补阳还五汤改善脑缺血大鼠血流灌注的多模态磁共振成像研究

目的利用多模态磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)技术纵向观察补阳还五汤对脑缺血大鼠侧支循环及血流灌注的影响。方法采用线栓法建立永久性中动脉栓塞致脑缺血大鼠模型。将造模成功的24只大鼠随机分为模型组、补阳还五汤高剂量组(16.6 g/kg)、补阳还五汤低剂量组(8.3 g/kg),每组8只,以及假手术组(8只),共分4组。各给药组大鼠在造模后24小时灌胃给药,连续给药15天。假手术组和模型组大鼠给予等量生理盐水。分别在给药后第7天和15天进行多模态MRI扫描。利用T2加权成像检测脑梗死体积,磁共振血管成像检测颅内动脉信号,动脉自旋标记检测缺血边缘血流灌注。结果与假手术组大鼠比较,缺血7天和15天后,模型组大鼠缺血侧前动脉(anterior cerebral artery,ACA)、颈内动脉(internal carotid artery,ICA)、后动脉(posterior cerebral artery,PCA)血管信号强度显著降低(P<0.05,P<0.001),基底动脉(basilar artery,BA)信号强度显著升高(P<0.001),缺血边缘血流灌注明显降低(P<0.001)。与模型组比较,补阳还五汤高、低剂量治疗均可明显减少缺血7天后脑梗死体积(P<0.05),降低缺血7天和15天BA信号强度(P<0.05,P<0.01),并升高缺血15天后缺血边缘的血流灌注(P<0.001)。此外,补阳还五汤高剂量治疗还可以降低缺血15天后脑梗死体积(P<0.01),并升高ACA及ICA信号强度(P<0.05);补阳还五汤低剂量还可以升高缺血7天后缺血边缘的血流灌注(P<0.05)。结论补阳还五汤可促进颅内关键动脉侧支循环建立,改善脑血流灌注,降低脑梗死体积,保护脑组织。

延龄草甾体皂苷对脑缺血大鼠星形胶质细胞GFAP、Cx43及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响

目的观察延龄草甾体皂苷(TSTT)对脑缺血大鼠星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、缝隙连接蛋白43(Cx43)及Wnt3a/Dvl3信号通路的影响,探讨其改善脑缺血的作用机制。方法采用线栓法制备局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、金纳多组(60 mg/kg)及TSTT低、高剂量组(33、65 mg/kg),每组12只。分别进行相应干预,连续15 d。采用透射电镜观察神经元、星形胶质细胞超微结构,免疫荧光染色检测缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达,RT-PCR检测缺血周围脑组织Wnt3a、Dvl3基因表达。结果透射电镜观察结果显示:模型组大鼠神经元核明显固缩,核仁消失,染色质电子密度增加,细胞质内细胞器明显减少,可见大量空泡,星形胶质细胞肿胀明显,染色质消融,核周围出现空白区,细胞器减少;与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠神经元和星形胶质细胞超微结构损伤明显减轻。免疫荧光染色结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,TSTT低、高剂量组和金纳多组大鼠缺血边缘皮层、纹状体GFAP和Cx43表达显著降低(P<0.01)。RT-PCR结果显示:与假手术组比较,模型组大鼠缺血周围脑组织Dvl3基因表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,TSTT高剂量组和金纳多组大鼠缺血周围脑组织Wnt3a和Dvl3基因表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论TSTT可通过上调Wnt3a/Dvl3基因表达、下调GFAP和Cx43表达,抑制星形胶质细胞异常活化,减轻脑缺血大鼠神经元、星形胶质细胞超微结构损伤。

蛭丹化瘀组方对LPS诱导急性肺损伤大鼠炎性反应的影响

目的:研究蛭丹化瘀组方对脂多糖(LPS)诱导的大鼠急性肺损伤的影响。方法:SD大鼠72只,随机分成对照组、模型组、蛭丹化瘀组方33、16.5、8.25 g/kg组、地塞米松阳性药组。气管滴注LPS制备急性肺损伤模型;HE染色,光镜下观察肺组织病理学变化并进行肺病理损伤评分;酶联免疫法检测各组大鼠肺组织炎性因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:模型组大鼠肺组织病理损伤评分增高,肺组织炎性因子TNF-α、IL-1β及IL-6含量较正常组明显增加(P<0.01或P<0.05);蛭丹化瘀组方33 g/kg及地塞米松组大鼠肺组织病理损伤评分较模型组大鼠明显降低(P<0.05),蛭丹化瘀组方(33、16.5、8.25 g/kg)及地塞米松可明显降低肺组织TNF-α、IL-6含量,蛭丹化瘀组方16.5 g/kg还可明显降低肺组织IL-1β含量,差异较模型组明显(P<0.01或P<0.05)。结论:蛭丹化瘀组方能够减轻脂多糖诱导的大鼠急性肺损伤,其机制可能与降低肺组织中炎性反应因子TNF-α、IL-6和IL-1β含量有关。

