基于线粒体PCR基因芯片的骨关节炎发病机制

背景:软骨细胞具有修复受损软骨组织和维持软骨完整性的重要作用。线粒体功能障碍与细胞凋亡、老化和骨关节炎的病理过程密切相关。目的:通过线粒体PCR芯片技术研究骨性关节炎软骨细胞中线粒体基因的差异表达。方法:收集骨性关节炎患者及正常成人车祸后截肢者的关节软骨细胞,经过细胞的提取和培养、RNA提取和质量检测、mRNA提取和cDNA合成等处理后进行实时定量PCR检测。结果与结论:所检测到的84个与线粒体相关的待检测基因中有18个线粒体基因在骨性关节炎中发生了显著改变。以骨性关节炎患者软骨细胞线粒体基因相对正常成人软骨细胞线粒体基因的表达倍数表示基因表达的改变情况,其中倍数改变和倍数调节均大于2的上调基因有BBC3,BCL2,SLC25A37等15个,倍数改变小于0.5和倍数调节小于-2的下调基因有CPT1B,SLC25A16,SLC25A24共3个。18个线粒体差异基因功能分类如下:膜极化和电位:BCL2,BCL2L1,TP53,UCP1,UCP3;线粒体转运功能:BCL2,BCL2L1,CPT1B,FXC1(TIMM10B),MFN2,STARD3,TP53,UCP1,UCP3;小分子转运功能:SLC25A16,SLC25A2,SLC25A24,SLC25A31,SLC25A37;靶蛋白:FXC1(TIMM10B),MFN2;线粒体蛋白转入:COX18,FXC1(TIMM10B);内膜转运:FXC1(TIMM10B),TIMM17B;线粒体裂变和融合:COX18,MFN2;线粒体局限化:MFN2;凋亡基因:BBC3,BCL2,BCL2L1,SOD2,P53。结果表明,骨性关节炎软骨细胞中线粒体发生了明显的能量代谢功能障碍。

扩大内需对加速江西崛起的绩效分析

2008年下半年以来，面对国际金融危机，江西省委、省政府结合江西实际，果断做出强力推动项目建设，加大固定资产投资的决策，牢牢把握应对危机的主动权，以全球视野和战略眼光，从变化的形势中捕捉和把握难得发展机遇，在逆境中发现和培育有利因素，创造性地贯彻落实中央各项部署，超前发展，奋力在这一轮经济波动中加快我省崛起步伐。

银杏注射液与低分子肝素联合治疗脑梗死的临床疗效观察

目的研究银杏注射液与低分子肝素联合方案治疗脑梗死的临床疗效。方法选取2008年10月至2013年10月间于本院进行治疗的128例脑梗死患者,将其分为治疗组和观察组各64例,治疗组患者给予银杏注射液联合低分子肝素钠治疗,对照组患者给予复方丹参注射液与低分子右旋糖酐治疗,对比两组患者的治疗效果。结果 1两组患者治疗前后的血流动力学改变,治疗后的红细胞压积、全血比粘度及血小板聚集度的比较,治疗组均优于对照组,P<0.05,具有统计学意义。2两组患者治疗前后的神经功能缺损评分比较,治疗组患者经过治疗后的神经缺损程度评分明显降低,优于对照组患者,P<0.05,具有统计学意义。3两组患者临床疗效对比,治疗组患者的总有效率明显高于对照组患者,P<0.05,具有统计学意义。结论银杏注射液与低分子肝素联合案治疗脑梗死的临床疗效好,能有效促进神经功能恢复,是目前临床治疗脑梗死较为有效的方案之一,值得临床推广应用。

室内环境检测相关问题的探讨

人们大多数的时间都是在室内度过,所以,室内环境的优劣是影响人们日常生活的重要因素。针对室内环境检测存在的问题,现阶段室内环境检测的误区以及室内环境检测的要点进行了分析。

室内环境检测的常见问题分析和防治措施研究

近年来,随着我国城市化进程的加快,人们经济收入水平不断提高,人们对生活的质量有了更高的要求,越来越关注健康问题——身体、心理及环境等方面。环保意识的加强,使社会各界更加关注环境污染问题,室内环境检测应运而生。针对室内环境检测的常见问题和防治措施进行了分析,以供借鉴。

供电所以保障人身安全为目标的急抢修清单式分级管理

电力安全生产关系到国家人民生命财产安全,安全风险如果防范不及,应对不力,就会使小的风险发展成大的风险。而生产班组是电网企业的基层组织,是最基础的细胞单元,班组的安全管控将直接影响电网企业的安全运行水平。

