基于网络药理学和分子对接探究诃子鞣酸防治奶牛子宫内膜炎的作用机制

【目的】基于网络药理学结合分子对接技术探究诃子鞣酸防治奶牛子宫内膜炎的作用,并阐明其潜在机制。【方法】通过SwissTargetPrediction和PharmMapper数据库收集和预测诃子鞣酸的作用靶点,通过UniProt数据库标准化并去重。从OMIM和DRUGBANK数据库中获取奶牛子宫内膜炎相关基因并去重,绘制Venn图获取诃子鞣酸和奶牛子宫内膜炎交集靶点。使用STRING数据库构建蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,使用DAVID数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析。利用分子对接技术对KEGG通路富集分析后得到的关键通路靶点进行分子对接,以验证网络药理学分析结果的准确性。【结果】通过多个数据库检索及筛选获得诃子鞣酸潜在靶点基因333个,奶牛子宫内膜炎相关靶点基因342个,共有18个交集靶点。PPI结果显示,诃子鞣酸可能作用于前列腺素-内过氧化物酶合酶1(prostaglandin G/H synthase 1,PTGS1)、PTGS2、花生四烯酸12-脂氧合酶(arachidonate 12-lipoxygenase,ALOX12)、ALOX15等18个关键靶点。GO功能和KEGG通路富集分析结果显示,诃子鞣酸可通过脂氧合酶途径、花生四烯酸代谢通路、雌激素信号等通路防治奶牛子宫内膜炎。分子对接结果显示,诃子鞣酸与所得关键靶点均具有良好的结合活性,诃子鞣酸可通过多靶点发挥防治奶牛子宫内膜炎的作用,证明网络药理学预测结果准确。【结论】诃子鞣酸可能通过与PTGS1、PTGS2、ALOX12、细胞肿瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53,TP53)结合,在脂氧合酶通路、花生四烯酸代谢过程上发挥防治奶牛子宫内膜炎的作用。

酿酒酵母β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1表达的影响

为了探索β-葡聚糖对绵羊瘤胃上皮细胞(ruminal epithelial cells,RECs)β-防御素-1(sheepβ-defensin-1,SBD-1)表达的影响。本研究首先建立绵羊RECs培养体系作为体外试验模型,用不同浓度(0、5、10、20、50和100μg·mL^(-1))的β-葡聚糖刺激RECs 8h后,利用qPCR和ELISA方法检测RECs中SBD-1的表达变化,选出诱导SBD-1表达最高的β-葡聚糖浓度。然后用β-葡聚糖的最佳刺激浓度对RECs分别刺激0、2、4、8、12和24h,同样利用qPCR和ELISA方法对RECs SBD-1的表达变化进行检测,从而筛选出诱导SBD-1表达最高的刺激时间。qPCR和ELISA结果显示,β-葡聚糖(5～100μg·mL^(-1))刺激RECs 8h后,SBD-1mRNA和蛋白的表达随着β-葡聚糖浓度的升高均呈现先升高后降低趋势,且当β-葡聚糖浓度为10μg·mL^(-1)时SBD-1mRNA和蛋白的表达量极显著高于对照组(P<0.01)。当用10μg·mL^(-1)的β-葡聚糖刺激RECs 0～24h后,qPCR结果显示,10μg·mL^(-1)的β-葡聚糖刺激RECs 2h时SBD-1mRNA的表达量最高(P<0.01),之后呈下降趋势,而ELISA结果显示,在β-葡聚糖浓度为10μg·mL^(-1)刺激RECs 4h后SBD-1蛋白分泌水平达到最高(P<0.01)。MTT测定结果显示,100μg·mL^(-1)β-葡聚糖会对绵羊RECs活力产生显著的影响(P<0.05)。本研究结果表明,β-葡聚糖能够提高绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且用浓度为10μg·mL^(-1)的β-葡聚糖分别刺激RECs 2和4h后SBD-1的mRNA和蛋白表达达到最高。

保泰松在马病治疗中的应用

在马病的临床治疗中,保泰松(PBZ)是最为常用的非甾体抗炎药物(NSAID),且对多种疾病有着良好的治疗效果。例如在对软组织损伤及骨骼、肌肉等方面的疾病治疗上,尤其是对轻度跛行治疗效果最佳。但保泰松也具有一定的毒性,主要是对胃肠道的影响以及肾脏毒性。论文将保泰松在国内外马病治疗上应用的文献进行整理和总结,对保泰松的理化性质、药理作用、临床应用以及与其他药物的相互作用等方面进行综述,对马匹产生的不良反应进行了分析和讨论,以期为进一步开展保泰松在马病治疗上的应用研究提供参考。

诃子鞣酸对LPS诱导的小鼠子宫内膜炎的保护作用

为探究诃子鞣酸(chebulagic acid, CA)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠子宫内膜炎的保护作用。本研究体外试验部分,使用MTT法检测CA对小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响,通过ELISA和Westen blot分别检测CA对LPS刺激的巨噬细胞促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)分泌水平和ERK、p38和p65磷酸化水平的影响;体内试验部分,通过ELISA分析CA对LPS刺激后小鼠子宫组织TNF-α、IL-1β和IL-6分泌水平的影响,使用组织免疫荧光法检测小鼠子宫损伤相关因子(HMGB1)的表达水平,通过HE染色法观察小鼠子宫组织的病理变化,使用血常规法分析小鼠全血中白细胞数、中性粒细胞数和单核细胞数的变化。结果显示,CA质量浓度为12.5、25.0、50.0 mg/L对巨噬细胞活性均无显著影响,因此后续试验结果与CA的细胞毒性无关。CA可显著下调受到LPS刺激的巨噬细胞中的TNF-α,IL-1β和IL-6分泌水平,且具有浓度依赖性。此外,CA可显著下调受LPS诱导的巨噬细胞中ERK、p38和p65的磷酸化水平。CA可显著下调LPS刺激小鼠后子宫组织中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌水平;LPS刺激可增加小鼠全血中的白细胞数、中性粒细胞数和单核细胞数,而使用CA治疗可使其显著降低;相比于LPS刺激组,CA治疗组子宫组织中HMGB1的表达水平显著降低;LPS刺激小鼠子宫后导致子宫角出血和水肿,使用CA治疗后子宫角出血程度和水肿程度均有所降低。同时,HE病理切片显示LPS刺激组小鼠子宫组织中出现大量的嗜中性粒细胞浸润,子宫内膜上皮发生增生、水肿、坏死及脱落,CA(100 mg/kg)治疗后,子宫组织基本恢复正常,具有浓度依赖性。以上结果表明,CA可通过抑制小鼠腹腔巨噬细胞中MAPK和NF-κB通路的激活,下调巨噬细胞和子宫组织中炎症介质的表达水平从而减轻LPS诱导的小鼠子宫内膜炎。