不同产地珠子参的生药学鉴别和含量测定

目的:对云南、贵州、甘肃产的珠子参药材进行鉴别和含量测定。方法:应用性状、显微及薄层色谱方法对不同产地珠子参药材进行鉴别,显微鉴别方面采用石蜡切片及粉末临时制片进行显微特征观察;采用高效液相色谱法测定了药材中竹节参皂苷Ⅳa的含量。结果:不同产地珠子参药材形状、颜色和晶体数量等特征具有一定差异,云南、贵州和甘肃产3个批次药材的含量分别为5.55%、1.98%和1.96%。结论:3个产地的珠子参药材的性状、显微特征及竹节参皂苷Ⅳa的含量差异较大,其中以云南产药材的质量较好。

延龄草根茎HPLC定量与UPLC-LTQ-Orbitrap-MS定性研究

目的:对延龄草根茎中的主要化学成分进行鉴定和含量测定。方法:采用UPLC-LTQ-Orbitrap-MS对延龄草根茎中的主要化学成分进行快速识别;应用HPLC同时测定11批市售延龄草根茎药材中重楼皂苷Ⅶ、偏诺皂苷元-3-O-α-L-鼠李糖基-(1→4)-[O-α-L-鼠李糖基-(1→2)]-O-β-D-葡萄糖苷和重楼皂苷Ⅵ3个皂苷类成分的含量。含量测定采用Agilent Poroshell C_(18)色谱柱(100 mm×4.6 mm,2.7μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速1.0m L/min;柱温30℃;检测波长203 nm。结果:指认了延龄草根茎中的27个化学成分;上述3个成分在考察的进样量范围内线性关系良好(r>0.999);加样回收率在96%~103%之间,RSD为0.57%~3.61%,11批延龄草根茎药材中的3个成分含量总和在1.71~46.13 mg/g之间。结论:市售延龄草根茎药材的质量差异较大,所建立的分析方法可用于该药材的质量控制。

痰火方调节M1型小胶质细胞活化及减轻脑缺血大鼠脑组织损伤作用的研究

目的观察痰火方调节M1型小胶质细胞活化及减轻脑缺血大鼠脑组织损伤的作用及机制。方法将雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、痰火方高剂量组(3.68 g/kg)、痰火方中剂量组(1.84 g/kg)、痰火方低剂量组(0.92 g/kg)及金纳多组(0.06 g/kg)。除假手术组外,其余各组采用大脑中动脉线栓法建立脑缺血大鼠模型。采用平衡木行走实验评价大鼠运动平衡能力,磁共振成像(MRI)T2 mapping检测脑缺血大鼠脑组织损伤,快蓝染色(LFB)检测神经纤维损伤,HE染色检测神经细胞损伤情况,采用免疫荧光技术检测小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)及CD16/Iba-1阳性细胞数。结果与模型组比较,痰火方高剂量组、金纳多组大鼠缺血24、48、72 h平衡木行走能力评分提高(P<0.05或P<0.01),痰火方低、中剂量组大鼠缺血72 h平衡木行走能力评分提高(P<0.01);痰火方高剂量组、金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体脑区T2值降低(P<0.05或P<0.01),痰火方低、中剂量组大鼠梗死灶周围纹状体T2值降低(P<0.05);痰火方高、低剂量组及金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体及外囊LFB积分光密度增加(P<0.01),痰火方中剂量组大鼠梗死灶周围纹状体的LFB积分光密度增加(P<0.01);痰火方低、中、高剂量组大鼠梗死灶周围纹状体病理损伤程度降低,细胞密度增加(P<0.05或P<0.01),金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体细胞密度增加(P<0.01或P<0.05);痰火方高、中剂量组及金纳多组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体Iba-1及CD16/Iba-1阳性细胞数减少(P<0.01),痰火方低剂量组大鼠梗死灶周围皮层、纹状体CD16/Iba-1阳性细胞数减少(P<0.01),痰火方低剂量组大鼠梗死灶周围纹状体Iba-1阳性细胞数减少(P<0.01)。结论痰火方可改善脑缺血大鼠神经功能缺损症状,减轻缺血梗死灶周围脑区神经病理学损伤,抑制M1型小胶质细胞活化。

