细毛羊主要毛用性状检测及其评定方法

羊毛品质的检测方法、检测标准在推动毛纺工业发展、羊毛贸易以及细毛羊育种中具有重要作用。通过归纳国内外相关文献及标准,总结了国内外主要毛用性状及其检测标准;依据已有标准并结合国内在生产中的实际应用,详细介绍了2个羊毛产量性状与6类羊毛品质性状的客观测定方法,最后系统介绍了澳大利亚和中国开发的羊毛表型目测评定方法。文章可为开展羊毛纤维品质的统一测定和评估提供参考。

新常态下吉林市经济高质量发展指标体系研究

2014年,我国提出了经济发展进入新常态,意味着经济发展开始由数量追赶向质量追赶转型,经济发展过程中的不平衡不充分问题日渐显露,建立高质量发展指标体系,能够为当下经济转型提供新思路。在此背景下,文章借鉴国内现有指标体系,通过对3大产业经济现状分析和高质量发展内涵进行解读,构建了涵盖基础素质、法治文明、产业调整、提质增效、绿色发展、民生改善6个一级指标,52个二级指标的分级高质量发展指标体系,聚焦关键领域,以数据落实地方经济高质量发展水平,明确地方经济转型发力点。

不同基因编辑类型对FGF5基因编辑羊羊毛性状的影响

【目的】分析不同基因编辑类型对成纤维生长因子5(FGF5)基因编辑细毛羊羊毛性状的影响,为开展基因编辑细毛羊的羊毛性状遗传参数评估提供理论依据。【方法】收集181只FGF5周岁基因羊,分析编辑细毛羊羊毛自然长度、伸直长度、羊毛纤维直径和剪毛量等性状的数据。【结果】FGF5基因编辑细毛羊羊毛自然长度平均值为10.49 cm,变异系数为11.82%。FGF5-InDel和FGF5-HDR基因编辑细毛羊羊毛自然长度和剪毛量均极显著高于野生型(P<0.01)。-28 bp或-26 bp、2 bp和置换(c.61 C>T)的羊毛自然长度和伸直长度均极显著长于wt(P<0.01),-28 bp或-26 bp的剪毛量显著高于wt(P<0.05)。-28 bp基因型的双等位基因编辑和单等位基因编辑突变的羊毛自然长度和伸直长度均极显著长于野生型(P<0.01)。【结论】不同基因编辑类型的FGF5基因编辑细毛羊均可显著提高羊毛自然长度和剪毛量,可利用表型性状突出的后代组建核心编辑羊群体,促进FGF5基因编辑细毛羊选育扩繁。

绵羊TMEM182基因克隆、生物信息学及组织表达谱分析

【目的】本试验旨在克隆绵羊TMEM182基因编码区(CDS)全长序列,并通过在线软件分析TMEM182基因结构和表达蛋白序列,以探究其在绵羊各部位组织中表达水平的变化。【方法】从绵羊尾部脂肪组织中克隆获得TMEM182基因,利用在线生物学信息软件对TMEM182蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区、糖基化位点、信号肽、二级结构、三级结构和蛋白互作等进行预测分析。同时,采用实时荧光定量PCR方法检测TMEM182基因在绵羊13个组织中的相对表达量,这些组织包括大脑、小脑、心、肾、脾、肝、肺、皮肤、卵巢、尾部脂肪、皮下脂肪、肾周脂肪和肌肉。【结果】绵羊TMEM182基因CDS区全长序列为690bp,编码229个氨基酸,TMEM182基因序列在不同物种间具有较高的保守性。生物信息学预测分析显示,TMEM182属于稳定的疏水性蛋白,具有跨膜结构,无信号肽,具有3个N-糖基化位点,其蛋白二级结构主要由无规则卷曲(38.43%)和2α螺旋(30.57%)组成,而延伸链(24.89%)和β转角(6.11%)的占比相对较少,三级结构预测结果与二级结构预测结果相符。实时荧光定量PCR结果显示,TMEM182基因在肌肉、心和脂肪中表达量显著高于肝、肾、大脑、小脑、皮肤等其它部位组织(P<0.05)。【结论】成功克隆了绵羊TMEM182基因的CDS区片段,分析了该基因在绵羊肌肉组织和脂肪组织中特异性表达。这些研究结果为进一步探究TMEM182基因在绵羊肌肉生长发育和脂肪沉积过程中的分子作用机制提供了理论依据。

