日本血吸虫多价DNA疫苗pBK-Sj26 (Sj32)-Sj23免疫效果的观察

为了观察血吸虫病多价 DNA疫苗的保护力 ,将小鼠分成 5组 :空白对照组、空质粒对照组、单价抗原 DNA疫苗 p BK- CMV- Sj2 3组、多价抗原 DNA疫苗 p BK- CMV- Sj2 6- Sj2 3和 p BK- CMV- Sj3 2 - Sj2 3组。大量提取各组质粒 DNA后 ,各组于 0、 3、 5周在 BAL B/c小鼠股四头肌注射相应质粒 DNA,9周用血吸虫尾蚴攻击感染 ,15周剖杀小鼠计算减虫率及减卵率。结果显示 :与对照组比较 ,实验组小鼠减虫率及减卵率有极显著性差异 ( P<0 .0 1) ;与单价 p BK- CMV-Sj2 3组比较 ,多价 DNA疫苗组的减虫率及减卵率有显著性差异。提示血吸虫多价 DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单价 DNA疫苗。

日本血吸虫混合DNA疫苗免疫效果观察

目的 为提高日本血吸虫 DNA疫苗免疫效力 ,观察日本血吸虫抗原分子的混合 DNA疫苗诱导小鼠的抗攻击感染的保护性免疫。方法 大量制备真核质粒 p BK- CMV- Sj2 6和 p BK- CMV-Sj2 3,然后将单价 DNA疫苗 p BK- CMV- Sj2 6和 p BK- CMV- Sj2 3混合后免疫小鼠。实验分为 4组 :混合疫苗组、单价疫苗 p BK- CMV- Sj2 3组、空质粒对照组及生理盐水对照组。各组于 0周、3周、5周在小鼠股四头肌注射相应质粒 DNA或生理盐水 ,第 9周小鼠用血吸虫尾蚴攻击感染 ,第 15周剖杀小鼠计算减虫率及减卵率。结果 与对照组比较 ,实验组小鼠减虫率及减卵率有极显著性意义 (P<0 .0 1) ;与单价 p BK- CMV- Sj2 3组比较 ,混合 DNA疫苗组的减虫率及减卵率有显著性意义 (P<0 .0 5 )。结论 血吸虫混合 DNA疫苗诱导小鼠对血吸虫的保护力优于单价

日本血吸虫多价DNA疫苗的构建

目的 构建日本血吸虫多价 DNA疫苗。 方法 在本室已构建的克隆载体 p Bluescript- Sj2 6、p Bluescript- Sj32及 p Bluescript- Sj2 3的基础上 ,根据 Sj2 6 k Da、Sj32 k Da和 Sj2 3k Da基因序列分别设计一对引物 ,且在引物中引入 1个含多肽接头甘氨酸 -甘氨酸 -丝氨酸 (G- G- S)的碱基序列。首先将 Sj2 3基因连接入载体 p BK中 ,构建重组质粒 p BK - Sj2 3,然后将 Sj2 6 k Da或 32 k Da基因分别连接入载体 p BK- Sj2 3中 ,构建成多价 DNA疫苗p BK- Sj2 6 - Sj2 3和 p BK- Sj32 - Sj2 3。对重组基因鉴定后 ,检测了质粒在小鼠肌肉中的表达情况。 结果 多价 DNA疫苗 p BK- Sj2 6 - Sj2 3和 p BK- Sj32 - Sj2 3转入了完整的 Sj2 6、Sj2 3和 Sj32基因。多价基因质粒能在小鼠肌肉组织中表达。结论 构建了日本血吸虫多价 DNA疫苗。

