组织学与胚胎学学科免疫系统创新性实验课的教学效果与体会

2012年教育部提出国家级创新创业训练计划,2018年国务院发布推动大学生创新创业高质量发展意见,2020年又再次发布加强加快医学教育创新发展的指导意见,足以说明医学教育迫切需要注重创新、推动创新,同时将创新教育和创新实验课程纳入高校必修课体系,从而全面提高医学生人才培养质量^([1])。

中药石菖蒲及其主要成分α-细辛醚对癫痫幼鼠惊厥行为及脑电图的影响

目的:观察中药石菖蒲及其主要成分α-细辛醚对戊四氮(PTZ)诱发的实验性癫痫幼鼠惊厥行为和额叶皮层放电的影响。方法:Wistar幼鼠随机分为正常对照组(N组)、致痫对照组(A组)、苯巴比妥钠组 (B组)、石菖蒲组(C组)和α-细辛醚组(D组)。除正常对照组外,各组幼鼠腹腔注射PTZ 60 mg·kg-1建立癫痫动物模型。正常对照组和致痫对照组均给予生理盐水0．5 mL灌胃,其余各组分别给予苯巴比妥钠 18 mg·kg-1、石菖蒲2．35 g·kg-1、α-细辛醚29 mg·kg-1灌胃。给药7 d后,除正常对照组外,各组幼鼠再次腹腔注射PTZ 60 mg·kg-1,观察动物行为的改变,同时利用脑立体定位仪记录各组癫痫幼鼠脑部单侧额叶皮质的脑电变化。结果:①动物行为学观察显示,与致痫对照组比较,药物治疗组幼鼠癫痫发作的潜伏期延长 (P<0．05),2 h强直-阵挛发作的次数减少(P<0．05),发作持续时间缩短(P<0．05)。α-细辛醚、石菖蒲的上述作用较苯巴比妥钠弱(P<0．05)。②脑电图结果显示,与致痫对照组比较,药物治疗组幼鼠额叶皮质痫性波发生潜伏期延长(P<0．05),2 h内异常放电频率下降,脑电波波幅下降(P(0．05)。α-细辛醚与石菖蒲对动物脑电的影响较苯巴比妥钠显著(P<0．05)。结论:石菖蒲及α-细辛醚均能有效抑制戊四氮诱发的幼鼠癫痫发作和额叶皮层的异常放电。

长期口服硝酸稀土对大鼠腺垂体生长激素细胞的影响

为查明La(NO3)3和农用混合稀土"常乐"长期服用后对大鼠腺垂体中生长激素细胞功能和结构的影响,Wistar大鼠口服不同剂量La(NO3)3和"常乐"后,检测血清中生长激素水平的变化,观察腺垂体中生长激素细胞的超微结构。发现口服6个月后,20mg·kg-1组生长激素水平明显低于对照组,0.2及0.1mg·kg-1组则明显增高;停服1个月后,0.2,0.1mg·kg-1组血清中生长激素水平显著高于对照组。口服6个月后,20mg·kg-1组生长激素细胞内分泌颗粒明显减少,线粒体肿胀,粗面内质网腔明显扩张,细胞核变形;停服1个月后,20mg·kg-1组各种改变有所恢复,0.1mg·kg-1组生长激素细胞分泌颗粒较密集。

基因佐剂结核杆菌HSP70增强HCA661基因疫苗免疫应答

目的:评价结核分枝杆菌HSP70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,mtHSP70)羧基端作为基因佐剂对HCA661(Hepatocellular carcinoma associated antigens 661)基因疫苗免疫效果的影响。方法:将HCA661及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo中构建基因疫苗;将eGFP及与mtHSP70羧基端的串联体分别克隆到pCI-neo,体外转染φA细胞,根据eGFP的表达评价重组质粒中靶基因的转录表达效率。基因疫苗免疫BALB/c小鼠,SABC、Western blot检测免疫血清中特异性HCA661抗体;流式细胞术、ELISA法检测免疫血清中特异性HCA661抗体水平。结果:重组质粒构建成功;80%φA细胞转染eGFP后呈现绿色荧光;单基因和融合基因疫苗组动物均产生了针对HCA661的特异性抗体,融合疫苗组诱导的抗体水平较单基因疫苗组显著增高,融合基因疫苗组未产生针对mtHSP70的抗体。结论:mtHSP70羧基端作为基因佐剂增强机体对HCA661融合基因疫苗的特异性免疫应答。