性别、季节和体型大小对吐鲁番沙虎巢域的影响

2008年6月份至2009年5月份对吐鲁番沙虎的巢域进行调查:2008年6月份至2008年8月份为繁殖季节(RS),2008年9月份至2009年5月份(冬眠期除外)为非繁殖季节(NRS)。利用截趾标志重捕法研究吐鲁番沙虎的巢域,共标记283只吐鲁番沙虎,累计繁殖季节24只,非繁殖季节43只重捕超过3次(其中13只个体在繁殖季节和非繁殖季节均够3次以上捕捉次数,为重复个体),可以用于计算个体巢域面积数据。利用软件MapGis计算最小凸多边形法(MCP)巢域面积,并分析性别、体型大小、季节等因素对巢域的影响。结果表明:吐鲁番沙虎非繁殖季节雄性、雌性与幼体各组间的巢域面积差异均显著,繁殖季节巢域面积差异不显著;雌雄个体不同季节或全年合并比较巢域面积差异性均不显著;非繁殖季节面积与吻肛长(SVL)显著相关、全年成体组的巢域面积与吻肛长显著相关;成体巢域面积季节差异显著(U=41,P=0.046),幼体则没有季节差异(U=159,P=0.537)。因而,吐鲁番沙虎的巢域大小受性别因素影响不大,体型大小对巢域面积有显著影响,由于繁殖、食物资源等的季节变化是影响吐鲁番沙虎巢域最重要的因素。

EDTA对绵羊精清中脱氧核糖核酸酶的抑制作用

为提高精子与外源ＤＮＡ共孵育时结合ＤＮＡ的效率，弄清精清在这一过程中的作用，将与精清孵育后的外源ＤＮＡ样品进行琼脂糖核酸电泳，比较电泳行为的差异。结果证实，精清中含有脱氧核糖核酸酶能降解外源ＤＮＡ，在精清中加入一定浓度的ＥＤＴＡ能有效地抑制该酶的作用，保护其中的外源ＤＮＡ。这为进一步改进精子载体转基因技术提供了实验依据。

建立高效的转基因动物鉴定技术体系

转基因动物的鉴定是转基因动物研究领域的重要内容。本文简要回顾了相关鉴定技术的研究进展 ,建立和完善了特异性PCR扩增及其产物酶切的转基因动物鉴定体系 ,在引物设计、PCR参数优化、设立内源性标记等方面作了进一步的改进 ,提高了PCR的特异性和可靠性。实验表明 ,PCR扩增及其产物酶切是一种准确、灵敏、简便。

人胰岛素原基因的PCR扩增、克隆和鉴定

根据已知的人胰岛素原基因序列设计引物 ,用PCR直接从人基因组DNA中获得天然的人胰岛素原基因 ,并将其克隆到 pUC1 8载体中 ,通过内切酶图谱及序列分析 ,证实所获得的人胰岛素原基因与已报道的序列完全一致。对于已知序列的基因克隆 ,PCR扩增法操作简捷 。

