术前红细胞分布宽度和血小板分布宽度在肾透明细胞癌诊疗中的价值

目的探讨术前红细胞分布宽度(RDW)和血小板分布宽度(PDW)对肾透明细胞癌(ccRCC)的诊疗价值。方法回顾性分析2018年1月至2020年1月在徐州医科大学附属医院行肾部分切除术或肾根治性切除术并经病理诊断为ccRCC的114例患者。对照组收集同期124例健康体检者,比较两组RDW和PDW之间的差异。利用ROC曲线确定ccRCC患者术前RDW和PDW的最佳截点,根据其最佳截点把ccRCC分为高RDW和低RDW组,或高PDW组和低PDW组,并分析ccRCC患者RDW、PDW与肿瘤病理分期、Fuhrman分级的关系。结果ccRCC组的RDW和PDW分别为12.9%(12.5%~13.3%)和13.0%(11.8%~14.5%),健康对照组RDW和PDW分别为12.5%(12.2%~12.9%)和11.3%(10.3%~12.3%),ccRCC组RDW和PDW均高于对照组(P<0.01);约登指数显示RDW最佳截点为12.55%,此时灵敏度和特异度分别为72.8%和53.2%;PDW的最佳截点为12.35%,此时灵敏度和特异度分别为64.9%和75.8%;在单独分析ccRCC组时,发现高RDW和PDW往往伴随着高病理分期和Fuhrman分级(P<0.05)。结论相比较于正常体检者,术前RDW和PDW在ccRCC患者中显著升高,对ccRCC诊断有重要参考价值,且这2项指标与病理T分期和Fuhrman分级密切相关。

后腹腔镜输尿管切开取石术治疗复杂性输尿管上段结石的临床价值

目的探讨后腹腔镜输尿管切开取石术(RLU)治疗复杂性输尿管上段结石的临床疗效及并发症,为患者的临床诊疗提供依据。方法回顾性分析2014年1月至2018年12月徐州医科大学附属医院收治的523例复杂性输尿管上段结石患者的临床资料,其中采用RLU治疗186例(RLU组),采用输尿管硬镜碎石术(URL)治疗158例(URL组),采用经皮肾镜取石术(PCNL)治疗179例(PCNL组)。比较3组患者手术时间、术后住院时间、结石清除率、复发率及术后总并发症发生率。结果3组患者手术时间及术后住院时间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。RLU组结石清除率高于URL组和PCNL组,差异有统计学意义(P<0.05);RLU组术后总并发症发生率低于URL组和PCNL组,差异有统计学意义(P<0.05);但URL组和PCNL组结石清除率及术后总并发症发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。3组患者结石复发率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论RLU具有结石清除率高、并发症少等优点,可安全处理合并尿路感染的结石,是治疗复杂性输尿管上段结石的理想术式。

腹腔镜下膀胱根治性切除联合原位U形与W形回肠新膀胱术治疗膀胱癌的临床疗效比较

目的比较腹腔镜下膀胱根治性切除联合原位U形与W形回肠新膀胱术治疗膀胱癌的临床疗效。方法回顾性分析行腹腔镜下膀胱根治性切除联合原位回肠新膀胱术的68例患者的临床资料,根据回肠新膀胱的构建方式将其分为2组,U组28例患者构建U形新膀胱,W组40例患者构建W形新膀胱。比较2组患者围术期相关指标、术后随访情况及术后并发症情况。结果U组患者手术时间及术后排气时间短于W组(P<0.05);2组患者术中出血量及术后住院时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。U组患者新膀胱容量小于W组(P<0.05);2组患者最大尿流率及残余尿量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。2组患者夜间尿控满意率均低于日间尿控满意率(P<0.05)。2组患者术后并发症总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);U组患者术后尿失禁发生率高于W组(P<0.05),其余术后并发症发生率2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论与U形膀胱相比,W形膀胱具有更大的膀胱容量和更低的尿失禁发生率,但W形膀胱手术时间及术后排气时间较长,患者术后胃肠道功能恢复较慢。