不同载体的日本血吸虫DNA疫苗诱导小鼠免疫效果的观察

目的 观察不同真核表达载体的日本血吸虫 DNA疫苗的免疫效果 ,筛选合适的血吸虫 DNA疫苗。方法 将小鼠分成 5组 ,于第 0、 3、 5周将日本血吸虫真核表达载体 p BK- Sj2 3 ,p BK- Sj2 6以及 p CD- Sj2 3 ,p CD- Sj2 6,分别接种小鼠股四头肌 ,第 9周每组小鼠以 40± 2条血吸虫尾蚴攻击感染 ,攻击感染 6周后 ,剖杀小鼠 ,计算减虫率和减卵率 ,比较含血吸虫同一抗原分子的不同载体诱导小鼠的抗攻击感染能力。结果 发现疫苗 p CD- Sj2 3和 p CD- Sj2 6诱导小鼠的减虫率和减卵率分别为 3 0 .5 0 %和 3 3 .0 2 % ;疫苗 p BK- Sj2 3和 p BK- Sj2 6诱导小鼠的减虫率和减卵率分别为 18.2 4%和 2 1.70 % ,含血吸虫同一抗原分子的不同载体诱导小鼠的抗攻击感染能力具有显著性差异。结论 由真核表达载体p CD构建的血吸虫 DNA疫苗比由真核表达载体 p BK构建的血吸虫

日本血吸虫表膜蛋白23kDa的DNA疫苗的研制及其诱导小鼠的保护性免疫

目的研究日本血吸虫表膜蛋白23kDa的DNA疫苗及其诱导小鼠的保护性免疫作用。方法以已克隆的质粒pBluescript－Sj23为模板，设计2条引物，经PCR扩增的Sj23基因克隆于真核表达载体pCD中，重组质粒定位注入小鼠骨骼肌，共注射2次，间隔时间9d，第14d处死小鼠，取定位处肌组织，荧光标记检测抗体，证实肌细胞可表达抗原Sj23。大量提取亚克隆后的质粒pCD－Sj23。把雄性BALB／C小鼠分2组，实验组用剂量为100μg／只的质粒DNA（pCD－Sj23）于第1、4、6周免疫接种，第8周2组均以正常尾锄40±2条／只攻击感染，第14周剖杀小鼠。结果与对照组比较，实验组成虫减虫率、减卵率、每条雌虫减卵率分别为33．01％，49．59％，15．70％。结论Sj23有可能成为有价值的候选疫苗，DNA疫苗可作为一种免疫新途径加以研究。

日本血吸虫混合DNA疫苗的构建

构建日本血吸虫混合 DNA疫苗 ,为今后多抗原特异性 DNA疫苗的研究打下基础。在克隆 p Bluescript- Sj2 3、p Bluescript- Sj2 6、 p Bluescript- 32的基础上 ,亚克隆构建了真核表达载体 p BK- Sj2 3、 p BK- Sj2 6、 p BK- Sj32。经过酶切鉴定 ,PCR扩增鉴定及测序后 ,将此三种不同抗原质粒经不同组合后经肌肉注射免疫小鼠 ,3周后提取小鼠股四头肌DNA,特异性引物扩增获得目的基因。证实重组质粒转入了完整的日本血吸虫抗原 2 3、 2 6、 32 kd基因。且混合质粒能在肌肉组织中稳定存在。建立了日本血吸虫混合抗原 DNA疫苗 ,为以后的多特异性

日本血吸虫混合DNA疫苗pBK-CMV-Sj26/Sj32诱导小鼠的免疫应答

目的 观察含日本血吸虫候选疫苗分子谷胱甘肽S -转移酶 (Sj2 6 )和天冬酰胺肽链酶 (Sj32 )的真核载体 pBK-CMV -Sj2 6 /Sj32诱导小鼠的免疫应答情况。 方法 将质粒按 5 0 μg/只在 0w ,3w ,5w免疫小鼠股四头肌 ,第一次免疫后取小鼠脾细胞作T淋巴细胞转化实验 ;在 0w、3w和 6w经小鼠尾静脉取血 ,ELISA检测血清中抗体效价及阳性反应率。结果 淋巴细胞转化实验示血吸虫成虫抗原能特异性刺激免疫鼠脾细胞 ;第一次免疫后特异性抗体效价开始升高。抗体最高效价为 1∶2 0 ,3次免疫后有 91.7%小鼠血清呈阳性反应。结论 真核载体 pBK -CMV -Sj2 6

