成鼠与幼鼠超排后生殖器官的组织形态学比较

【目的】以小鼠为模式动物,比较幼鼠超排后生殖器官组织形态学变化,为家畜中实施幼畜超排提供理论参考。【方法】选取体重一致的幼龄和成年小鼠各12只,随机分为对照组和试验组,每组6只。试验组激素超排处理,大体解剖结合组织切片和透射电镜,分析激素处理后幼鼠与成鼠生殖器官的形态学差异。【结果】成鼠超排组黄体数量显著低于幼鼠超排组(P<0.05),然而黄体面积和直径极显著高于幼鼠超排组(P<0.01)。超微结构显示颗粒黄体细胞和膜黄体细胞中均可见丰富脂滴,成鼠超排组的颗粒黄体细胞排列较幼鼠超排组紧密。成鼠超排组子宫腔上皮较成鼠对照组卷曲明显,同时子宫角宽、子宫体宽、子宫角面及直径较成鼠对照组显著降低(P<0.01或P<0.05);幼鼠超排组的子宫角直径、环肌层厚度及纵肌层厚度均显著高于(P<0.01或P<0.05)幼鼠对照组。【结论】激素处理后幼鼠排卵数目较成鼠多,但成熟卵泡的面积较成鼠小,这可能会影响卵子的质量;成鼠和幼鼠子宫对超排激素的反应性不同。

“双一流”背景下“实验设备仪器使用”实践课教学改革初探

“双一流”建设实施办法指出,人才培养的过程要以学生为主体,注重加强学生创新思维和实践能力的培养.因此高等院校需要进一步加强本科生实践教学质量,以提高学生实践操作能力、应用创新能力及综合素养.结合甘肃农业大学动物科学专业开设的“实验设备仪器使用”课程,探讨了“双一流”建设背景下加强实验室安全管理和仪器规范操作的必要性及重要意义,剖析了教师在授课过程中存在的突出问题,构建了“三层次、四模块”实践教学体系,细化了课程考核方式,以期培养出满足现代畜牧业发展需求的高素质复合型人才.

两种白颖苔草对梯度NaCl胁迫的生理生化响应及综合评价

本试验以两个白颖苔草(Carex rigescens)品种‘绿坪1号’和‘绿坪2号’为材料,使用0,100,200和300 mmol·L^(-1)NaCl处理21 d,对处理后白颖苔草叶片进行了叶绿素含量、相对电导率、相对含水量、过氧化氢含量、丙二醛含量、钾钠比、净光合速率、气孔导度、胞间二氧化碳浓度、蒸腾速率、超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性指标的测定,并对各测定值进行隶属函数分析比较,探究两种白颖苔草在长期盐胁迫下的耐盐特性。结果表明:‘绿坪1号’中丙二醛含量和过氧化氢含量在盐浓度300 mmol·L^(-1)处理后比对照相比有更大幅度的上升;两材料中超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性变化不一致。随后经过相关性分析、主成分分析和隶属函数分析,提取3个主成分作为白颖苔草耐盐性评价的综合指标,经过计算得出耐盐性较强的是‘绿坪2号’。研究结果对白颖苔草在盐碱地利用及后续耐盐机理研究具有参考意义。

紫花苜蓿SAUR基因家族的鉴定及其在非生物胁迫中的表达模式研究

SAUR(small auxin-up RNA)是植物早期响应生长素的一类基因,参与植物生长发育与非生物胁迫响应等一系列生物过程。在拟南芥、水稻、棉花等物种中已经对SAUR基因家族进行了系统鉴定与分析,但是,在世界上最重要的豆科牧草紫花苜蓿中关于SAUR基因家族的研究尚未开展。本研究利用生物信息学的方法在紫花苜蓿参考基因组共鉴定到433个MsSAUR成员,并对其基因组位置、基因结构、启动子顺式作用元件以及不同组织中的表达模式进行了分析。同时,利用紫花苜蓿在不同非生物胁迫下的转录组数据,发现有5、11、19以及12个MsSAUR成员分别响应干旱、盐、冷以及碱胁迫,MsSAUR14/94/254可以同时响应干旱和盐胁迫,MsSAUR297可以同时响应干旱、盐以及碱胁迫,MsSAUR306可以同时响应干旱、盐以及冷胁迫。本研究结果可为后期通过基因工程技术创制高产抗逆新种质提供重要的候选基因。