单细胞凝胶电泳技术在胚胎毒性实验中的应用

目的 :探讨和分析单细胞凝胶电泳技术 ( SCGE)的影响因素和实验中应该注意的环节。方法 :通过对实验方法和操作技术的总结 ,对 Singh提出的碱性 SCGE进行适当的补充。结果 :完善了 SCGE的操作 ,获得了典型的彗星图像。结论 :在实验中避免非特异性因素的影响 ,注意实验操作细节 ,能够增加

硝酸镧对大鼠胃粘膜长期作用的实验研究

目的 :探讨硝酸镧〔L a( NO3) 3〕长期口服对大鼠胃粘膜的影响。方法 :应用常规组织学和形态计量学方法研究长期经口给予 Wistar大鼠不同剂量的硝酸镧后胃粘膜的变化。结果 :给予硝酸镧 6个月后 ,2 0和 10 mg·kg-1组大鼠胃底腺上有较多胞质疏松的壁细胞 ;胃底腺壁细胞、主细胞、颈粘液细胞比值的变化与剂量呈一定相关性 ;2 0和 10 mg· kg-1组雄性大鼠胃底腺颈粘液细胞内酸性粘液物质的含量减少 ,2、0 .2和 0 .1mg· kg-1组雄性和雌性大鼠胃底腺颈粘液细胞内酸性粘液物质的含量增加。结论 :较高剂量 ( 2 0和 10 mg· kg-1)的硝酸镧长期口服引起胃粘膜的损伤 ;较低剂量 ( 2、0 .2和0 .1mg· kg-1)的硝酸镧对胃粘膜有一定的保护作用。

人肝细胞癌相关抗原661基因在大肠杆菌中的克隆、表达及产物纯化

目的:构建人肝细胞癌相关抗原661(Hepatocellular carcinoma-associated antigens661,HCA661)原核表达载体并诱导其表达,纯化及鉴定目的蛋白。方法:人肝细胞癌SMMC7721细胞基因组DNA经PCR扩增HCA661基因,克隆到pGEM-Teasy中进行酶切、PCR和测序鉴定;构建重组质粒pQE-HCA661,并转化大肠杆菌M15[pREP4],经IPTG诱导表达目的蛋白;镍离子亲和层析柱(Ni2+-NTA)纯化靶蛋白后进行Western blot鉴定。结果:目的基因经酶切和PCR鉴定结果与预期相符,测序结果显示目的基因与GeneBank登录的序列完全一致;工程化大肠杆菌M15[pREP4]经IPTG诱导表达约39kD的目的蛋白。Western blot鉴定结果显示,纯化重组蛋白能够分别与抗His单克隆抗体和抗HCA661多克隆抗体特异性结合。结论:本实验成功地构建了重组原核表达质粒pQE-HCA661,工程菌表达的重组HCA661带有6×His标签,并具有免疫原性,可以用于制备单克隆抗体,或用于检测患者血清中肝细胞癌抗体以预测肿瘤恶性程度。

人肝细胞癌抗原HCA661 DNA疫苗的构建

目的:构建人肝细胞癌特异性抗原HCA661的DNA疫苗。方法:通过PCR从SMMC7721中获得编码肝细胞癌特异抗原HCA661的基因组DNA序列,插入pGEM-T easy载体后测序,并将目的基因定向亚克隆进入真核表达载体pCI-neo,以PCR和酶切方法鉴定构建的重组真核表达质粒pCI-neo-HCA661。结果:PCR产物为1 040 bp,测序结果与Gene Bank登记完全相同;PCR和酶切结果表明,构建的重组真核表达质粒中含有正确编码的目的基因片段。结论:成功地构建了含有HCA661基因的DNA疫苗。

基于信息技术和数字化教学平台的组织学与胚胎学实验课智慧云课堂

为了应对新冠疫情期间的教学需要,使线上教学能够达到与线下教学相似的质量和效果,我校2021级五年制本科生组织学与胚胎学实验课教学尝试“信息技术+数字化教学平台”的线上教学方式。该方式选用学习通、腾讯会议及腾讯QQ群3个网络平台以实现备课、授课和辅导3个教学过程;与此同时我们还引入易创公司“医学形态学数字化教学”系统,将丰富生动的数字切片融入教学各环节,从而打造出高质量的实验课智慧云课堂。课后教学反馈显示该教学模式得到大多数医学生的认可,能够提高学生的自主学习能力。

临床医学试验班组化与免疫组化的课程建设

为了更好地贯彻医学回归精英教育的理念,提高临床医学七年制(试验班)学生的科研素质和科研能力,针对临床七年制(试验班)开设了组织化学与免疫组织化学这门课程,准确定位课程建设的目标,并构建课程建设的基本思路。在数年的实践中,阶段性完成多层次的教材建设;结合学系的科研优势和实验技术的实用性,不断地合理优化教学内容;建立独具特色的实验设计及课堂讨论相结合的实验教学模式;确定公平合理的考核方式及成绩评定标准,逐步完善该课程体系建设。