TLR2基因多态性与奶牛体细胞评分的相关性研究

旨在分析Toll-样受体2在奶牛隐性乳房炎中的作用。本研究以同一牛场内的中国荷斯坦奶牛和新疆褐牛为研究对象,选取奶牛体细胞数小于20万和大于100万的个体各15头,对TLR2基因进行测序,然后对发现的多态位点进行PCR-RFLP检测,分析这些位点与体细胞评分(SCS)的相关性。结果发现了TLR2基因E+189、E+631和E+2260 3个SNP位点,其中E+631和E+2260位点为本试验首次发现。E+189、E+631和E+2260 3个SNP位点在2个品种内均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05);3个位点在2个品种间的基因型分布差异都极显著(P<0.01)。分析每个SNP位点与SCS的相关性,显示TLR2E+189位点AA比BB和AB基因型个体的SCS高(P<0.05),AB与BB基因型个体的SCS差异不显著(P>0.05);说明BB基因型个体的乳房炎发病率低。而TLR2E+631的SCS和TLR2E+189位点表现相似,但各个基因型个体间的SCS差异不显著(P>0.05)。E+2260位点AA基因型个体比AB的SCS低(P>0.05)。新疆褐牛的SCS低于荷斯坦牛(P<0.01),说明新疆褐牛乳房炎发病率比荷斯坦牛低。在发现的3个SNP位点中,E+189位点对奶牛的SCS有显著影响(P<0.05),TLR2基因SNP位点在2个品种内的分布差异可能是新疆褐牛比荷斯坦牛乳房炎发病率低的原因之一。

尿素氨化醉马草的麦角新碱含量及其营养价值

通过完全随机试验测定了尿素氨化醉马草中毒性物质麦角新碱的含量及氨化醉马草对绵羊的饲喂效果。１２只新疆细毛羊周岁母羊（平均体重２７．３ｋｇ）随机分成２组，每组６只羊，并分别进行如下处理：１）自由采食未处理的醉马草，并每只羊每天给予２５０ｇ精料；２）自由采食经尿素氨化处理的醉马草，并每只羊每天给予２５０ｇ精料。结果表明，用５％尿素溶液对醉马草进行氨化处理（干草：尿素溶液＝１∶１（ｗ／ｖ））显著降低了醉马草中麦角新碱含量达５９．５％（由５６．０降至２２．７ｍｇ／ｋｇ，Ｐ＜０．０５），显著提高了粗蛋白质含量达６０．５％（由８．１％提高到１３．０％，Ｐ＜０．０５），但未显著提高体外干物质消化率（４０．３对４２．２％，Ｐ＞０．０５）。饲养试验表明，绵羊对氨化醉马草的干物质采食量显著高于未处理醉马草（２６７对１６２ｇ／ｄ，Ｐ＜０．０５），但两处理组绵羊的日增重水平差异不显著（－１１６对－１２８ｇ／ｄ，Ｐ＞０．０５）。

羊BLG基因5′和3′调控区克隆及其调控GFP基因在乳腺细胞的表达

and 3′ flanking region of ovine BLG were amplified from sheep genomic DNA according to the published whole sequence of ovine BLG and cloned to pGEM-T vector correspondently.By partially sequencing,the sequences of BLG 5′ and 3′ flanking were the same as that of publication completely.The recombinant structure used to direct exogenous gene especially to express in mammary gland was constructed by joining 4.2kb 5′ flanking with 2.1kb 3′ flanking.In order to assess the efficiency of BLG regulatory elements,green fluorescent protein (GFP) gene as a reporter was fused with BLG construct and transfected the mammary epithelial cells (TD47).Through observation under UV microscope and detection by fluorometer,it is demonstrated that the GFP has been successfully expressed in TD47 cell line.By virtue of direct observation and quantitative analysis,the BLG-GFP construct can be served as a model for the quick assessment of mammary gland expression construct.

鸡沙门氏菌外膜蛋白的免疫效果观察

用含EDTA的提取剂制备了鸡沙门氏菌外膜蛋白(OMP) ,经琼脂扩散试验检测,与同源株抗血清出现特异性沉淀线,与不同源株出现完全同源和部分同源的沉淀线,经SDS_PAGE分析,OMP抗原所含的蛋白质分子量介于14 ～67kD 之间,并用电洗脱方法分别制备了分子量为20 ～30kD、30～43kD和43～67kD的OMP抗原组分,并将其用于免疫攻毒试验,结果表明,OMP铝剂苗对鸡的死亡保护率为89.4 % ,油剂苗组为97.5% 。