塞来昔布联合双醋瑞因对大鼠骨关节炎软骨炎症信号通路的影响

目的 观察塞来昔布（CLX）与双醋瑞因（DC）在治疗骨关节炎（OA）方面的疗效,并探讨其分子机制.方法 建立OA大鼠模型后,将其分为CLX、DC组与两种药物联用组,分别测定每组的炎性介质表达、软骨细胞凋亡、c-Jun氨基末端激酶信号通路的蛋白表达水平.结果 白细胞介素-1β含量：OA＋ CLX＋ DC组[（14.91 ±0.80） ng/dl],与OA＋ CLX组[（30.75±2.00） ng/dl]和OA ＋DC组[（20.22±0.70） ng/dl]比较均显著降低（P＜0.05）;一氧化氮含量：OA＋CLX＋ DC组[（9.91 ±0.70） nmol/mg],与OA＋ CLX组[（13.75±0.97） nmol/mg]和OA＋ DC组[（14.22±0.87） nmoL/mg]比较均显著降低（P＜0.05）;半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3活性、丝裂原活化蛋白激酶激酶1、MAP激酶激酶7和c-Jun氨基末端激酶的表达：OA＋ CLX＋ DC组分别与OA＋ CLX和OA＋ DC组比较均显著降低（P＜0.05）.结论 CLX与DC联用可缓解OA,其主要通过抑制炎症信号通路发挥作用.

p53正向细胞凋亡调控因子基因表达改变对关节软骨细胞凋亡的影响

目的 观察p53正向细胞凋亡调控因子基因（PUMA）的表达对关节软骨细胞凋亡的影响.方法 通过白细胞介素（IL）-1β干预建立小鼠骨关节炎模型,再采用小分子RNA干扰片段对小鼠软骨细胞中的PUMA进行抑制,转染前后分别检测PUMA蛋白的表达及细胞凋亡.结果 空转染对照组PUMA蛋白表达量为空白对照组的6.11倍,空转染对照组分别为两个实验组的2.02倍和3.30倍.染色显示细胞凋亡率在空白对照组为3.6％,空转染对照组29.6％,两个实验组分别为9.0％和13.2％,实验组和空转染对照组的差异有统计学意义（P＜0.01）,抑制PUMA表达后细胞凋亡明显减少.结论 骨关节炎小鼠软骨细胞中PUMA基因表达增加,提示PUMA基因参与了骨关节炎软骨细胞凋亡.

胆碱乙酰基转移酶活性快速测定诊断臂丛损伤的实验研究

目的寻找一种简单快速、能在手术中准确客观地判断臂丛损伤神经残端功能的方法。方法选用成年雌性SD大鼠45只,随机分成两组,分别制成臂丛节前和节后损伤的动物模型,采用放射性同位素的方法测定损伤后不同时间臂丛神经中胆碱乙酰基转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)的活性,然后用统计学的方法总结其中规律。结果节前、节后两种损伤类型胆碱乙酰基转移酶的活性均随时间降低,节前组ChAT活性随时间迅速降低,很快达到正常活性的1/10(675±258) cpm；节后组ChAT活性随时间缓慢降低,90 d后只降低到正常活性的1/2(4906±1119)cpm。结论术中快速测定ChAT的活性可以用来定量地区分臂丛损伤后的神经残端功能,以判定残端的可利用性。