日本血吸虫表面膜抗原23kDa的亚克隆鉴定及表达

在已克隆的质粒pBluescript-Sj23基础上，设计二条引物。小量提取质粒pBluescript－Sj23进行PCR扩增，经扩增的Sj23亚克隆于真核表达载体pCD中，重组质粒转化E．coliTG1。大量提取质粒pCD－Sj23，以剂量100μg／只给昆明小白鼠定位肌肉注射质粒pCD-Sj23，共注射2次，间隔时间为9天，每次注射前一天用0．5％盐酸布比卡因50μl／只预处理，第14天拉颈处死小鼠，定位处肌肉作冰冻切片，荧光标记抗体检测pCD-Sj23，见肌细胞胞浆及胞膜上有其抗原表达。

降低血吸虫病传播的钉螺控制策略

软体动物作为寄生虫大量增殖的场所,在血吸虫病传播中起着重要的作用。因此,应优先考虑钉螺控制策略来减少血吸虫病的传播。本文综述了通过环境治理、应用杀螺剂及生物因素来控制钉螺的研究现状;介绍了在早期感染钉螺中检测寄生虫抗原和特异性寄生虫DNA序列的方法并概述了有关钉螺易感性及抗性表型分子基础的进展和可能进行的遗传控制。

寄生虫病疫苗效价的提高及发展方向

寄生虫在人体内诱导的免传播效应机制非常复杂。迄今,还没有一种理想而有效的疫苗可用于免疫预防以阻断寄生虫病的传播。本文基于各国学者近年来在寄生虫病疫苗研制工作中的成绩及今后疫苗的发展方向,在免疫环境、多基因疫苗、佐剂选用以及DNA疫苗等方面,就如何提高疫苗效价作一综述。

日本血吸虫表面膜抗原23KDa的克隆及其鉴定

根据已报道的２３ＫＤａ基因序列，设计了２个寡核苷酸引物，应用聚合酶链反应技术，将提取的日本血吸虫成虫的总ＲＮＡ逆转录成ｃＤＮＡ进行扩增（ＲＴ－ＰＣＲ）。扩增的基因克隆到质粒ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ中，重组质粒转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，在ＬＢ（Ａｍｐ＋）平板上挑阳性克隆经酶切分析。

血吸虫23kDa膜内在蛋白的研究现状

血吸虫的23kDa抗原是一种膜内在蛋白。宿主针对此抗原能产生可识别的特异性抗体;23kDa抗原可诱导宿主保护性免疫的产生,为有价值的诊断抗原及候选疫苗。本文对23kDa蛋白的合成情况、表达阶段、结构特点、免疫学及分子生物学特征等方面作一概述。

日本血吸虫Sj23DNA疫苗的增效研究

目的探讨缺失肿瘤转移有关基因ME491同源序列的日本血吸虫Mr23000膜蛋白基因(Sj23DNA)突变体疫苗的免疫效果。方法将Sj23DNA中与人黑素瘤细胞膜上的ME491同源序列进行基因缺失突变,再将突变基因转染真核细胞人胚肾HEK293细胞,通过间接荧光抗体试验(IFAT)检测其表达情况。将pcDNA3-Sj23突变体经股四头肌注射免疫小鼠(100μg/只),免疫后4周取注射部位肌肉作冰冻切片,IFAT检测目的基因的表达。40只BALB/c小鼠随机分成4组(每组10只),分别经股四头肌注射pcDNA3-Sj23突变体、pcDNA3-Sj23、空白质粒pcDNA3(均100μg/只)和生理盐水(30μl/只)免疫1次。免疫后4周用尾蚴攻击感染(40±2条/只)。第42天剖杀,肠系膜静脉灌注法及挤压法计数成虫,取肝脏计算每克肝组织虫卵数(EPG)。以减虫率和减卵率评价其免疫保护力。结果pcDNA3-Sj23突变体疫苗可在真核细胞HEK293中瞬时表达。pcDNA3-Sj23突变体在小鼠注射部位骨骼肌细胞上出现较强荧光,空白对照组未见特异性荧光。pcDNA3-Sj23突变体获得40.3%减虫率和42.8%减卵率,pcDNA3-Sj23获得33.1%减虫率和28.9%减卵率。两组差异均有统计学意义(P值均<0.05)。结论与pcDNA3-Sj23相比,缺失ME491同源序列的pcDNA3-Sj23突变体疫苗能诱导BALB/c小鼠产生更好的免疫保护效果。

