三七总皂苷调控破骨细胞外泌体中差异miRNA表达抑制成骨细胞铁死亡

背景:激素性股骨头坏死多是由于长期大量使用激素所致,但具体的发病机制尚未明确,有待于进一步研究。目的:筛选出三七总皂苷干预破骨细胞来源外泌体中的差异miRNA,在此基础上构建成骨相关铁死亡调控网络,以探索激素性股骨头坏死发生的潜在机制及研究方向。方法:MTT实验检测不同浓度地塞米松和不同质量浓度三七总皂苷对Raw264.7细胞系的毒性作用;抗酒石酸酸性磷酸酶染色和TUNEL染色检测三七总皂苷对破骨细胞抑制和凋亡的影响;从三七总皂苷干预的破骨细胞中提取外泌体,对外泌体进行测序找出差异表达miRNA,通过CytoScape 3.9.1构建并可视化差异表达的miRNA与mRNA间的调控网络;通过GO分析和KEGG分析筛选候选mRNA;最后筛选出铁死亡相关的差异基因,构建铁死亡相关基因的调控网络。结果与结论:①通过MTT实验确定了适合干预Raw264.7细胞的地塞米松浓度(0.1μmol/L)和三七总皂苷质量浓度(1736.85μg/mL);②三七总皂苷对破骨细胞有抑制作用并能促进其凋亡;③从破骨细胞来源外泌体样本中鉴定出20个差异miRNA,通过靶标mRNA预测出11种成骨相关的差异miRNA,并构建了4个上调的差异表达miRNA对应于155个下调的候选mRNA以及7个下调的差异表达miRNA对应于238个上调的候选mRNA的调控网络;④在差异基因中筛选出与铁死亡相关的基因24个,最终构建了12个网络(miR-98-5p/PTGS2,miR-23b-3p/PTGS2,miR-425-5p/TFRC,miR-133a-3p/TFRC,miR-185-5p/TFRC,miR-23b-3p/NFE2L2,miR-23b-3p/LAMP2,miR-98-5p/LAMP2,miR-182-5p/LAMP2,miR-182-5p/TLR4,miR-23b-3p/ZFP36,miR-182-5p/ZFP36)。这些结果表明三七总皂苷可能通过调控破骨细胞外泌体来源miRNA的表达来调节成骨细胞铁死亡,为激素性股骨头坏死的机制研究提供新的思路。

ARCOⅡ期非创伤性股骨头坏死塌陷风险预测模型的构建与验证

目的:分析ARCOⅡ期(未塌陷)非创伤性股骨头坏死(NONFH)发生塌陷的危险因素,并构建列线图风险预测模型,为识别ARCOⅡ期NONFH高塌陷风险患者提供简便工具和理论依据。方法:以2017年7月至2024年2月诊治的ARCOⅡ期和ⅢA期(塌陷早期)NONFH患者为研究对象。根据6∶4将患者随机分为训练组和验证组,以筛选塌陷的独立危险因素、构建预测模型并检验模型效能。首先利用医院电子病历系统提取患者资料并用R统计软件对训练组患者的各项指标进行LASSO回归分析以筛选最优特征值,再用多因素Logistic回归分析筛选塌陷的危险因素并构建预测模型。在训练组及验证组中比较模型对ARCOⅡ期塌陷风险的预测性能和区分度,评价指标包括一致性指数(C-index)、校准曲线,采用列线图对模型可视量化并通过决策曲线评估其临床效用。结果:共纳入符合标准的ARCOⅡ期NONFH患者78例(95髋)和ARCOⅢA期NONFH患者80例(102髋),共197髋。多因素Logistic回归分析显示,疼痛时间长(OR=1.176,95%CI:1.090~1.313)、股骨头受累百分比(PFHI)>30%(OR=25.257,95%CI:2.771~436.321)、骨髓水肿(BME)3级(OR=1.963,95%CI:0.017~22.424)、联合保留角(CPA)<118.7°(OR=6.814,95%CI:1.658~37.099)、红细胞体积分布宽度高(OR=1.097,95%CI:0.611~1.570)、血小板体积分布宽度高(OR=1.174,95%CI:0.119~13.149)为股骨头塌陷的独立危险因素(P<0.05)。本研究构建的ARCOⅡ期NONFH患者塌陷风险预测模型具有良好区分度,其在训练组和验证组中的C-index分别为0.844、0.878。在训练组和验证组中,校准曲线显示列线图预测结果与实际观测结果具有良好的一致性。决策曲线分析结果表明,预测模型可在较大概率阈值范围内带给患者更多净获益。结论:疼痛时间长、PFHI>30%、BME 3级、CPA<118.7°、红细胞和血小板体积分布宽度高可作为ARCOⅡ期股骨头塌陷发生的预测因素,有助于临床医生早期发现并干预股骨头塌陷的发生、发展。

