清开灵注射液不良反应的初步实验研究

目的:对清开灵注射液不良反应的物质基础进行初步研究,以探讨其机制。方法:获得发生临床不良反应批号的清开灵注射液。采用免疫接种激发和被动皮肤过敏反应实验,观察特异性免疫反应;SDS-PAGE凝胶电泳检测大分子蛋白,琼脂糖凝胶电泳检测大分子核酸,HPLC/MS判断药物分子量范围。结果:实验动物有药物毒性反应表现:立毛、抽搐、自主活动减少,甚至死亡;特异性免疫激发实验未产生特异性抗体;清开灵注射液药物成分的分子量小于2 kD,不含有蛋白质和核酸类大分子物质。结论:清开灵注射液易引发药物毒性反应;药物直接过敏实验无抗体产生表明清开灵注射液变态反应的过敏原很可能为半抗原类化合物。

金翘热毒清颗粒体外抗炎作用研究

目的:探究金翘热毒清颗粒的体外抗炎作用。方法:通过MTT法测定A549细胞活性,观测金翘热毒清颗粒对LPS刺激下A549细胞活力的影响;通过ELISA法测定A549细胞产生TNF-α的量,观测金翘热毒清颗粒不同作用时间、不同给药方法对LPS刺激下A549细胞产生TNF-α的影响。结果:当LPS浓度为200μg/mL时,不同给药方法的金翘热毒清颗粒均能提高细胞活力,降低LPS对细胞的生长抑制(P<0.001);与模型组比较,金翘热毒清颗粒胞外灭活组和给药治疗组LPS刺激A549细胞产生TNF-α的量显著降低(P<0.001),且胞外灭活组优于金翘热毒清颗粒组(P<0.01)。结论:金翘热毒清颗粒体外可显著减少LPS对A549细胞的损伤,并降低因LPS刺激产生的TNF-α,提高细胞活力,提示其具有体外抗炎作用。

国内医疗器械临床试验现状的分析

近年来,医疗器械临床试验开展数量上升趋势明显,为此国家药品监督管理局针对医疗器械临床试验进行了一系列的改革措施,监管路径也越趋规范和严格。本文主要从临床试验机构角度针对目前国内医疗器械临床试验的现状,从机构分布、监督管理、风险管理和行业不足几方面进行总结和分析,旨在为参与临床试验的各方提供参考。

脑源性神经营养因子融合蛋白对大鼠局灶性脑缺血治疗作用的初步研究

目的研究脑源性神经营养因子融合蛋白（BDNF-PTD）在大鼠脑缺血模型中对大脑神经元的保护作用。方法SD大鼠采用随机数字表法分为给药模型组、空白模型组、阴性对照组、正常组，每组5只。前3组大鼠通过线栓法制作脑中动脉栓塞模型；正常组大鼠正常喂养，不做任何处理。栓塞1h后给药模型组腹腔注射50ug（50ug／mL）BDNF—PTD。阴性对照组注射1mL生理盐水，空白模型组不做处理。采用Bederson评分评价各组大鼠神经功能缺损情况。24h后将各组大鼠断头取脑，大脑切片TTC染色，观察各组大鼠脑梗死面积。结果给药模型组大鼠神经功能缺损不明显，Bederson评分明显低于空白模型组及阴性对照组（P〈0．05）。TTC染色结果提示给药模型组大鼠脑梗死区域面积较空白模型组、阴性对照组明显缩小，差异有统计学意义（p〈0．05）。结论BDNF-PTD能通过血脑屏障并且发挥其生物学效应，起到保护脑缺血后神经元作用。

BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及脑中分布

目的在大肠杆菌中表达并纯化BDNF．TAT融合蛋白，研究其靶向性及在脑中的分布。方法重组质粒PET-30（a）-BDNF—TAT转染至大肠杆菌BL21（DE3）pLysS中，IPTG诱导其表达后用SP-Sepharose阳离子交换柱纯化，纯化后蛋白用0．4m01／L精氨酸倍比稀释法复性。KM种小鼠采用随机数字表法分为给药组[尾静脉注射复性后BDNF．TAT融合蛋白4μg（适量生理盐水溶解）1、阴性对照组（尾静脉注射等体积生理盐水）和空白对照组（不进行任何处理），每组各3只。3h后提取小鼠脑组织全蛋白．Western blotting检测脑组织中BDNF-TAT表达，SABC免疫组化染色观察BDNF—TAT在脑组织中的分布。结果获得纯度约90％活性的BDNF—TAT融合蛋白。给药组BDNF-TAT蛋白的相对表达量为1．897±0．286，阴性对照组BDNF—TAT蛋白的相对表达量为0．615±0．234。空白对照组BDNF—TAT蛋白的相对表达量为0．335±0．154，比较差异有统计学意义（F=39．019，P=0．000）。免疫组化染色结果显示给药组BDNF-TAT主要分布于小鼠脑组织海马CA1、CA3和DG区．而阴性对照组和空白对照组中没有明显阳性染色。结论BDNF-TAT融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达，并能通过外周给药靶向至小鼠脑组织。