鸡伤寒白痢沙门氏菌灭活菌苗的研制

由鸡沙门氏菌株 C79-1 3和 C79-2 0及新疆分离株 AS97-1 9和 AS96-4四株菌 ,经自制的改良硫代硫酸钠培养基 ,通气搅拌培养 ,甲醛灭活制成氢氧化铝佐剂苗 ,经免疫接种健康鸡。免疫后 2 1 d抗体水平达到最高 ,经 ANAE方法和 T淋巴细胞 E花环方法检测 ,免疫组的细胞免疫水平明显高于非免疫对照组 ,差异极显著 ,1 0 LD剂量强毒株攻菌试验 ,死亡保护率达 94 .7%,免疫组分离菌率为 3 .1 %,表明该苗具有良好的安全性和免疫效果。

绵羊MSTN基因慢病毒表达载体的构建及其对成肌细胞的分化作用

【目的】构建新疆细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,研究其在细毛羊成肌细胞分化中的作用,并探讨其作用机制。【方法】采用RT-PCR技术,扩增MSTN编码区序列,克隆入plex-mcs慢病毒表达载体,构建plex-MSTN慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定。将plex-MSTN包装成plex-MSTN慢病毒。用酶消化法分离培养新疆细毛羊成肌细胞,慢病毒感染制备MSTN过表达成肌细胞系,通过马血清诱导分化,Western blotting检测分化细胞MSTN基因的表达,免疫荧光分析分化肌管的融合率及肌管直径,Realtime RT-PCR检测分化相关基因的表达。【结果】克隆的新疆细毛羊MSTN基因编码区全长序列(1 128bp)与NCBI上公布的序列99.9%同源,仅在外显子2上存在单碱基突变;Western blotting检测结果显示,MSTN过表达成肌细胞过表达MSTN蛋白;免疫荧光检测表明,MSTN过表达成肌细胞的肌管融合率与肌管直径分别为5.69%和12.35μm,显著低于非转化成肌细胞(10.21%和18.5μm)(P<0.05);Re-altime RT-PCR结果显示,MSTN过表达成肌细胞中的Myogenin、p21、MyoD基因表达显著下调,Smad3基因表达极显著上调(P<0.01)。【结论】成功构建了细毛羊MSTN基因慢病毒表达载体,MSTN基因对细毛羊成肌细胞的分化具有显著的抑制作用,确定了MSTN基因与Myogenin、p21、MyoD及Smad3基因在成肌细胞分化过程中的调控关系。

一种提高体外培养细胞中期分裂相的新方法

为了提高体外培养细胞中期分裂相,用黄牛胎儿成纤维细胞系(YFF)和西门塔尔小牛成纤维细胞系(CNF)为实验材料,先经4℃低温休克再用秋水仙素处理后制备染色体,比较了不同低温休克处理时间获得的中期分裂相百分率,并运用该方法对20代内YFF和CNF核型变异进行了分析。实验发现,YFF和CNF经低温休克中期分裂相百分率显著高于对照组(P<0.05)。其中,20h低温组中期分裂相(31.7%和40.2%)高于对照组(4.7%和6.4%)5倍以上(P<0.01)。实验结果表明,4℃低温休克法是一种提高体外培养细胞中期分裂相的简便方法,适于监测体外培养细胞核型变异。

制苗用鸡大肠杆菌培养基及培养方法

采用通气搅拌培养方法对鸡大肠杆菌用 MM培养基和改良 MM培养基进行了对比试验 ,并用改良MM培养基对鸡大肠杆菌进行了静止培养、通气搅拌培养和连续通气搅拌培养的对比试验。结果显示 ,改良MM培养基培养的鸡大肠杆菌菌数和光密度 ( D)值明显高于 MM培养基 ;连续通气搅拌培养和通气搅拌培养的方法明显优于静止培养方法。