荷载核基质结合区结合蛋白1短发卡RNA的溶瘤腺病毒联合多西他赛对激素敏感前列腺癌LNcap细胞的影响

目的观察荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-SATB1)联合多西他赛(DTX)在体外对激素敏感前列腺癌LNcap细胞的影响,并探讨作用机制。方法将LNcap细胞(购自上海中国科学院细胞库)分为5组进行干预,分别为磷酸盐缓冲液组(PBS)、多西他赛化疗药物组(DTX为2μg/L)、病毒对照组[ZD55-EGFP为10感染复数(MOI)]、病毒治疗组(ZD55-SATB1为10 MOI)、病毒联合化疗药物组(ZD55-SATB1+DTX为5 MOI+1μg/L)。Transwell检测细胞迁移和侵袭能力变化;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;蛋白质印迹法(Western blot)检测SATB1、腺病毒早期区1A基因(E1A)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8与bcl-2的表达。采用t检验。结果Transwell迁移结果显示,ZD55-SATB1联合DTX组干预LNcap细胞24 h后的细胞穿膜数为(28.20±3.19)个,与ZD55-SATB1组[(39.60±4.98)个](t=4.309,P<0.01)、ZD55-EGFP组[(52.60±6.02)个](t=8.001,P<0.01)、DTX组[(65.50±5.12)个](t=13.710,P<0.01)、PBS组为(106.60±5.18)个(t=28.820,P<0.01)比较,病毒与化疗药物治疗组穿膜细胞数显著降低,细胞迁移能力显著降低,差异有统计学意义;Transwell侵袭实验结果:联合组穿透Matrigel胶进入小室下层的细胞数为(23.60±3.58)个,与ZD55-SATB1组[(32.40±5.08)个](t=3.088,P<0.05)、ZD55-EGFP组[(39.60±2.70)个](t=7.610,P<0.01)、DTX组[(44.60±4.62)个](t=7.815,P<0.01)、PBS组为(98.20±4.32)个(t=28.820,P<0.01)比较,细胞侵袭能力明显降低,差异有统计学意义。TUNEL结果显示,各治疗组细胞凋亡率均高于PBS对照组[(5.92±0.90)%],但联合组[(34.48±4.25)%]与ZD55-SATB1组[(28.12±2.50)%](t=2.582,P<0.05)、ZD55-EGFP组[(23.30±3.03)%](t=4.752,P<0.01)、DTX组[(22.35±2.44)%](t=4.956,P<0.01)比较,细胞凋亡更加明显,差异有统计学意义。Western blot结果显示,联合组内SATB1蛋白表达下调,E-cadherin表达上调,Vimentin和MMP-2表达下调,Caspase-8和Caspase-3表达上调,bcl-2表达下调更为显著。E1A基因在联合组内正常表达,说明联合使用DTX不影响腺病毒复制增殖。结论ZD55-SATB1联合DTX在体外可以有效抑制LNcap细胞的迁移和侵袭能力,并诱导肿瘤细胞凋亡,效果优于单独使用ZD55-SATB1或DTX,其机制可能是通过上调E-cadherin同时下调Vimentin和MMP-2的表达抑制迁移侵袭能力,抑制了上皮-间充质转化(EMT)进程,并通过上调Caspase-8和Caspase-3,下调bcl-2诱导肿瘤凋亡。

微小RNA-200a在前列腺癌组织的表达及临床意义

目的探讨微小RNA(miRNA,miR)-200a在前列腺癌组织中的表达及与临床参数的相关性,并在体内研究miR-200a对裸鼠移植瘤生长的影响及机制。方法应用荧光原位杂交(FISH)技术检测2018年1月至2019年8月在徐州医科大学附属医院接受手术切除的54例经病理证实的前列腺癌的组织标本及前列腺增生组织标本中miR-200a的表达,并分析与病理分级、Gleason评分、前列腺特异抗原(PSA)水平、年龄之间的相关性;建立小鼠皮下移植瘤模型(购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司),分3组:转染miR-200a高表达质粒的DU145细胞组、转染表达miR-200a+特异性核基质结合区结合蛋白1(SATB1)的DU145细胞质粒组、未转染的DU145细胞组,取0.2 ml细胞悬液接种于小鼠右后臀部皮下,每隔5 d测量皮下移植瘤体积,绘制裸鼠移植瘤生长曲线,采用χ^2检验及t检验,分析3组移植瘤体积的统计学差异;免疫组织化学和蛋白质印迹法(Western blot)法检测移植瘤SATB1的表达变化。多样本间比较采用单因素方差分析,组间比较采用t检验。结果miR-200a在前列腺癌组织中的阳性率为27.8%(15/54),在前列腺增生组织中的阳性率为90.0%(9/10),差异有统计学意义(χ^2=11.409,P<0.05),且前列腺癌组织中miR-200a表达强度与前列腺癌的病理分级和临床分期及转移呈负相关,接种细胞后,对照组的移植瘤的SATB1的表达量高于miR-200a高表达组,转染miR-200a高表达质粒组的移植瘤最终体积为(615.39±31.05)mm^3,而未转染的DU145细胞组瘤体体积为(1489.09±192.54)mm^3,差异有统计学意义(t=7.759,P<0.05),说明在体内实验裸鼠皮下成瘤中miR-200a能够显著抑制前列腺癌裸鼠移植瘤的生长,且免疫组织化学实验结果提示miR-200a高表达组和miR-200a+SATB1共表达组的SATB1表达较未转染组低,表明miR-200a可以抑制SATB1蛋白表达,亦表明SATB1是miR-200a的靶基因。结论miR-200a在前列腺癌组织中呈低表达,与前列腺癌的临床进展及转移相关,且miR-200a能够下调SATB1的表达,抑制肿瘤生长。