全基因组水平紫花苜蓿WRKY转录因子家族鉴定与表达模式分析

WRKY转录因子是植物中最大的基因家族之一,在植物生长发育以及非生物胁迫过程中发挥重要的作用。目前,WRKY基因家族成员已经在多个植物物种中进行了广泛的研究和分析。然而,WRKY转录因子尚未在四倍体紫花苜蓿全基因组水平上进行鉴定与分析。本研究系统鉴定了紫花苜蓿WRKY基因家族成员,并对其在不同胁迫处理下的表达模式进行了分析。结果显示,共有198个WRKY转录因子不均匀分布在紫花苜蓿的32条染色体上,其中7号染色体的数量最多。系统进化树结果显示,WRKY基因家族成员可以分为3个组。在这些WRKY转录因子中,有42个响应盐胁迫,7个响应碱胁迫,19个响应冷胁迫和37个响应干旱胁迫,同时发现MsWRKY154和MsWRKY166可以同时响应盐、干旱、冷以及碱胁迫。本研究的结果可为紫花苜蓿WRKY转录因子的生物学功能深入研究奠定基础,同时可为紫花苜蓿分子育种提供有价值的信息。

MYCN基因扩增的H3和IDH野生型儿童型弥漫性高级别胶质瘤1例

患者男性,17岁,因“突发头痛6天”入院。头颅MRI示右侧额叶异常信号,内伴囊变坏死,实性部分T1WI呈等低信号,T2WI呈等高信号,DWI实性部分明显高信号,增强可见明显强化(图1),考虑高级别胶质瘤;术中见肿瘤位于脑白质浅层,灰红色质软,血供丰富,伴囊性变,内侧沿大脑镰下向对侧生长,肿瘤全切。

小尾寒羊BMF基因在发情不同阶段卵巢及卵泡发育过程中的表达分析

旨在初探BMF基因在小尾寒羊卵泡发育过程中的生物学功能,为将来深入探索其调控机理提供理论依据。对小尾寒羊实施同期发情,采用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)及免疫荧光染色(IF)方法检测BMF基因及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢中的表达量;随后分离不同直径的卵泡,分析目的基因在大、中、小卵泡中的表达差异。结果显示,BMF mRNA在撤栓后42 h卵巢中的表达量显著高于撤栓后18 h(P<0.05),其编码蛋白表达结果与mRNA基本一致;BMF蛋白主要表达于卵泡颗粒细胞和卵泡膜细胞中;进一步分离卵泡,发现BMF基因及其编码蛋白表达量均在中卵泡中显著高于大卵泡和小卵泡(P<0.05)。以上结果表明,BMF基因可能参与卵巢周期性活动,在卵泡发育过程中发挥重要作用。

SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊卵巢活动中的功能分析

为探究SMAD基因家族重要成员SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊繁殖活动中的生物学功能,利用生物信息学技术对SMAD2、SMAD3和SMAD4基因的蛋白理化性质、亲疏水性和亚细胞定位进行分析,并对其二级结构、蛋白互作进行预测及GO(gene ontology)和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)的富集分析;然后以小尾寒羊为研究对象,通过免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)确定SMAD2、SMAD3和SMAD4蛋白在卵巢组织中的表达,利用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(western blot,WB)方法测定SMAD2、SMAD3和SMAD4基因mRNA及其编码蛋白在不同生理阶段卵巢组织和不同直径卵泡中表达水平。结果显示,SMAD2、SMAD3和SMAD4蛋白为亲水性蛋白,理论等电点分别为6.67、6.73和6.50,在不同生理阶段卵巢组织中的阳性表达主要位于卵母细胞、卵泡膜细胞和颗粒细胞,且二级结构中α螺旋和无规则卷曲的占比较高,其蛋白与FOXH1、ACVR1B、SMAD1、TGFβR1、TGFβR2、ZFYVE9、SKI、SKIL、TGIF1和ENSOARP0000001869蛋白存在互作关系。SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在TGF-β受体信号通路、TGF-β受体结合、TGF-β激活受体活性中发挥生物学功能,且在TGF-β信号通路富集。SMAD2和SMAD4蛋白在撤栓后42 h卵巢组织中的表达量显著高于撤栓后18 h,其mRNA表达趋势及其编码蛋白表达趋势总体一致;而SMAD3基因mRNA及其编码蛋白的表达量在不同生理阶段卵巢组织中差异不显著。SMAD3基因mRNA及其编码蛋白在中卵泡中的表达量显著高于大卵泡;SMAD2和SMAD4基因表达量在不同直径卵泡中差异不显著。综上所述,SMAD2、SMAD3和SMAD4基因在小尾寒羊卵巢周期性活动中的生物学功能存在差异,SMAD2和SMAD4基因参与小尾寒羊发情初期至排卵前的卵巢生理变化,但不参与卵泡发育;而SMAD3参与卵泡发育。以上研究结果为进一步探索SMAD基因家族在小尾寒羊卵巢活动中的分子机理提供理论参考。

不同发育时期绵羊乳腺组织lncRNAs筛选、鉴定及功能分析

长链非编码RNA(long non-coding RNAs, lncRNAs)是一类长度大于200个核苷酸(Nucleotide,nt)的非编码RNA分子,它们的表达调控了奶牛和奶山羊的乳腺发育和泌乳性能,但它们调控绵羊乳腺发育的报道较少。为深入研究lncRNAs在绵羊乳腺发育中的作用,本试验以泌乳高峰期和空怀期小尾寒羊的乳腺组织为研究对象,利用RNA-Seq构建lncRNAs表达谱,筛选差异表达lncRNAs,进行靶基因的GO注释和KEGG通路富集分析,并构建lncRNA-miRNA-mRNA的网络互作图。结果表明,4 183个lncRNAs在绵羊乳腺组织中表达,803个lncRNAs和1 637个lncRNAs仅分别在泌乳高峰期和空怀期乳腺组织中特异性表达。在2组之间筛选到246个差异表达lncRNAs,其中28个lncRNAs在空怀期乳腺组织中上调表达,218个lncRNAs的表达量显著下调。GO注释和KEGG富集分析发现,差异表达lncRNAs的靶基因显著富集在行为负调节、脂肪垫发育和碳水化合物生物合成过程的调控等条目,以及cAMP、ECM、AMPK和Rap1等信号通路。lncRNA-miRNA-mRNA分析结果表明,差异表达lncRNAs可作为miR-199a-3p、miR-432、miR-200c等的“海绵体”,在绵羊乳腺发育中发挥作用。本研究揭示了小尾寒羊泌乳高峰期和空怀期乳腺组织中lncRNAs的表达特征及生物学功能,为深入研究lncRNAs在绵羊乳腺发育中的调控机制提供了理论依据。

细胞印片技术在脑组织淋巴瘤术中冷冻诊断中的应用

脑组织淋巴瘤临床较少见,术前影像学诊断困难,需与胶质瘤、转移癌、生殖细胞肿瘤、炎性脱髓鞘假瘤和感染性病变等鉴别。因为各肿瘤治疗方案不同,所以术中冷冻病理诊断直接影响临床手术决策,临床医师对脑肿瘤术中冷冻诊断的依赖度极高。由于脑组织含水量高,冷冻切片常不可避免地产生大量冰晶,导致切片质量欠佳,严重影响病理医师对脑肿瘤的诊断准确率[1]。研究表明,细胞学诊断可显著提高术中脑肿瘤诊断与常规最终诊断的符合率[2]。