精子载体介导法生产转基因绵羊的研究

采用精子载体介导法先后对 1 952只绵羊进行转基因试验 ,经PCR和South ern检测 1 592只后代中 ,转基因羊 1 0 3只 ,最高转基因效率达 9.86 % ;其中 2只转基因母羊乳汁中人胰岛素原基因表达量分别达 1 99.97mg/L和 1 83.6 2mg/L。荧光原位PCR结果证实牛、山羊和绵羊的精子经处理能携带外源基因 ,精子携带外源DNA的比率分别为 :绵羊 2 7.1 2 %、山羊 30 .57%、牛 31 .1 6 % ;同时外源基因进入到精子细胞并定位于核及其外周区域。研究还提示使用精子载体介导法时必须充分洗涤精液以除去精清 。

新疆褐牛与荷斯坦牛NF-κB基因表达与TOLL样受体4基因型的关系

核转录因子NF-κB与动物机体的炎症反应、免疫应答、细胞分化和凋亡等密切相关,而Toll样受体(TLR)通过对侵入机体的病原微生物的抗原识别和信号转导,在NF-κB介导的炎症和免疫应答反应中发挥着重要作用。本研究在新疆褐牛和荷斯坦牛隐性乳房炎调查和TLR4外显子3+2021位点(E3+2021)SNP基因型与隐性乳房炎相关性研究的基础上,分析和比较了E3+2021 SNP位点3种不同基因型奶牛个体NF-κB信号通路上9个基因(NFκB1、NFκB2、RelA、c-Rel、RelB、IKKα、IKKβ、IKKγ和IκBα基因)转录水平的差异。结果显示,在BB基因型中,NFκB1和IKKα基因的mRNA转录水平在新疆褐牛与荷斯坦牛品种间差异显著(P<0.05),RelA、RelB、IKKβ、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平在品种间差异极显著(P<0.01)。在AB基因型中,IκBα基因mRNA转录水平在品种间差异显著(P<0.05)。在对新疆褐牛的研究中发现,RelB、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平在AB和BB两种基因型间差异显著(P<0.05);而在荷斯坦牛检测的9个基因的mRNA转录水平在AB和BB两种基因型间差异均不显著。因此,Toll样受体信号转导通路下游NFκB1、RelA、IKKβ、IKKγ和IκBα基因的mRNA转录水平在品种间的变化,可能与新疆褐牛乳汁中体细胞数(SCS)显著低于荷斯坦牛相关。在新疆褐牛中,RelB、IKKγ和IκBα基因mRNA转录水平的变化可能是AA基因型SCS显著高于AB基因型的原因之一。

鸡伤寒白痢沙门氏菌培养基和培养方法的研究

本试验用 5种培养基对鸡伤寒白痢沙门氏菌 (Sgp)菌株C79_2 0和AS96_1进行了静止培养对比试验 ,结果表明 ,改良硫代硫酸钠培养基和EEM培养基为最适合Sgp的培养基 ,硫代硫酸钠培养基次之 ,普通营养琼脂和SBG琼脂最差 ;对C79_13菌株用改良硫代硫酸钠培养基进行了通气搅拌培养、静止厌氧培养和静止需氧培养的对比试验及pH值对细菌生长的影响试验 ,结果表明 ,通气搅拌培养方法明显优于其它两种培养方法 ,调整pH的试验组菌悬液的OD值和菌数明显高于不调整pH值的试验组。

脂质体介导法转染体细胞效率的优化

为建立脂质体介导的高效体细胞转染体系,采用脂质体TransfastTM包裹编码增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的pCMV-EGFP质粒,转染5～13代山羊胎儿成纤维细胞,并用流式细胞仪检测不同DNA剂量、细胞汇合度、血清、转染时间及脂质体与DNA比例等参数对转染效率的影响。实验发现0.75μgDNA按1∶1的脂质体与DNA比例,在无血清条件下转染汇合50%细胞3h,转染效率最高可达40.7%±5%。4h转染时间、细胞汇合80%及转染体系中有血清会降低转染效率。随着DNA剂量的增加,转染效率呈剂量依赖性增高,但山羊成纤维细胞的活细胞数显著下降。实验表明TransfastTM能高效安全地介导外源基因转染山羊成纤维细胞。