小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的HPLC-MS/MS定量分析方法建立与药代动力学特征研究

目的 建立小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的高效液相色谱-质谱联用(HPLC/MS-MS)定量分析方法,并研究其在小鼠体内的药代动力学特征。方法 KM小鼠采用尾静脉注射(20 mg/kg)、腹腔注射(20、40和60 mg/kg)和灌胃(200、400和600 mg/kg)给药后,在0、5、30 min及1、2、4、6、8、12、16和24 h眼底静脉丛取血,分离血浆样品,HPLC-MS/MS分析样品中黄卡瓦胡椒素B的浓度,计算药代动力学参数,并评价不同途径给药下黄卡瓦胡椒素B的生物利用度。结果 在0.2~800.0 ng/mL浓度范围内,黄卡瓦胡椒素B线性关系良好(r=0.9995),定量下限为0.2 ng/mL,准确度在-8.50%~12.50%,精密度在1.73%~12.03%,且无明显基质效应(88.68%~102.04%),确证该方法适用于小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的定量分析。药代动力学结果显示,黄卡瓦胡椒素B腹腔注射和灌胃给药后在体内吸收迅速,血药浓度在给药0.083 h即为峰值,在腹腔注射20~60 mg/kg和灌胃200~600 mg/kg给药范围内呈现良好的线性药代动力学过程。黄卡瓦胡椒素B的绝对生物利用度腹腔注射给药为53.29%,灌胃给药为1.38%。结论 本研究建立的HPLC-MS/MS定量分析方法,操作简便、准确、灵敏度高,成功应用于小鼠血浆中黄卡瓦胡椒素B的药代动力学特征研究。

芦荟大黄素促进皮肤创伤修复作用机理研究

目的:研究芦荟大黄素对皮肤创伤的修复作用及作用机理。方法:(1)MTS法测定含芦荟大黄素100、200、300、400μg/ml的培养液对大鼠成纤维细胞增殖的作用;(2)使用含芦荟大黄素100、200、300、400μg/ml的药液治疗大鼠皮肤创伤模型,检测创缘组织bFGF、EGF、vEGF表达量及羟脯氨酸含量。结果:(1)含400μg/ml芦荟大黄素的培养液使细胞成活率最高;(2)含300μg/ml芦荟大黄素的药液对大鼠创伤的疗效最佳。结论:芦荟大黄素可有效促进创伤愈合,其促进创伤愈合的机理之一为增强皮肤及皮肤血管相关的生长因子的表达,从而促进创面的修复愈合。

加味归脾汤对乳腺癌MDA-MB-435株抑制作用的研究

目的:研究加味归脾汤对人类乳腺癌细胞的抑制效果及原理。方法:不同浓度加味归脾汤作用MDA-MB-435细胞,阳性对照药为Docetaxel,通过MTS、细胞凋亡分析和Caspase-8检测等评价药物的抑制效果。结果:加味归脾汤高浓度组的抑制率在48 h时高于Docetaxel,72 h时与Docetaxel相同。流式细胞仪72 h检测结果显示,加味归脾汤高浓度组和Docetaxel总凋亡程度相近。Caspase-8表达量检测显示,加味归脾汤高浓度组在48 h、72 h时均高于Docetaxel。结论:加味归脾汤高浓度组的抑制效果可以达到或超过Docetaxel,其抑制作用可能是通过Caspase途径起效。

仙台病毒高滴度病毒制备方法的建立

目的:建立使用传代细胞稳定大量地制备高滴度的仙台病毒(SeV)的方法,取代成本高、周期长、操作繁琐、易污染的鸡胚制备仙台病毒的方法,用于实验研究。方法:首先观测不同细胞感染仙台病毒后发生病变的时间、程度以及产毒量,确定仙台病毒敏感细胞株并确定病毒产量高峰期,连续在细胞中传3代测量上述指标。其次观测染毒时病毒吸附时间不同对病毒滴度的影响。综合分析后建立制备高滴度仙台病毒的方法。结果:大鼠脑胶质瘤细胞C6株对仙台病毒高度敏感,细胞出现病变所需时间短且明显,病毒产量最高。仙台病毒滴度与染毒时的吸附时间呈正相关,病毒最佳吸附时间为90min。接种病毒后72h收获的病毒滴度最高,平均为11TCID50,并且病毒可以在细胞内连续稳定传代。结论:确认大鼠脑胶质瘤细胞C6株为仙台病毒的敏感细胞,且病变快、明显,病毒产量高。为在体外深入研究仙台病毒和大量繁殖高滴度仙台病毒提供了实验方法。