溶瘤腺病毒荷载核基质结合区结合蛋白1短发卡RNA联合多西他赛治疗前列腺癌LNcap细胞移植瘤

目的观察荷载核基质结合区结合蛋白1(SATB1)短发卡RNA(shRNA)溶瘤腺病毒联合多西他赛(DTX)对激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞株裸鼠移植瘤的治疗作用。方法构建裸鼠前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤模型(裸鼠购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司),随机分成4组:空白对照组(PBS组)、化疗组(DTX组,20 mg/kg)、病毒治疗组(ZD55-SATB1组,1×108 pfu)、病毒联合化疗组(ZD55-SATB1+DTX组,5×107 pfu+10 mg/kg)。绘制肿瘤时间-体积生长曲线。苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞的生长。免疫组织化学检测肿瘤组织中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-8、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)和CD31蛋白的表达。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤组织细胞凋亡。采用方差分析(One way-ANOVA),组间比较采用t检验。结果成功构建裸鼠LNCaP细胞移植瘤模型。病毒联合化疗组、病毒治疗组、化疗组和空白对照组移植瘤终体积分别为(616.23±101.56)、(938.59±102.98) mm3(t=3.860,P<0.05)、(1 206.92±202.17) mm3(t=4.522,P<0.05)和(2 254.05±188.99) mm3(t=13.220,P<0.01),差异均有统计学意义。HE染色结果显示,病毒联合化疗组、病毒治疗组和化疗组的肿瘤组织中均可见较多的死细胞,细胞裂解成碎片,细胞核固缩碎裂,其正常的组织结构消失,但联合组的肿瘤细胞坏死更明显。免疫组织化学法结果显示化疗组、病毒治疗组、病毒联合化疗组内Caspase-8、Caspase-3、bcl-2和CD31的相对蛋白表达量分别为2.11±0.41、1.67±0.21、0.65±0.06、0.78±0.05(t=4.136、10.930、5.523、8.162,P<0.05);2.39±0.33、2.61±0.51、0.56±0.06、0.68±0.04(t=5.594、4.119、3.242、6.010,P<0.05);3.42±0.37、3.61±0.23、0.44±0.02、0.50±0.04,联合组与单用药物或病毒组比较,Caspase-8、Caspase-3蛋白表达量增多,bcl-2蛋白表达量降低,差异有统计学意义。联合组移植瘤组织中CD31蛋白的表达量与单用药物或病毒组比较显著降低,说明联合组能有效促进促凋亡蛋白的表达,降低抑凋亡蛋白的表达,且在一定程度上抑制肿瘤组织血管的生成。TUNEL结果显示:化疗组、病毒治疗组、病毒联合化疗组的肿瘤组织切片荧光下均可见较多红色信号,提示细胞凋亡,各组凋亡率分别为(26.17±2.97)%(t=9.557,P<0.01)、(35.68±3.46)%(t=3.931,P<0.05)、(44.07±1.30)%,联合组内凋亡细胞更为明显,差异有统计学意义。结论溶瘤腺病毒和多西他赛均可抑制前列腺癌LNCaP细胞皮下移植瘤的生长,且联合效果优于单一用药,其可能的机制包括抑制肿瘤细胞生长、诱导凋亡、抑制血管生成。

