西藏野生金钗石斛幼苗培养基的优化

本研究旨在探究不同添加物、不同碳源及其浓度对西藏野生金钗石斛组培苗生长的影响,优化金钗石斛的培养条件。选用金钗石斛的无菌苗为试验材料,以MS固体培养基为基本培养基,进行不同添加物及不同碳源及其浓度对金钗石斛生长影响的试验。结果表明,添加香蕉的培养基更有利于金钗石斛幼苗的生长,其生物量积累最多,为5.96±1.19 g。添加30 g/L蔗糖的培养基更加促进金钗石斛幼苗株高和鲜重的增长,其株高和鲜重分别为3.32±1.02、4.71±0.69g。添加30 g/L葡萄糖的培养基虽然能促进根的生长,但对地上部分的生长不是最佳选择,所以西藏野生金钗石斛幼苗生长的最佳培养基为添加50 g香蕉和添加30 g/L蔗糖的培养基。

南方红豆杉DXS基因的克隆与功能分析

目的从南方红豆杉Taxus chinensis获得紫杉醇生物合成途径关键酶1-脱氧-D-木糖醇-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose 5-phosphate synthase,DXS)基因(TcDXS)并进行生物信息学和表达模式分析以及亚细胞定位和功能鉴定。方法采用RACE技术获得TcDXS全长;利用qRT-PCR分析TcDXS在南方红豆杉不同部位的表达情况;采用亚细胞定位分析TcDXS在细胞中的位置;用颜色功能互补实验检测TcDXS功能。结果获得的TcDXS由3 031个核苷酸组成,包含了2 229 bp编码区,编码742个氨基酸,其蛋白相对分子质量为79 400,等电点(p I)为7.99;qRT-PCR检测表明TcDXS在南方红豆杉的嫩叶柄中表达量最高,其次是叶和皮,根和茎中的表达量较低;亚细胞定位结果表明,TcDXS定位在叶绿体中;功能互补实验结果表明,在共同转化p AC-BETA和pTrc-TcDXS的大肠杆菌菌落呈现出橘黄色。结论 TcDXS的克隆和功能分析为深入研究紫杉醇生物合成途径和实现其代谢工程奠定了基础。

藏药翼首草角鲨烯合成酶的生物信息学分析

翼首草(Pterocephalus hookeri)是西藏地区传统藏药材,目前研究发现其主要药效物质以三萜皂苷及环烯醚萜苷为主。为研究藏药翼首草三萜类化合物下游途径关键酶SQS调控三萜类物质的合成机制,本研究首次利用翼首草转录组数据库筛选出翼首草角鲨烯合酶(PhSQS)基因,采用生物信息学方法对SQS氨基酸的组成、理化性质、疏水/亲水性、蛋白质结构及其功能域等进行了预测与分析。通过同源性比对,构建了SQS蛋白的系统发育树。研究结果显示PhSQS蛋白序列与烟草、人参、三七同源性较高,PhSQS开放阅读框(ORF)为1251 bp,相对分子量为47 kD,氨基酸残基个数为417,理论等电点为8.38。PhSQS蛋白存在明显的疏水区域和亲水区域。PhSQS蛋白二级结构的主要结构元件是α-螺旋和无规则卷曲,含有SQS蛋白功能结构域。本研究获得的PhSQS基因信息,能够确定PhSQS蛋白具有催化鲨烯的功能,为今后进一步研究藏药翼首草次生代谢调控提供理论依据。

翼首草实时荧光定量PCR内参基因筛选

本研究以传统藏药翼首草为材料,利用翼首草转录组数据库和RT-qPCR技术分析6个植物常用的候选内参基因(Actin,18S,TUBa,TUBb1,TUBb2和GAPDH)。选用geNorm、NormFider和BestKeeper 3款分析软件进行候选内参基因稳定性分析,以期筛选出翼首草不同组织中表达稳定的内参基因。内参基因Ct值分析、geNorm和NormFider软件分析结果表明Actin基因表达量最高,表达最稳定。BestKeeper软件分析结果表明GAPDH和Actin基因表达最稳定。综合分析结果说明,运用RT-qPCR技术研究翼首草关键基因表达量时,可选用Actin基因作为内参基因。翼首草合适内参基因的确定,可为今后其相关基因表达研究的开展提供依据。