基于均匀设计的中药有效组分复方配伍研究

目的探索基于均匀设计的中药抗氧化有效组分复方的研究分析方法。方法采用均匀设计和改进最小角回归分析,对甘草总黄酮、银杏叶提取物、淫羊藿总黄酮和黄芪总苷组成的中药组分复方不同配比体外清除DPPH自由基的作用进行研究。结果通过分析获得了中药组分配伍清除DPPH的回归方程,优化组合后进行药效学验证,结果显示该中药组分配伍最佳剂量组合为甘草总黄酮0.8mg/ml、银杏叶提取物3.144mg/ml、淫羊藿总黄酮0.024mg/ml和黄芪总苷0.036mg/ml。结论上述中药组分配伍后能有效清除DPPH自由基;本实验采用的均匀设计结合改进最小角回归分析适合"非线性、小样本"生物实验数据数据分析,为筛选评价抗氧化中药有效组分复方提供了合适的研究方法。

利用磁珠法结合MALDI-TOF MS进行慢性心衰气阴虚证血液蛋白质组学研究的方法学探讨

目的:建立磁珠法结合MALDI-TOF MS进行慢性心衰气阴虚证血液蛋白质组学研究的实验方法。方法:采用MALDI-TOF-MS技术检测不同磁珠分离的患者血液蛋白质谱,从采集、蛋白提取、反复冻融、重复性、基质样品比例等方面分析其影响。结果:血清质谱峰均多于血浆,弱阳离子磁珠出峰数量优于铜螯合磁珠,气阴虚证患者与健康组比较蛋白表达有明显差异。结论:该方法作为一种高通量、快速分离、制备和鉴定的蛋白质组学技术,整个实验体系稳定、可靠、重复性好,适用于中医证候蛋白质组学的研究。

黄芪 水蛭对实验性脑缺血大鼠的改善作用研究

目的观察黄芪、水蛭对大鼠局灶性脑缺血引起的脑梗死的保护作用。方法大鼠按体质量均匀分为假手术对照组、模型对照组、黄芪、水蛭(9∶1,7∶1,5∶1)剂量组,预给药4d后采用线栓阻断大脑中动脉血供造成大鼠局灶性脑缺血模型(MCAO),观察黄芪、水蛭对脑缺血大鼠脑梗死比例以及凝血酶原时间(PT)的影响。结果与模型对照组比较,黄芪、水蛭组可不同程度降低局灶性脑缺血大鼠脑梗死面积(P<0.01,P<0.05),并能明显延长PT时间。结论黄芪、水蛭可明显降低大鼠脑缺血梗死率。

体外诱导C57BL/6小鼠CIK细胞研究

目的:诱导培养C57BL/6小鼠CIK细胞,并检测其对肿瘤细胞杀伤作用。方法:使用三种细胞因子及抗CD3单抗体外诱导C57BL/6小鼠脾细胞,用CCK-8试剂检测对肿瘤细胞杀伤作用。结果:培养出的CIK细胞主要为CD8+NK1.1+细胞,对肿瘤细胞有较强杀伤作用。结论:成功诱导出C57BL/6小鼠CIK细胞。

基于AHP法高校财务风险评价体系研究

随着高等教育事业的蓬勃发展,高校资金投入产出量的不断加大,财务风险逐渐凸显,主要表现在:贷款规模盲目扩大引发负债风险,校办企业经营不善产生投资风险,内控制度管理薄弱导致运营风险高等。文章通过层次分析法,分析现阶段高校普遍存在的新的风险,建立风险预警体制,找出影响高校财务风险的关键因素,并针对性地提出风险规避措施。

Metridia荧光素酶检测条件的优化

目的:探讨培养基p H、血清对Metridia荧光素酶(MLuc)检测的影响并尝试找到一种优化的检测条件。方法:构建表达MLuc的逆转录病毒载体,瞬时转染人宫颈癌细胞系He La,制备收获MLuc;利用化学发光仪检测不同条件下的培养基对MLuc发光性能的影响,并尝试通过不同缓冲液与试剂的组合代替培养基来获得最佳条件。结果:培养基p H变化导致MLuc发光值产生较大波动,血清的存在会导致检测背景;添加0.02%(V/V)NP-40的磷酸盐缓冲液(PBS)(p H=7.4)作为MLuc检测的缓冲体系代替培养基,其发光值大小相当,检测背景值由原来的600左右降低到20左右。结论:以添加0.02%NP-40的PBS作为MLuc检测的缓冲体系可消除培养基p H、血清的影响,使检测结果更加准确和灵敏。