痰火方对脑缺血大鼠Caspase-3、GFAP蛋白表达及血管新生的影响

目的观察痰火方对脑缺血模型大鼠Caspase-3、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达及血管新生的影响。方法将大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、痰火方低剂量组、痰火方中剂量组、痰火方高剂量组、金纳多组。除假手术组外, 其余各组采用线栓法建立大鼠中动脉栓塞模型。造模2 h后, 痰火方低、中、高剂量组分别灌胃0.92、1.84、3.68 g/kg痰火方干浸膏粉溶液, 金纳多组灌胃金纳多60 mg/kg, 每24 h给药1次, 连续给药3 d。假手术组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水。采用四肢对称性评分评价肢体功能症状, 采用免疫荧光染色法检测梗死灶周围组织GFAP、Caspase-3蛋白表达, 评价大鼠星形胶质细胞活化、神经细胞凋亡情况, 采用免疫荧光双标法检测血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)/硫酸软骨素蛋白多糖2(NG2)蛋白表达, 观察各组大鼠血管新生情况。结果与模型组比较, 术后48、72 h, 痰火方高剂量组大鼠四肢对称运动评分提高(P<0.01或P<0.05), 梗死灶周围皮层、纹状体Caspase-3阳性细胞数[皮层:(765.0±122.4)比(1 131.0±392.9)、纹状体:(895.9±389.8)比(1 401.9±453.1)]减少(P<0.05或P<0.01), CD31+/NG2+阳性细胞数[皮层:(1 355.0±257.9)比(825.4±308.1);纹状体:(1 290.9±400.9)比(675.2±259.7)]增多(P<0.01);梗死周围皮层GFAP阳性积分光密度[(4 210.00±1 226.38)比(7 935.78±2 001.98)]降低(P<0.01)。结论痰火方可减轻脑缺血大鼠肢体功能症状, 抑制星形胶质细胞活化, 下调Caspase-3表达, 促进血管新生。

补阳还五汤迭加丰富环境对脑缺血模型大鼠星形胶质细胞异常活化和促血管生成因子的影响

目的观察补阳还五汤迭加丰富环境刺激对脑缺血模型大鼠星形胶质细胞异常活化和促血管生成素（angiopoietin，Ang）表达的影响。方法将雄性sD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、丰富环境组、补阳还五汤组、补阳还五汤迭加丰富环境组（简称“联合组”）。除假手术组外，其余各组大鼠采用线栓法制备大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型。造模后24h，补阳还五汤组、联合组灌胃补阳还五汤16．1g／kg，丰富环境组、假手术组与模型组大鼠灌胃等体积生理盐水，1次／d。丰富环境组与联合组大鼠进行丰富环境干预，12h／d，连续干预15d。采用横木行走实验观察大鼠运动功能；HE染色观察脑组织病理学改变；采用免疫组织化学染色法观察大鼠缺血侧纹状体多巴胺和cAMP调节磷蛋白32（dopamine and cAMP regulated neuronal phosphoprotein，DARPP．32）、星形胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein，GFAP）表达；采用RT-PCR检测大鼠纹状体促血管生成相关因子VEGF、血管内皮细胞生长因子受体2（vascular endothelial growth factor receptor2，VEGFR2）及Angl、Ang2基因表达。结果造模后第7、15天，联合组大鼠横木行走评分较模型组升高（P〈0．01）。与模型组比较，联合组大鼠纹状体神经细胞数[（31．08±8．06）个／mm。比（19．00±9．12）个／mm。]增多（P〈0．01）；缺血侧纹状体DARPP．32阳性细胞数[（975．3±589．6）个／mm。比（271．25±164．98）个／mm。]、积分光密度[（18621．87±6996．64）比（4071．60±2477．27）]升高（P〈0．01），GFAP积分光密度[（6094．07±3211．74）比（10002．91±8430．34）]降低（P〈0．05）；VEGF[（1．59±0．80）比（0．77±0．33）]、VEGFR2[（1．58±0．88）比（0．70±0．37）]、Angl[（1．584-0．52）比（0．84±0．13）]、Ang2[（1．25±0．25）比（0.90±0．22）]mRNA表达上调（P〈0．05或P〈0．01）。结论补阳还五汤迭加丰富环境具有协同增效的作用，可通过抑制星形胶质细胞过度活化并增加促血管生成因子的基因表达，改善脑缺血模型大鼠的运动功能。