牛磺酸对高葡萄糖损伤血管内皮细胞的保护作用

目的探讨牛磺酸对高浓度葡萄糖（ＨＧ）损伤血管内皮细胞（ＥＣ）是否有保护作用及可能机制。方法以体外培养的人脐静脉内皮细胞为对象，研究了ＨＧ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）对ＥＣ产生的前列环素（ＰＧＩ２）、一氧化氮（ＮＯ）和丙二醛（ＭＤＡ）的影响及牛磺酸的干预作用。ＰＧＩ２测定采用放射免疫法，而ＮＯ及ＭＤＡ的测定则分别应用Ｇｒｉｅｓｓ法与Ｓｃｈｕｈ法。结果ＨＧ明显降低ＥＣ的ＮＯ与ＰＧＩ２生成，同时增加ＭＤＡ的含量。而牛磺酸则能拮抗ＨＧ所致ＥＣ的ＮＯ与ＰＧＩ２生成的减少，并能降低ＭＤＡ。结论 牛磺酸对ＨＧ损伤的内皮细胞有一定保护作用，其可能机制与牛磺酸能增加ＥＣ的ＮＯ与ＰＧＩ２合成、降低ＭＤＡ的产生有关。

衡阳市孕妇弓形虫感染血清学（IHA）调查

衡阳市孕妇弓形虫感染血清学（ＩＨＡ）调查李柳哲，高隆声，廖力，张愉快，莫崇顺，唐雪英（寄生虫教研室）弓形虫病是弓形虫所致人兽共患病，人群感染相当普遍。它可通过孕妇的胎盘侵袭胎儿造成畸形、早产、流产及死胎，对优生优育危害性极大①②，故防治弓形虫病的重点...

日本血吸虫Sj23DNA突变体疫苗的构建与鉴定

目的对日本血吸虫Sj23DNA进行缺失突变,构建Sj23DNA突变体疫苗,为寻求更佳免疫效果的疫苗奠定基础。方法利用重叠PCR技术将Sj23DNA上与ME491同源的部分碱基缺失,获得Sj23DNA的突变体,将其克隆入真核表达载体pcDNA3的多克隆位点上,构建重组质粒pcD-NA3-Sj23突变体,进行酶切和测序鉴定,并用CLUSTALX和primerpremier软件将测序的结果与Sj23DNA序列进行分析。结果序列分析显示pcDNA3-Sj23突变体缺失序列与原设计一致,双酶切pcDNA3-Sj23突变体获得预期大小的DNA片段。结论成功构建了缺失与ME491同源部分碱基的质粒pcDNA3-Sj23突变体。

以黄芪桂枝五物汤为主治疗糖尿病周围神经病变的临床研究

将４２例ＮＩＤＤＭ并发周围神经病变患者随机分为观察组、对照组。观察组３０例服黄芪桂枝五物汤，对照组１２例服用ＶｉｔＢ１、Ｂ６，总疗程２个月。结果显示观察组神经传导速度明显改善（Ｐ＜０．０５），红细胞山梨醇含量降低（Ｐ＜０．０１），对照组则无明显变化。提示中药黄芪桂枝五物汤治疗ＮＩＤＤＭ周围神经病变，与其能降低神经组织山梨醇水平有关。