BOPPPS教学模式下中医骨伤科学课程思政实施探索

课程思政作为思政教育的一个重要组成部分,要在高校的专业课程中全覆盖实施,与思政课程同向同行。中医骨伤科学课程的主要授课对象为针灸推拿、中医学及中西医结合等专业的本科生和研究生。该课程的主要教学目标是使学生系统掌握中医骨伤科学的基础理论和常见病的辨证论治规律,熟悉中医骨伤科的主要内治法、外治法和操作技能,掌握骨折、脱位、筋伤、骨病等疾病的诊治原则,具备中医临床辨证思维能力,并对学生进行传统文化教育,以培养学生的传统文化底蕴和专业思想。本研究基于BOPPPS模式,将中医骨伤课程与思政教育有机结合,探索有效的课程思政教学模式,以期提高教学质量,真正培养出德才兼备的中医人才。

三七总皂苷介导PI3K/AKT/Bcl-2信号通路调节MC3T3-E1自噬和凋亡治疗激素性股骨头坏死

目的探讨三七总皂苷(PNS)调控PI3K/AKT/Bcl-2通路调节MC3T3-E1自噬和凋亡并改善股骨头坏死大鼠股骨头病理变化的分子机制。方法在体外,MC3T3-E1细胞分为空白组、激素组、三七总皂苷组(PNS组)和PI3K/AKT通路抑制剂组。在体内,动物分为空白组、模型组和治疗组。用免疫印迹法分析PNS对激素环境下MC3T3-E1的PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、Bcl-2蛋白的影响;以碱性磷酸酶检测法观察MC3T3-E1成骨分化,茜素红实验检测MC3T3-E1成骨分化过程中钙盐沉积情况。用免疫组织化学法观察各组大鼠股骨头Bcl-2蛋白的表达;HE染色用于观察各组大鼠股骨头的病理变化。结果细胞实验中,免疫印迹实验显示:和空白组比较,激素组的p-PI3K和p-AKT蛋白显著性上调(P<0.05),而Bcl-2明显下调(P<0.05),PNS逆转了这一趋势;和PNS组比较,抑制剂组无显著性差异(P>0.05)。激素组的碱性磷酸酶和茜素红检测发现MC3T3-E1成骨分化能力明显弱于空白组,而PNS显著提高了其成骨分化能力。动物实验中,和空白组比较,免疫组化发现模型组的Bcl-2蛋白显著性下调(P<0.05),和模型组比较,PNS显著提高了Bcl-2蛋白表达(P<0.05);HE染色发现,和空白组比较,模型组的骨小梁明显稀疏,塌陷增多,脂肪空泡明显增多,而PNS逆转了这一趋势。结论三七总皂苷可提高激素环境下MC3T3-E1细胞的成骨能力,改善激素性股骨头坏死大鼠模型股骨头病理变化,其机制可能与调控PI3K/AKT/Bcl-2信号通路促进成骨细胞自噬和减少凋亡相关。