补阳还五汤促进脑缺血大鼠脑组织微结构重塑的作用

目的研究补阳还五汤改善脑缺血大鼠脑血流灌注、促进轴突生长及微结构重塑的药理作用及机制。方法线栓法制备右侧大脑中动脉栓塞脑缺血大鼠模型。将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和补阳还五汤组(16.1 g/kg),连续灌胃15 d后取材并检测指标。T2加权成像检测脑梗死体积;动脉自旋标记检测损伤脑区的血流灌注;弥散张量成像检测损伤脑区的超微结构。HE染色观察损伤脑区的病理损伤;免疫荧光染色法检测淀粉样前体蛋白(APP)、神经轴突生长抑制因子(NogoA)和神经轴突生长抑制因子受体(NgR)的蛋白表达,RT-PCR法检测生长相关蛋白-43(GAP-43)、NogoA和NgR的基因水平,以评价脑缺血大鼠轴突的生长及损伤情况。结果MRI结果显示,与模型组比较,补阳还五汤组大鼠的脑梗死体积减小(P<0.05),梗死核心及周围皮层的血流灌注增加(P<0.05),梗死灶周围皮层的超微结构改善。HE染色结果显示,补阳还五汤组大鼠较模型组皮层正常形态神经细胞数量增加,异常形态神经细胞数量减少(P<0.01或P<0.05),水肿程度减轻,神经纤维致密性提高。免疫荧光染色结果显示,补阳还五汤组大鼠较模型组梗死灶周围皮层及内囊APP、NogoA蛋白的阳性表达降低(P<0.05或P<0.01),内囊NgR蛋白阳性表达降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,补阳还五汤可下调梗死灶周围皮层NogoA、NgR基因表达水平(P<0.05或P<0.01)。结论补阳还五汤能够有效减小脑缺血大鼠的梗死体积,改善脑血流灌注和脑组织微结构,减轻神经细胞损伤,促进轴突生长及微结构重塑。

延龄草的化学成分和药理作用研究进展

延龄草（Trillium tschonoskii Maxim.）乃百合科延龄草属多年生草本植物,以干燥根及根茎（地珠）及果实（天珠）入药,其根茎又名头顶一颗珠,含甾体皂苷、倍半萜苷、黄酮苷等主化学成分;味甘性温有小毒,功能镇静止痛,止血,解毒,主用于眩晕头痛、跌打损伤、神经衰弱、高血压病、腰腿疼痛等症[1~3]。现代研究表明,延龄草具有抗炎、镇痛、抗肿瘤、凝血以及免疫调节等活性。为进一步开发和利用本民族药,文章就延龄草化学成分及药理研究进展进行系统阐述。

补阳还五汤对脑缺血大鼠梗死灶周围脑区新生神经细胞增殖、分化及Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的观察补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠梗死灶周围皮层新生细胞增殖、分化及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白在新生细胞表达的影响。方法将SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、补阳还五汤组,每组9只。采用线栓法制备大脑中动脉缺血再灌注模型。造模后24 h,补阳还五汤组灌胃补阳还五汤水煎液16.1 g/kg,每日1次,连续给药30 d。于造模后第3天开始腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU),活体标记梗死灶周围皮层新生细胞。分别于造模后第9、15、30天取材。采用免疫荧光双标结合图像分析技术,检测各组大鼠梗死灶周围皮层BrdU阳性细胞、双标BrdU/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、BrdU/微管相关蛋白2(MAP-2)、BrdU/Wnt、BrdU/β-catenin、BrdU/散乱蛋白(Dishevelled)阳性细胞。结果补阳还五汤组大鼠脑缺血再灌注9、15、30 d,梗死灶周围皮层BrdU+细胞数均较同时点模型组大鼠增加(P<0.01),双标BrdU+/GFAP+细胞数较模型组减少(P<0.01);缺血再灌注9、15 d,补阳还五汤组大鼠梗死灶周围皮层双标BrdU+/MAP-2+细胞数较模型组增加(P<0.01)。与同时点模型组比较,脑缺血再灌注9 d,补阳还五汤组大鼠梗死灶周围皮层双标BrdU+/Wnt+细胞数增加(P<0.05);脑缺血再灌注15 d,补阳还五汤组大鼠梗死灶周围皮层双标BrdU+/Dishevelled+、BrdU+/β-catenin+细胞数增加(P<0.05);脑缺血再灌注30 d,补阳还五汤组大鼠梗死灶周围皮层双标BrdU+/Wnt+、BrdU+/Dishevelled+、BrdU+/β-catenin+细胞数均增加(P<0.05或P<0.01)。结论补阳还五汤可激活脑缺血再灌注大鼠梗死灶周围皮层组织新生细胞增殖,抑制新生细胞向胶质细胞分化,促进新生细胞向神经元分化,并可增强新生细胞Wnt、β-catenin、Dishevelled蛋白的表达。