流式微球分析法检测小檗碱对RAW264.7细胞分泌炎症因子的影响

建立并优化了在FACSAriaⅠ流式细胞仪上应用流式微球分析法(CBA法)检测分泌型炎症细胞因子的方法。用CBA法检测小檗碱对经LPS诱导的小鼠RAW264.7细胞分泌IL-6I、L-10I、FN-γ、MCP-1、TNFI、L-12p70等细胞因子的影响。结果显示,小檗碱可显著抑制LPS诱导的各种炎症细胞因子的分泌,并呈良好的量效关系。12 mol/L的小檗碱对IL-10I、FN-、TNF及IL-12 p70的抑制率分别为5.10±0.24%、18.64±3.95%、22.59±0.56%、68.27±2.49%、48 mol/L的小檗碱抑制作用更显著,抑制率分别为45.62±1.51%、39.00±3.58%、79.61±5.17%9、2.03±0.85%。各细胞因子荧光值与其实际浓度具良好的线性关系,相关系数均在0.999以上。流式微球分析法是一种灵敏高效、节省成本、重复性好的检测方法,为肿瘤及免疫相关炎症因子的高通量检测提供了现实可行的方法。

东方红三号通信卫星转发器

1 引言 八十年代,世界各国包括中国等国家和地区建立起国内卫星通信系统.中国在1984年对国内卫星通信进行了规划,确定在“七五”期间将卫星通信和卫星广播作为重点发展目标。 我国从1984年起成功地发射了两代5颗东方红系列的同步通信卫星。历经三代卫星的研制与改进,使我国卫星通信从试验阶段进入了实用阶段。第一代试验通信卫星命名为东方红二号,于1984年4月8日发射成功,定点在125°E。卫星载荷设计为覆球波束天线及两路转发器,总射频功率为16W。第二代东方红二号甲实用通信卫星,天线采用单椭圆波束覆盖全国和4路转发器,总射频功率40W。于1988年3月7日在西昌首次发射,定点87.5°E。

兔骨髓间充质干细胞的制备及诱导成骨的实验研究

目的:在体外原代培养兔骨髓间充质干细胞,观察兔骨髓间充质干细胞的体外生长特性,为用于组织工程学的种子细胞培养提供实验基础。方法:自兔股骨、胫骨取骨髓,分离骨髓间充质干细胞,分别采用常规培养液及含矿化液的培养液两组进行培养,对第3代细胞进行酶动力学法碱性磷酸酶(ALP)活性检测及钙结节茜素红染色,观察细胞在体外长期培养时钙结节形成情况。结果:两组细胞其培养液中的ALP含量不断升高,经过两独立样本t检验,矿化液诱导组第2,6,10天的ALP水平较正常对照组均明显升高(P<0.05)。细胞表现出成骨细胞特性,在体外长期不传代培养时可形成钙结节。结论:兔骨髓间充质干细胞在体外适当的培养条件下,增殖能力很强,可以向成骨细胞方向分化,可作为组织工程学的种子细胞。

抗人白蛋白单克隆抗体制备与尿微量白蛋白半定量金标试纸研制

目的制备抗人白蛋白单克隆抗体和尿微量白蛋白（microalbuminuria，MCA）半定量试纸，作MAC检测，与传统检测方法比较其灵敏度和特异性。方法在制备抗人白蛋白单克隆抗体的基础上，采用人白蛋白作为包被抗原，应用胶体金免疫层析技术竞争抑制法原理制备出人尿微量白蛋白半定量检测试纸。用所研制的试纸与市售尿白蛋白ELISA诊断试剂平行检测50例正常健康成人晨尿样品和56例临床样本。结果用所研制的试纸与ELISA诊断试纸二者符合率达100％。结论本研制试纸完全可以满足临床检测要求，且操作简单、灵敏度高、特异性强、稳定性好，具有广泛的应用前景及广阔的发展空间。

