白花蛇舌草对人肾癌780-0细胞体外增殖及凋亡的影响

目的:探讨白花蛇舌草(Hedyotis diffusa)提取物对人肾癌780-0细胞在体外增殖及凋亡的影响。方法:选择体外培养的人肾癌780-0细胞,分别给予不同浓度的白花蛇舌草提取物(0、25、50、100、200、400、600和800μg/ml)处理细胞,采用CCK8法检测细胞的增殖情况,流式细胞技术检测细胞周期和细胞凋亡情况,荧光定量PCR法检测细胞周期蛋白的表达,Western blot检测凋亡相关蛋白及PI3K/Akt信号通路的表达水平,并应用PI3K/Akt激动剂观察细胞增殖及凋亡变化。结果:不同浓度的白花蛇舌草提取物均能抑制肾癌细胞的增殖,其抑制作用随着药物浓度的升高而增强。相较于对照组,白花蛇舌草干预后G0/G1期细胞百分比显著增加,S期细胞百分比显著减少(P<0.05),细胞周期蛋白(Cyclin A、Cyclin B1、CDK2蛋白)的mRNA表达水平下降。白花蛇舌草处理后细胞凋亡率较对照组明显增加(P<0.05),其凋亡蛋白Caspase-3表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少。白花蛇舌草抑制PI3K/Akt信号通路的激活,而PI3K/Akt激动剂作用可减弱白花蛇舌草对细胞增殖的抑制及促凋亡作用。结论:白花蛇舌草能显著抑制肾癌780-0细胞的增殖及促进其凋亡,这种作用是通过调节PI3K/Akt信号通路所实现的。

白花蛇舌草提取物对肾癌786-O细胞移植瘤的生长及血管生成的研究

目的:研究白花蛇舌草提取物(EEHDH)对肾癌(RCC)786-O细胞移植瘤的生长及血管生成的研究。方法:(1)体外实验采用MTT法检测EEHDH对人肾癌786-O细胞生长的抑制作用。(2)体内实验采用人肾癌786-O细胞实体瘤小鼠动物模型,小鼠模型共30只,6只为对照组,其余24只为试验组,向试验组小鼠注射肿瘤细胞悬浮液,并将其分为模型对照组(n=6,不给予EEHDH)、EEHDH低剂量组(n=6,EEHDH 5g/kg)、中剂量组(n=6,EEHDH 10g/kg)与高剂量组(n=6,EEHDH 20g/kg),连续给药14d后处死小鼠,剥离肿块并称重,计算抑瘤率,同时剥离胸腺、脾脏,计算胸腺及脾脏指数。(3)Western blot法研究不同浓度EEHDH(0mg/ml、10mg/ml、20mg/ml、40mg/ml)对肾癌786-O细胞金属基质蛋白酶(MMPs)表达的影响。结果:(1)随着EEHDH浓度的上升,其对人肾癌786-O细胞增殖的抑制率呈上升趋势,随着EEHDH作用时间的延长,EEHDH对人肾癌786-O细胞增殖的抑制率也呈上升趋势(P<0.05);(2)与模型对照组相比,EEHDH低剂量、中剂量及高剂量组小鼠瘤质量均明显减轻,且抑制率也明显升高(P<0.05);小鼠荷瘤后,其脾脏指数、胸腺指数均较空白对照组显著升高(P<0.05),且EEHDH低、中、高剂量组胸腺指数及脾脏指数均显著高于模型对照组(P<0.05);(3)随着EEHDH浓度的增加,MMP-2及MMP-9蛋白电泳条带灰度值均逐渐降低(P<0.05)。结论:EEHDH可能通过提高机体免疫力、抑制血管增生两种途径,抑制肾癌786-O细胞增殖,发挥抗肿瘤功效。