＮ与ＰＡＦ刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附，但对ＰＡＦ刺激的ＰＭＮ与未刺激的ＰＭＶＥＣ之间的粘附却无作用。（３）ＰＡＦ可增加ＰＭＶＥＣ上ＩＣＡＭ－ｌ和ＥＬＡＭ－ｌ的表达、增加酵母多糖激活血清和组胺对ＰＭＮ的趋化性、增加ＰＭＮ的聚集和ＰＭＮ酸性磷酸酶的释放。（４）ＲＡ则可抑制ＰＡＦ诱导的ＰＭＮ聚集、酸性磷酸酶的释放及ＰＭＮ对酵母多糖刺激血清和组胺的趋化性，而ＩＣＡＭ－１和ＥＬＡＭ－１的表达却未改变?

无创性微血管内皮细胞分离法

无创性微血管内皮细胞分离法陈思锋，纪晓峰，姜远英，李忆东内皮细胞是组织与血液进行物质交换的必经之路，也是组织细胞通过体液因子与其他器官组织进行对话的必由之路。内皮细胞不仅是一种被动屏障，而且还通过表达和释放酶、受体、生物活性物质等主动参与调节组织器官...

三氧化二砷对人卵巢癌细胞SKOV3迁移、侵袭能力的影响及其相关分子机制

目的:探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As_2O_3)对人卵巢癌细胞迁移、侵袭的影响及其相关分子机制。方法:分别通过细胞划痕、Transwell小室及预包被Matrigel胶的Transwell小室(侵袭小室)方法,观察As_2O_3对人卵巢癌细胞SKOV3迁移、侵袭能力的影响。蛋白质印迹法检测As_2O_3处理不同时间后肿瘤转移相关的蛋白,包括Rho相关蛋白激酶(Rho related protein kinase,ROCK)及基质金属蛋白酶家族(matrix metalloproteinase family,MMPs)蛋白的表达。结果:2μmol/L As_2O_3即可显著抑制SKOV3细胞的迁移及侵袭。蛋白质印迹法检测发现,As_2O_3可显著抑制ROCK1、ROCK2及MMP-9的表达,但对MMP-2表达无明显影响。结论:As_2O_3可明显抑制人卵巢癌细胞SKOV3的迁移、侵袭能力,这可能与其抑制ROCK1、ROCK2以及MMP-9的表达有关。