间变型脑膜瘤临床病理分析

目的探讨间变型脑膜瘤(anaplastic meningioma,AM)的临床病理特征及病理诊断。方法收集17例AM,分析其临床表现、病理特点、免疫组织化学及分子遗传学,并复习文献。结果患者年龄46~84岁,女性6例、男性11例,6例继发于低级别脑膜瘤、11例为原发性AM,均行手术治疗,9例行辅助治疗。镜下瘤细胞密集,瘤细胞多形性、异型性显著,核分裂象活跃,1例伴腺癌样化生。免疫组化瘤细胞弥漫表达波形蛋白(vimentin),不同程度表达上皮细胞膜抗原(EMA)、生长抑素受体(SSTR2),腺癌样化生区表达细胞角蛋白。1例行NGS检测示NF2缺失、PTEN缺失,2例行ARMS法示TERT启动子野生型。随访1~46个月,11例原发性AM中5例于7~25个月复发,转移2例,死亡3例。结论AM是一种少见的恶性肿瘤,组织形态多样,出现腺癌样化生时,需与腺癌转移至脑膜瘤、滑膜肉瘤等鉴别。

紫花苜蓿盐诱导HD-Zip类转录因子MsHB2的克隆及功能分析

【目的】在已有的一条紫花苜蓿(Medicago sativa L.cv.Zhongmu-1)盐诱导未知基因的EST序列基础上,克隆其(MsHB2)全长序列并分析其功能,以进一步了解其在紫花苜蓿中的耐盐调控机理。【方法】以先前获得的EST序列为基础设计引物,使用RACE法从紫花苜蓿中克隆得到MsHB2的3′和5′末端序列,经DNAMAN软件拼接后得到其全长序列。使用多种生物信息学软件对MsHB2的开放阅读框,编码蛋白等电点、分子量、疏水性、亚细胞定位、进化关系等进行预测分析。构建MsHB2的亚细胞定位瞬时表达载体,使用基因枪转化法将MsHB2与GFP在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。将生长30 d的中苜一号分别进行300 mmol·L-1NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA胁迫处理,取胁迫处理0、2、4、10、24 h后的根和茎叶组织提取总RNA并进行荧光定量PCR分析。构建了MsHB2的植物超表达载体,转化农杆菌GV3101菌株,使用农杆菌花序侵染法转化拟南芥并在盐胁迫条件下对转基因株系进行相关表型分析。【结果】将RACE法克隆得到MsHB2的3′和5′末端序列拼接后得到1 126 bp的全长序列,序列分析表明,其编码蛋白包含247个氨基酸,具有一个同源异型结构域和一个亮氨酸拉链结构域,与拟南芥HD-Zip第I类转录因子ATHB12具有较高相似性。进化树聚类分析表明MsHB2属于第Ⅰ类同源异型域亮氨酸拉链蛋白。洋葱亚细胞定位分析表明MsHB2定位于细胞核。转录水平表达分析表明MsHB2受300mmol·L-1 NaCl和0.1 mmol·L-1 ABA胁迫诱导而表达量显著升高。转基因研究表明在NaCl和ABA胁迫下,过量表达MsHB2的转基因拟南芥表现比野生型拟南芥更敏感。【结论】从紫花苜蓿中克隆得到一个定位于细胞核的同源异型域亮氨酸拉链蛋白基因MsHB2,其在紫花苜蓿中受NaCl和ABA胁迫诱导,并在NaCl和ABA胁迫条件下抑制转基因拟南芥的生长。推测MsHB2可能通过ABA信号途径参与紫花苜蓿盐胁迫应激调控,并在盐胁迫等非生物胁迫下对紫花苜蓿的抗逆性起负调控作用。

