Ⅲ型代谢型谷氨酸受体通过OPG/RANKL途径改善成骨细胞矿化能力的研究

目的:观察原代大鼠来源的成骨细胞(OB)表达Ⅲ型代谢型谷氨酸受体(mGluR)的情况以及其对OB矿化能力的影响和相关机制。方法:用聚合酶链反应(PCR)检测Ⅲ型mGluRmRNA在大鼠颅骨来源OB上的表达;用含或不含Ⅲ型mGluR特异性激动剂L-AP4和Ⅲ型mGluR特异性阻断剂CPPG处理OB细胞48h,检测骨保护素(OPG)和核转录因子κB激活受体配基(RANKL)mRNA在OB中的表达差异;在成骨细胞矿化过程中给予L-AP4和CPPG处理18d,观察不同处理组矿化结节的生成差异。结果:原代大鼠来源的OB表达mGluR6～8mRNA,但不表达mGluR4mRNA;L-AP4处理48h的OB中,OPGmRNA表达量增加,RANKLmRNA表达量减少,CPPG处理组则是相反结果。L-AP4处理OB18d后,矿化结节增多,CPPG处理组没有表现出明显差异。结论:mGluR6～8在原代大鼠来源OB中有表达,未见mGluR4表达,推测Ⅲ型mGluR可能通过OPG/RANKL途径参与了OB矿化能力的调节。

高糖对原代成骨细胞分化的影响

目的:观察高糖对原代成骨细胞分化和矿化功能的影响。方法:将原代成骨细胞按1×105接种于6孔板上。设置3组,即对照组(葡萄糖浓度为5.5mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度为22mmol/L)和甘露醇组(葡萄糖5.5mmol/L+甘露醇16.5mmol/L)。于28d后检测其碱性磷酸酶(ALP)活性,运用钙沉积试剂盒检测钙沉积数值,并用实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原(CogⅠ)和骨钙素(OC)的基因表达,采用茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果:高糖条件下,ALP活性和CogⅠ表达增高,而OC表达及钙沉积均减少,矿化结节数量减少。结论:在高糖的影响下,成骨细胞停留于分化早期,不再进一步向晚期分化,矿化功能减退,而这一作用不依赖于渗透压。

人骨肉瘤细胞株MG63功能性N-甲基-D-天冬氨酸受体的表达

目的:研究人骨肉瘤细胞株MG63上功能性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的表达。方法:利用钙离子成像系统检测NMDA或谷氨酸对MG63细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。结果:仅6.4%MG63细胞对NMDA产生[Ca2+]i升高反应,对谷氨酸则没有反应。多数MG63细胞呈现自发性的钙离子震荡现象,且该现象不能被MK801所阻断。结论:MG63细胞表达的功能性NMDA受体很少。

骨组织细胞谷氨酸信号系统的研究进展

谷氨酸是中枢神经系统主要的兴奋性神经递质。骨组织细胞（成骨细胞、破骨细胞、骨细胞）上都有谷氨酸受体以及转运体的表达，谷氨酸可以影响成骨细胞以及破骨细胞的活动，骨组织可能与中枢神经系统具有相同的谷氨酸信号系统。谷氨酸可能有双重作用：一方面，在中枢神经系统中作为兴奋性神经递质维持细胞的稳态；另一方面，作为细胞外信号调节因子在骨组织中通过自分泌或旁分泌的形式发挥作用。