参苓白术散对腹泻型肠易激综合征模型大鼠胃肠激素、消化酶及炎性细胞因子的影响

目的 探讨参苓白术散对腹泻型肠易激综合征（diarrhea type irritable bowel syndrome, D-IBS）大鼠胃肠激素、消化酶和炎性细胞因子的影响。方法 将50只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常组，模型组，参苓白术散大、中、小剂量组，每组10只。除正常组外，其他各组均给予高乳糖饲料喂养加束缚应激，建立D-IBS大鼠模型。同时参苓白术散大、中、小剂量组分别灌胃参苓白术散9、3、1 g/kg，正常组、模型组灌胃等体积生理盐水。连续给药6 d。检测各组大鼠小肠苹果酸脱氢酶（malate dehydrogenase, MDH）、LDH和二糖酶活力，采用放射免疫法检测各组大鼠血浆血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide, VIP）、P物质（substance P, SP）活性，采用ELISA法测定各组血清TNF-a、IL-10含量。结果 与模型组比较，大、中、小剂量组大鼠血清TNF-a/IL-10比值[（0.31±0.15）、（0.34±0.21）、（0.41±0.15）比（0.74±0.19）]降低（P＜0.05），小肠黏膜二糖酶[（38.44±11.30）U/mg、（44.77±16.46）U/mg、（42.58±13.02）U/mg比（23.23±6.85）U/mg]活性升高（P＜0.05）；大、中剂量组小肠黏膜LDH[（1 863.61±1 019.28）U/mg、（1 136.13±631.89）U/mg比（416.50±223.94）U/mg]活性升高（P＜0.05）；大剂量组血浆SP[（22.88±10.17）pg/mg比（31.86±7.81）pg/mg]水平降低（P＜0.05）。结论 参苓白术散可通过提高LDH、MDH及二糖酶的活力，抑制胃肠激素SP的异常分泌，调控Th1/Th2免疫应答失衡状态，达到缓解腹泻的作用。

应用磁共振T2WI和DTI评价补阳还五汤对脑缺血大鼠的保护作用

目的应用磁共振T2加权成像(T2-weighted imaging,T2WI)和扩散张量成像(diffusion tensor imaging,DTI)观察大脑中动脉栓塞大鼠脑组织梗死灶、水肿的形成和白质纤维的损伤,评价补阳还五汤抗脑缺血损伤的作用。方法采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)致局灶性脑缺血模型。将造模成功的大鼠按随机数字表法分为模型组、补阳还五汤组,每组5只,另取5只大鼠为假手术组。造模后24 h,补阳还五汤组大鼠灌胃补阳还五汤水煎液16.1 g/kg,连续灌胃30 d,1次/d。分别在术后3、7、14、30 d进行磁共振T2WI和DTI扫描。结果T2WI扫描结果显示,术后第3、7、14、30天,模型组大鼠大脑右侧缺血区呈异常高信号,梗死体积率随缺血时间延长逐渐降低(P<0.05);与模型组比较,术后第3、7、14、30天,补阳还五汤组大鼠梗死体积率[3 d:(13.9±13.7)%比(40.1±10.7)%;7 d:(13.9±11.9)%比(28.2±7.7)%;14 d:(10.2±7.9)%比(24.5±3.5)%;30 d:(6.8±6.5)%比(24.7±8.7)%]均明显降低(P<0.05或P<0.01);术后第3天,模型组大鼠水肿百分率达到峰值,第30天大鼠脑组织出现萎缩,水肿百分率呈负增长趋势;与模型组比较,术后第3、7天补阳还五汤组大鼠水肿百分率[3 d:(11.4%±6.9%)比(21.5%±3.1%);7 d:(5.5%±3.1%)比(8.7%±1.2%)]均明显降低(P<0.05或P<0.01)。DTI扫描结果显示,术后第3、7、14、30天,模型组梗死灶区均呈异常低信号,缺血侧皮层、纹状体rFA值均较假手术组降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,术后第14天,补阳还五汤组大鼠皮层、纹状体rFA值增加(P<0.05或P<0.01)。结论T2WI结合DTI成像可清楚提供显影病灶位置及形态,MCAO大鼠缺血区脑组织出现缺血梗死灶、水肿及白质纤维损伤,随着缺血时间的延长其病理损伤程度呈降低趋势。补阳还五汤可降低MCAO大鼠梗死体积率,减轻水肿,促进神经纤维损伤后的修复,具有一定的抗脑缺血损伤作用。