蚕丝-胶原支架用于兔前交叉韧带重建的研究

目的评估蚕丝-胶原支架用于兔前交叉韧带(ACL)重建后,关节腔内韧带再生和骨隧道内腱-骨愈合。方法Na2CO3脱胶法对生蚕丝进行脱胶处理,乙酸抽提法获取Ⅰ型胶原,然后使用热交联和冷冻干燥法制备蚕丝-胶原材料。20只12周龄新西兰大白兔(由河南省实验动物中心提供),对左膝关节使用蚕丝-胶原支架重建ACL。术后4、16周两个时间点随机处死实验动物的一半,每组标本中的5个进行组织学检测,包括关节腔内韧带的组织学检测和骨隧道腱-骨愈合的组织学检测;每组中余下5个标本进行Micro-CT和生物力学检测。组间比较采用两独立样本t检验。结果术后4周,关节腔内的蚕丝-胶原支架表面可见大量的细胞浸润,细胞排列方向杂乱,细胞周围基质较少,且材料内部细胞浸润较少;骨道内蚕丝-胶原材料内可见细胞浸润,细胞排列较为松散,腱-骨界面可见新生骨组织,骨小梁结构明显;Micro-CT显示骨隧道内新生骨较少,新生骨小梁稀疏,骨体积分数(BV/TV)=(19.36±2.29)%,骨密度(BMD)=(245.04±17.68)mg/cm3。术后16周,关节腔内支架表面和内部均可见大量细胞浸润,细胞呈纤维细胞形态,排列方向较为一致,与支架长轴方向一致,细胞周围基质较多,免疫组织化学染色显示肌腱蛋白-C(Tenascin-C)表达较4周明显增多;骨道内蚕丝-胶原材料内细胞浸润进一步增多,细胞排列较4周时更为有序,腱-骨界面骨组织趋于成熟,骨组织与支架材料结合更加紧密;Micro-CT显示骨隧道内新生骨较4周明显增多,BV/TV=(39.25±1.51)%(t=16.010,P<0.05),BMD=(400.88±58.32)mg/cm3,组间比较差异有计学意义(t=5.718,P<0.05);16周5例标本测得最大拉力[(43.67±6.52)N],刚度[(9.18±0.76)N/mm],较4周差异有统计学意义[最大拉力(25.87±4.57)N,t=4.994,P<0.05;刚度(4.85±0.84)N/mm,t=8.556,P<0.05]。结论蚕丝-胶原支架用于兔ACL重建,不仅能获得较好的关节腔内韧带再生,同时能够达到良好的腱-骨愈合。

IQ结构域三磷酸鸟苷酶激活蛋白1的表达对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响

目的观察IQ结构域三磷酸鸟苷（GTP）酶激活蛋白1（IQGAP1）在甲状腺癌细胞增殖和侵袭中的作用。方法通过Westernblot对IQGAP1在甲状腺癌细胞中的表达进行分析，然后敲低IQGAP1表达后检测17β-雌二醇（E2）条件下雌激素受体仅（ERa）的转录活性，以及细胞增殖和细胞迁徙。结果甲状腺癌细胞内IQGAP1表达明显上调，为正常细胞的5．0倍（P〈0．05）。敲低IQGAP1表达后甲状腺癌细胞增殖能力明显降低，24h增殖率为79．27％，48h为57．49％，72h为55．14％（P〈0．05），细胞迁徙率明显减低（细胞浸润数从115个降至45个），E2条件下ERa的转录活性显著下调（1．45降至0．28，P〈0．05）。敲低ERa可阻断IQGAP1过表达引起的磷酸化细胞外信号调节激酶1／2（p-ERK1／2）和细胞周期蛋白D1（CyclinD1）蛋白表达上调（相对值分别从1．95降至0．40，1．75降至0．35，P〈0．05）。结论IQGAP1可与ERa相互作用，调节甲状腺癌进展过程中ERa的转录活性，影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭。

微小RNA-345-5p抑制Smad1蛋白翻译调节成骨细胞功能

目的探索微小RNA(miRNA,miR)-345-5p对成骨细胞的调控机制。方法利用miRNA芯片寻找差异表达miRNA。pLVX-IRES-ZsGreen1质粒构建miR-345-5p过表达载体,建立过表达miR-345-5p大鼠成骨细胞、过表达变异miR-345-5p大鼠成骨细胞和空白对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)及生长曲线实验对比3组细胞增殖能力,双荧光素酶报告基因实验验证miR-345-5p与Smad1基因相互作用。构建miR-345-5p+空质粒、对照RNA+空质粒、对照RNA+Smad1质粒和miR-345-5p+Smad1质粒组,在大鼠成骨细胞内验证miR-345-5p与Smad1基因的相互作用。采用Student-t检验和ANOVA分析。结果生信分析提示miR-345-5p在骨折中的高表达,Smad1为其调控分子。将miR-345-5p质粒导入大鼠成骨细胞,CCK-8提示miR-345-5p质粒较miR-345-5p变异体质粒(48 h:q=7.453,P<0.01,72 h:q=15.34,P<0.01)及空白质粒(48 h:q=6.963,P<0.01,72 h:t=12.68,P<0.01)成骨细胞的活性显著增强。生长曲线显示转入miR-345-5p质粒的成骨细胞48 h时细胞数量显著低于空白对照组(q=3.814,P<0.05),72 h时细胞数量显著低于miR-345-5p变异(q=11.010,P<0.01)和对照组(q=10.410,P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-345-5p可降低野生型Smad1-3’端非编码区(3’UTR)质粒组荧光素酶的活性,细胞实验证实miR-345-5p显著降低大鼠成骨细胞的活性和生长曲线,过表达Smad1后成骨细胞的活动和生长曲线得到恢复。结论miR-345-5p通过调控Smad1分子调控大鼠成骨细胞的增殖参与骨折的愈合。