非小细胞肺癌中EGFR突变与临床病理特征的关系

目的观察非小细胞肺癌(non-small cell lung cancers,NSCLC)患者肿瘤组织中表皮生长因子受体(epidermal growth fac-tor receptor,EGFR)19号和21号外显子突变情况,探讨其与临床病理特征的关系。方法应用显微切割技术及扩增阻滞突变系统检测108例石蜡包埋NSCLC组织中EGFR基因第19号和21号外显子突变情况。结果 108例NSCLC患者中,EGFR基因突变率为36.1%(39例),其中19号外显子突变率为13.0%(14例),21号外显子突变率为23.1%(25例);EGFR基因突变的患者多为不吸烟、肿瘤直径较小(<3 cm)、腺癌、无远处转移及临床分期较早(P<0.05),与患者性别、病理分级及淋巴结转移无显著相关性(P>0.05);所有鳞癌标本中均无EGFR基因突变;EGFR突变的患者应用吉非替尼靶向治疗后原发肿瘤和脑转移灶明显缩小。结论 EGFR基因19号和21号外显子突变作为有效的NSCLC靶向治疗的临床筛选指标,很可能参与NSCLC的发生、发展,与相关的临床病理指标结合可为NSCLC的靶向治疗提供更可靠的依据。

后肾腺瘤5例临床及病理学特征分析

目的探讨后肾腺瘤(MA)的临床及病理学特征。方法总结5例MA的临床、影像学、病理学形态特征和免疫组化结果,并行文献复习。结果本组5例后肾腺瘤,男性1例,女性4例。CT平扫表现为界清低密度影;CT血管造影(CTA)提示瘤体呈少血管改变。肉眼观肿瘤境界清楚,呈灰白、灰黄色,质地中等;镜下肿瘤细胞小,均匀一致,核大质少,无异型性及核分裂象,肿瘤细胞呈腺泡状排列,可见乳头状结构,并可见砂砾体钙化。免疫组化示WT-1、CD57和vimentin均(+),S-100、CK7和CKpan部分(+),而CgA、Syn和EMA(-)。术后随访提示预后较好,无复发和转移征象。结论以病理学形态特征结合免疫组化有助于明确后肾腺瘤的诊断。

4个绒山羊群体KAP13-1基因的遗传多态性分析

【目的】对中国河西绒山羊、内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊和陇东绒山羊4个绒山羊群体KAP13-1基因的遗传特征进行分析,为揭示绒山羊遗传特征和生产利用提供基础数据。【方法】采用PCR-SSCP方法,检测河西绒山羊、内蒙古绒山羊、辽宁绒山羊及陇东绒山羊(共721只)KAP13-1基因的多态性。同时基于DA遗传距离用UP-GMA法进行聚类分析,以明确各群体间的遗传关系。【结果】基因组DNA扩增后得到491bp的扩增产物,经SSCP分析,从4个绒山羊群体KAP13-1基因中共发现6种基因型,4个等位基因中存在5个变异位点,这些多态位点主要为点突变,且均处于编码区,其中转换位点3个(占60%),颠换位点2个(占40%)。在170和197位分别发生了T→G、C→G的错义突变,导致氨基酸分别由Leu、Thr变为Arg、Ser。该基因在河西绒山羊与陇东绒山羊中均存在4个等位基因,而内蒙古绒山羊未检测到C和D等位基因,辽宁绒山羊未检测到D等位基因。聚类结果显示,河西绒山羊与陇东绒山羊之间的遗传距离较小,在系统发生树中聚为一支,辽宁绒山羊与内蒙古绒山羊聚为一支。【结论】KAP13-1基因在4个绒山羊群体中呈中度多态,群体间存在差异。生态学作用对4个绒山羊品种的进化过程有一定的影响。

