杜仲含药血清诱导骨髓间充质干细胞定向分化的实验研究

目的研究补肾中药杜仲含药血清对骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖及定向分化的影响。方法将第4代MSCs以5×106接种于9块96孔板,3组,每组8孔;2块6孔板,每板3孔,2 d后换液,加入诱导液。分为空白组、地塞米松组、杜仲组。空白组加入含10%胎牛血清(FBS)的L-DMEM培养基继续培养,地塞米松组在基础培养基加入诱导剂(含β甘油磷酸钠10mmol/L,地塞米松0.1μmol/L,维生素C 50 mg/L),杜仲组为含10%杜仲含药血清的L-DMEM培养基。分别自加诱导液第1天起,采用MTT法测量96孔板细胞数,每天1块板;在第10天取出1块6孔板做ALP染色;第20天做6孔板茜素红染色。结果杜仲含药血清组OD值呈现出明显的上升趋势,而空白组和地塞米松组无明显上升趋势;第10天杜仲组及地塞米松组ALP染色阳性,第13天起可见白色钙结节,第20天茜素红染色阳性。结论杜仲含药血清能促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,并刺激细胞增殖。

“肾主骨、生髓”与骨髓间充质干细胞定向分化的研究

目的:通过补肾中药诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)定向分化的研究,阐述"肾主骨、生髓"理论。方法:中药药液灌胃SD大鼠4d后经腹主动脉采血制备含药血清。将第4代MSCs以5×106接种于2块6孔板,每板6孔,分为空白组、巴戟天组、杜仲组、补骨脂组、肉苁蓉组、淫羊藿组。细胞长至80%时,各中药组加入含药血清L-DMEM培养基,空白组原培养基继续培养;诱导第10天取出1块6孔板做ALP染色;另一块第20天做6孔板茜素红染色。结果:巴戟天组、杜仲组、肉苁蓉组、淫羊藿组于第10天ALP染色阳性,第14天左右起可见白色钙结节,第20天茜素红染色阳性。结论:以"肾主骨、生髓"理论指导,补肾中药能诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。