毛蚶抗癌蛋白主要组分的分离纯化及作用研究

目的:对毛蚶抗癌蛋白(ASAP)进行了分离纯化,并研究分离后毛蚶抗癌蛋白主要组分的抗癌作用。方法:依次利用阴离子交换层析、疏水作用层析、凝胶过滤层析对ASAP进行分离;联合p53基因表达激活及CCK-8细胞活力测定检测分离组分的抗癌活性;CCK-8细胞活力测定法检测毛蚶抗癌蛋白主要组分对人结直肠癌Colo205、HT-29、人肺癌A549、人慢性髓性白血病K562细胞活力的影响;Annexin-V/PI双染结合流式细胞术检测细胞凋亡;Western Blotting法检测细胞凋亡相关蛋白:Mcl-1、Bcl-2、Bax、procaspase-3的表达情况。结果:从ASAP中分离得到的毛蚶抗癌活性蛋白主要组分C6在24~72 h内对Colo205、HT-29、A549、K562的细胞活力均有不同程度的抑制作用,其中对Colo205细胞的抑制作用最明显,作用72 h时IC50为5.7μg/mL;C6可以诱导Colo205细胞凋亡且呈一定剂量依赖性;C6可以抑制抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达,上调凋亡蛋白Bax的表达,引起凋亡蛋白caspase-3前体procaspase-3下降。结论:毛蚶抗癌蛋白主要组分C6对人多种癌细胞活力具有抑制作用,可诱导人结直肠癌Colo205细胞发生caspase通路依赖的细胞凋亡。

黄连解毒汤联合头孢他啶治疗小鼠铜绿假单胞菌肺炎

目的通过实验证明黄连解毒汤能够协同头孢他啶治疗小鼠铜绿假单胞菌下呼吸道感染(PAP)并讨论其可能机制。方法黄连解毒汤联合头孢他啶(联合用药)与铜绿假单胞菌(PA)共培养,验证黄连解毒汤对铜绿假单胞菌杀灭作用。联合用药治疗PAP模型小鼠,测定血炎性因子、肺组织病理切片。结果与阳性对照药物相比,联合用药能够显著降低PA生物膜形成相关基因表达,提高杀灭效果。联合用药能够显著降低感染模型小鼠体内TNF-α、IFN-γ、IL-6/10/12p70等细胞因子含量,改善肺部炎细胞浸润,减少组织破坏。结论黄连解毒汤具有抑制铜绿假单胞菌生物膜形成和体内抗炎作用,与头孢他啶联合应用能够提高PA杀灭效果,抑制炎性反应,改善炎细胞浸润,减少组织破坏,显著提高PAP治疗效果。

膨胀土临界状态强度特性及其模型拟合

针对蒙自地区膨胀土,进行了饱和重塑条件下的固结排水(CD)与固结不排水(CU)试验,系统研究了饱和土在不同固结围压σ3、初始干密度ρd、初始含水量ω0、剪切速率υ、排水条件下的应力应变特性。通过对临界状态试验结果的归一化处理,揭示了不同试验方法对同一土样抗剪强度量测差异的内在统一性,得到了重塑饱和膨胀土在固结排水与不排水条件下p'-q-ν空间内的破坏线。利用双曲线模型较好地拟合了弱硬化型应力应变曲线,用指数曲线模型拟合了弱软化型应力应变曲线,为模拟边坡在降雨条件下的抗剪强度变化及构筑物土体处于正常水位时的强度状态等工况提供了技术参数与理论支持。

关于公路工程施工现场管理应注意的问题

公路工程施工是一项复杂的技术、经济活动,具有流动性强、协作性高、周期长、受外界干扰及自然因素影响大等特点,同时涉及到众多的社会主体和多变的自然因素,会受到物质、技术条件的制约。因此,如何根据公路施工的特点,加强施工现场管理、将施工各要素进行科学、

公路桥梁引道不均匀沉陷防治措施

桥梁引道产生不均匀沉降,导致桥头产生跳车现象,在公路建设中是一个比较普遍的问题。对于高等级公路,桥头引道不均匀沉降量2cm以上就感觉到跳车,5cm以上就会感觉到严重跳车,此时会引起交通安全问题。

水泥路面加铺沥青层施工浅析

近些年来,随着公路建设的发展,公路的改建和扩建工程越来越多,在旧水泥混凝土路面上加铺沥青面层是一种常用的、有效的路面修复技术。它具有工期短、对交通影响小、修复后路面服务性能好等优点,国内有相当多的公路采用了此类改造方案。