非小细胞肺癌中S100A2、S100A4及S100P表达及意义

目的研究钙结合蛋白S100家族中S100A2、S100A4及S100P基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,阐明其与肺癌发生及转移的关系。方法以12例正常肺组织为对照,采用半定量RT-PCR技术检测17例腺癌和12例鳞癌及其癌旁组织中S100A2、S100A4及S100P mRNA的表达水平。结果(1)S100A2、S100A4及S100P mRNA在NSCLC中的表达量均高于癌旁和正常组织。(2)肺腺癌中三者mRNA表达量均高于癌旁和正常组织;肺鳞癌中S100A4和S100P mRNA的表达量高于正常组织。(3)根据不同的临床分期,S100A2、S100A4 mRNA在Ⅱ期与Ⅲ期中的表达量均高于Ⅰ期;S100P mRNA在Ⅲ期中的表达量高于Ⅰ期。(4)根据有无淋巴结转移,三者mRNA在有淋巴结转移癌组织中的表达量均高于无淋巴结转移的癌组织。(5)根据有无静脉癌栓,S100A4 mRNA在有静脉癌栓的癌组织中的表达量高于无静脉癌栓的癌组织。结论S100A4、S100A6、S100P在NSCLC中表达增加,尤其是在有淋巴结转移及TMN分期越高的癌组织中表达量增加,提示其可能与NSCLC发生,特别是转移有关。

焊后热处理对308L不锈钢焊缝δ-铁素体形态及性能的影响

对308L奥氏体不锈钢焊缝在650、750和900℃三种温度下进行焊后热处理(PWHT),研究PWHT对焊缝δ-铁素体形态变化的影响。使用光学显微镜对焊态和焊后热处理试样中的δ-铁素体组织结构演变进行观察。结果表明,经高温PWHT焊缝金属中的δ-铁素体网状枝晶结构被打破,由连续的网状结构变为不连续的岛状结构;试样的蠕变-疲劳寿命随PWHT温度的升高而增加。

OPG/RANKL/RANK轴在非小细胞肺癌发生及淋巴转移中的作用

目的:检测OPG/RANKL/RANK轴在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及NF-κB的活性和含量,进而探讨其临床意义。方法:以15例正常肺组织为对照,采用实时荧光定量PCR方法,检测17例腺癌和15例鳞癌及其癌旁组织中OPG、RANKL、RANKmRNA的表达量,并用免疫印迹的方法检测核蛋白和总蛋白中NF-κBp65的含量。结果:①OPG、RANKL、RANKmRNA的表达量及RANKL/OPG比值在正常肺、NSCLC癌旁和癌组织中呈梯度升高,差异均有统计学意义。②在有淋巴结转移病例(n=19)的癌组织中OPG、RANKL、RANKmRNA的表达量及RANKL/OPG比值均显著高于无淋巴结转移的病例(n=13)。③在肺癌、癌旁及正常肺组织中,NF-κBp65核/总蛋白含量之比依次降低,差异有显著性。④NF-κBp65核/总蛋白含量之比在有淋巴结转移的癌组织要显著高于无淋巴结转移的癌组织。结论:在人NSCLC中,OPG/RANKL/RANK轴的激活进一步激活NF-κB信号通路,可能在肿瘤的发生和淋巴转移中起重要作用。

拉保持对316L奥氏体不锈钢焊接接头低周疲劳循环应力响应及损伤机制的影响

在873 K温度下对316L奥氏体不锈钢母材和焊缝分别进行连续和拉保持低周疲劳试验,使用光学显微镜(OM)和透射电镜(TEM)对试样位错微观结构和裂纹扩展形貌进行观察,分析拉保持对母材和焊缝低周疲劳循环应力响应及损伤机制的影响.结果表明,母材在连续和拉保持低周疲劳试验初期都发生循环硬化,焊缝在连续低周疲劳试验中发生连续循环软化,而在拉保持试验后期则出现明显循环稳定阶段;母材和焊缝试样拉保持低周疲劳寿命低于其连续低周疲劳寿命;母材和焊缝在连续低周疲劳试验中裂纹主要以穿晶方式扩展,而在拉保持试验中焊缝是以沿晶或混合方式扩展.

观花乔木在昆明市公园绿化中的应用

对昆明市公园的观花乔木种类进行全面实地调查,并对其种类、现有应用配置、色彩运用、乡土性及应用频率进行分析。并结合调查分析对现阶段昆明公园绿化中存在的问题提出了改进建议。