条件增殖病毒ZD55-IL-24联合放疗对激素依赖性前列腺癌移植瘤的治疗作用

目的观察荷载白细胞介素-24(IL-24)基因的条件增殖溶瘤腺病毒(ZD55-IL-24)联合放疗对激素依赖性前列腺癌LNcap细胞(购自上海科学院细胞库)裸鼠移植瘤的治疗作用,并探讨其机制。方法建立LNcap细胞裸鼠异种移植瘤模型(裸鼠购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司)。实验分为4组,分别为ZD55-IL-24+放疗联合治疗组[转染复数(MOI)=5+5 Gy]、ZD55-IL-24病毒治疗组(10 MOI)、放疗组(10 Gy)、磷酸盐缓冲液(PBS)对照组,监测并绘制各组肿瘤生长曲线。苏木精-伊红(HE)染色检测肿瘤组织内细胞形态;免疫组织化学和蛋白质印迹法(Western blot)检测凋亡相关半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-8、Caspase-3和B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达;原位缺口末端标记法(TUNEL)实验检测肿瘤组织内细胞凋亡。多组之间采用方差分析(One-Way ANOVA),进一步组间比较采用SNK法。多组之间采用方差分析(One-Way ANOVA),进一步组间比较采用SNK法。结果成功构建裸鼠移植瘤模型且全部裸鼠成功荷瘤,检测肿瘤体积增长曲线显示,ZD55-IL-24+放疗联合治疗组干预肿瘤生长速度28 d后肿瘤体积[(594.34±194.26)mm3],与PBS组[(2358.32±288.63)mm3,t=18.460,P<0.01]、放疗组[(1024.98±196.84)mm3,t=6.024,P<0.01]、ZD55-IL-24组[(897.66±205.39)mm3,t=6.176,P<0.01]比较,差异有统计学意义。HE染色显示各治疗组内均存在细胞坏死,且面积明显高于PBS组,联合组较单一治疗组更为明显。免疫组织化学和Western blot结果显示,各治疗组Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达上调,bcl-2蛋白表达下调,且联合组内Caspase-3、Caspase-8和bcl-2的表达变化较单一治疗组更为明显,差异有统计学意义。TUNEL结果显示:ZD55-IL-24+放疗联合治疗组内细胞凋亡率为(34.16±3.12)%,与PBS组[(7.65±0.90)%](t=14.160,P<0.01)、放疗组[(23.90±2.58)%](t=4.396,P<0.05)、ZD55-IL-24组[(26.43±2.43)%](t=3.391,P<0.05)比较,差异有统计学意义。结论条件增殖病毒ZD55-IL-24联合化疗可以有效抑制激素依赖性前列腺癌LNcap细胞裸鼠移植瘤的生长,诱导肿瘤细胞凋亡,其机制可能为通过促进Caspase-8和Caspase-3的表达促进细胞内源性凋亡,抑制bcl-2的蛋白表达抑制肿瘤细胞的抗凋亡能力。

精子相关抗原9基因沉默对肾癌细胞生物学功能的影响

目的观察小干扰RNA(siRNA)沉默精子相关抗原9(SPAG9)基因对肾癌细胞生物学功能的影响。方法体外培养人肾癌细胞786-O和OS-RC-2(购自中国科学院上海细胞库);应用siRNA转染下调SPAG9在786-O和OS-RC-2的表达;分组采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)分析转染后SPAG9在786-O和OS-RC-2中mRNA及蛋白的表达水平;细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染24、48、72、96 h后786-O及OS-RC-2的增殖活性;Transwell法检测转染后786-O、OS-RC-2的迁移与侵袭能力;Western blot分析转染后786-O、OS-RC-2中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶抑制剂-2(TIMP-2)的蛋白表达量;利用小管形成实验观察SPAG9基因沉默后,786-O血管形成能力的变化。采用t检验。结果(1)RT-PCR及Western蛋白印迹结果提示siRNA能够有效沉默786-O及OS-RC-2中SPAG9 mRNA和蛋白的表达。si-Ctrl组表达量为参照和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组mRNA及蛋白的表达量为(0.41±0.02、0.12±0.03,t=14.420,P<0.01)、(0.64±0.02、0.13±0.01,t=36.690,P<0.01);(1.36±0.13、0.83±0.04,t=6.816,P<0.05)、(0.93±0.01、0.63±0.04,t=12.410,P<0.05)。(2)SPAG9基因沉默后对786-O以及OS-RC-2增殖能力无明显影响,差异无统计学意义(t=3.182、6.674,P>0.05)。(3)SPAG9敲低后的786-O以及OS-RC-2迁移、侵袭能力显著降低,si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组迁移细胞数目为(105.32±10.13)、(53.34±5.17)个(t=9.232,P<0.05)、(132.00±11.23)、(65.45±7.23)个(t=11.161,P<0.05);侵袭细胞数目为(88.33±16.56)、(32.08±6.79)个(t=6.093,P<0.05)、(90.67±13.01)、(28.67±4.02)个(t=5.924,P<0.05)。(4)SPAG9基因沉默后,786-O血管形成能力明显降低。si-Ctrl组、786-Osi-SPAG9组中平均管样结构数为12.56±2.40、3.05±0.86(t=2.254,P<0.05)。(5)Western blot显示转染后的786-O和OS-RC-2细胞中,MMP-2的蛋白表达量显著降低。si-Ctrl组和786-Osi-SPAG9组、OS-RC-2si-SPAG9组中MMP-2的相对表达量为0.37±0.02、0.24±0.01(t=8.712,P<0.001)、0.26±0.01、0.21±0.02(t=4.558,P<0.05);而TIMP-2的表达量显著升高,其相对表达量为0.52±0.03、0.59±0.03(t=2.720,P>0.05)、0.52±0.01、0.54±0.01(t=2.102,P>0.05)。结论SPAG9基因具有促进肾癌细胞迁移、侵袭及血管形成的能力,其机制可能与MMP-2的激活有关。