体外定点突变法构建凝血因子ⅦC329G突变型真核表达载体

以野生型凝血因子Ⅶ(FⅦ)真核表达载体为模板,通过定点突变方法构建FⅦC329G突变型表达载体;序列分析鉴定C329G突变重组子。重组子目的基因的序列分析结果显示FⅦ基因编码的第329个半胱氨酸残基被甘氨酸残基替换(C329G),即成功构建了FⅦC329G突变型真核表达载体,为下一步在哺乳类细胞中表达该突变型FⅦ,并对其进行功能性研究提供了条件。

对献血员血液检验结果的分析

为了确保库血质量,控制和减少输血传播疾病的发生,我院自1995-03-30起对来我院献血的献血员建立了严格的“双检”制度(即采血前和用血前进行2次检验)收到了良好的效果。现将部分血液检验结果分析报告如下:1 材料 1995-03～12以来我院献血多来自农村的献血员,共计4760人次。

凝血因子Ⅶ C329G突变导致遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症

目的探讨遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症发病的分子机制。方法将野生型和C329G突变型的FⅦ真核表达载体转染BHK-21细胞进行体外表达,并对表达产物进行免疫学和凝血活性检测。结果FⅦC329G突变后,其蛋白的合成和分泌不受影响,突变型与野生型FⅦ的表达量相近,但突变型FⅦ无凝血活性。结论FⅦ第329位的半胱氨酸对其凝血活性功能起关键作用。当它被甘氨酸替换后,即丧失其凝血活性,此为FⅦC329G突变导致遗传性凝血因子Ⅶ缺乏症发病的分子机制。

病毒白细胞介素-10的基因克隆与原核表达

目的:构建病毒白细胞介素IL-10(vIL-10)基因的原核表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,用PCR扩增EB病毒BCRF1基因。PCR产物经EcoRI和XhoI双酶切后,克隆至原核表达载体pET-28a中,以重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,在IPTG诱导下表达目的蛋白。结果:以终浓度为100μmol/L的IPTG于30℃诱导6h后,重组菌可高效表达相对分子质量(Mr)约为24000的His-vIL-10融合蛋白。结论:成功地克隆vIL-10的编码基因并在大肠杆菌中高效表达,为制备抗vIL-10单克隆抗体(mAb)、分析vIL-10结构与功能的关系提供了条件。

EB病毒包膜糖蛋白gp85真核表达载体的构建

用基因工程技术克隆EB病毒中抗原性较强的膜蛋白gp85的编码基因BXLF2,构建真核表达载体。以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增出BXLF2基因。PCR产物经SnaBⅠ和NotⅠ双酶切后克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,用双酶切和DNA测序鉴定重组质粒。重组质粒双酶切的片段大小与预期符合,重组克隆外源基因的测序结果与文献报道一致。结果表明,EB病毒gp85的编码基因BXLF2被成功地克隆入真核表达载体pPIC9K,为下一步在毕赤酵母中表达EB病毒gp85蛋白建立了基础。

使用呼吸机患者的心理评估及护理对策

为了评价不同文化程度、年龄和病种的患者,在使用呼吸机时的心理状态,从而采取相应的护理对策,作者采用S-AI(State Anxiety Inventory)焦虑问卷,对35例呼吸机使用患者进行评分,将患者按年龄分为老年、中年和青年组;按文化程度分为初中以下、高中和大学学历组;按病种分为慢性阻塞性肺疾患(COPD)、心脏术后和外伤组,应用方差分析法进行统计处理.结果:大学学历组评分显著高于高中组、初中组(P<0.01);高中组高于初中组(P<0.%);老年组明显高于中、青年组(P<0.05),中、青年两组无显著差异(P>0.05)COPD和外伤组S-AI评分明显高于心脏术后组.结论:不同文化程度、年龄和病种的使用呼吸机患者,其心理状态不同.文化程度越高、年龄越大,S-AI评分越高,据此制定不同的护理对策.

EB病毒包膜糖蛋白gp85真核表达载体的构建

Epstein-Barr病毒（EBv）属疱疹病毒r亚科嗜淋巴细胞病毒属的DNA病毒。该病毒感染与我国南方的鼻咽癌关系密切，是重要的肿瘤相关病毒。EB病毒穿入B细胞需要3种糖蛋白复合物gp85-gp25-gp42的参与，穿入上皮细胞需要gP85-gp25复合物的参与，gps5缺陷的EB病毒不能穿入B淋巴细胞或粘附上皮细胞。gp85在病毒的吸附和穿入靶细胞中起重要作用。是抗EB病毒感染的重要靶抗原，因此克隆并表达EBV的膜蛋白抗原片段gp85。对研究EBV的某些生物学特性有着重大作用。本文把EBV膜糖蛋白抗原性较强的gp85膜外区的编码基因BXLFR，克隆至pPIC9K质粒。构建毕赤酵母表达系统的重组质粒。