组织学与胚胎学精品课程建设与改革初探

组织学与胚胎学是一门重要的医学基础主干课程。课程建设是评价教学质量的核心标志,是实现人才培养目标的基本保证。为做好组织学与胚胎学精品课程的建设工作,从教师队伍、教学内容、教学方法、教材、教学管理等五个方面进行了探讨和实践,取得了显著的成效。

稀土对大鼠胃粘膜抗氧化能力的影响

目的 探讨大鼠短期服用硝酸稀土对胃粘膜抗氧化能力的影响。方法 按分组给药 30d后检测胃粘膜超氧化物歧化酶 (SOD)和过氧化脂质 (LPO)含量。结果 硝酸稀土 2 .0mg/kg和混合稀土 0 .1mg/kg组SOD含量显著升高 ;硝酸稀土 2 0 .0mg/kg组LPO含量显著升高 ,混合稀土 2 .0mg/kg和 0 .1mg/kg组LPO显著降低。结论 短期口服 2 0 .0mg/kg硝酸稀土可促进胃粘膜内脂质过氧化过程 ,0 .1、2 .0mg/kg的硝酸稀土可增强胃粘膜抗氧化能力 。

组织学与胚胎学教学实践的体会

结合多年的教学工作实践,论述了针对低年级医学生的特点,如何做好组织学与胚胎学教学工作的经验体会.

石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠脑海马神经元凋亡的影响

目的探讨石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对戊四氮(PTZ)诱发的幼鼠癫痫发作所激发的海马区神经元凋亡的影响。方法利用光电镜技术观察癫痫幼鼠海马神经元的病理改变,TUNEL法检测凋亡细胞,免疫组织化学法检测Bax和Bcl-2的表达情况。结果致痫对照组癫痫幼鼠海马CA1和CA3区大量神经元凋亡;药物治疗后凋亡细胞数明显减少(P<0.01);PTZ致痫各组幼鼠海马CA1和CA3区Bcl-2和Bax阳性细胞数量较正常对照组均有明显增加(P<0.01)。其中,苯巴比妥钠组、石菖蒲组、α-细辛醚组Bcl-2阳性细胞数量增加较致痫对照组显著(P<0.01);Bax阳性细胞数量各致痫组之间无显著性差异。正常对照组Bcl-2/Bax的值约为6.0;致痫对照组约为0.7;其余3组均约为1.0。结论石菖蒲和α-细辛醚可能通过增强Bcl-2表达,抑制幼鼠癫痫发作激发的海马神经元凋亡。

石菖蒲及其有效成分α-细辛醚对癫痫幼鼠运动行为和记忆功能的影响

目的探讨石菖蒲及其成分α-细辛醚对戊四氮(PTZ)诱发的实验性癫痫幼鼠运动行为和空间学习记忆能力的影响。方法W istar幼鼠随机分为正常对照组(NC)和致痫模型组(A)、苯巴比妥钠组(B)、石菖蒲组(C)、α-细辛醚组(D),以ip PTZ 60 m g/kg建立癫痫模型,各组ig给药。动态观察各组幼鼠在斜板试验、悬吊试验、自主活动试验中行为运动的变化以及在M orris水迷宫试验中空间学习记忆能力的改变。结果A组动物的转体能力、悬吊能力、自主活动能力和空间学习记忆能力明显下降,与惊厥发作严重程度呈正相关,B组次之,与其他各组比较差异均显著(P<0.05)。而C组、D组各项结果与正常对照组比较差异不显著。结论PTZ诱发的幼鼠多次惊厥发作损害其行为运动能力和空间学习记忆能力,与苯巴比妥钠相比,α-细辛醚和石菖蒲能够有效地逆转PTZ所致的损害。

左乙拉西坦单药治疗小儿癫痫伴智力低下的疗效观察

目的:观察左乙拉西坦单药治疗癫痫的同时对改善癫痫患儿智力水平的疗效。方法:癫痫伴智力低下患儿48例,其中轻度36例,重度12例,测定认知功能后,给予左乙拉西坦单药治疗。起始治疗剂量5mg·kg-1,2次·d-1口服,每2周增加5mg·kg-1,最大治疗剂量20mg·kg-1。治疗3及6个月后,再次测定患儿认知功能,并比较治疗前与治疗3及6个月的认知功能。结果:左乙拉西坦治疗3个月后,22.2%轻度智力低下患儿和16.7%重度智力低下患儿的IQ均提高5分以上;治疗6个月后,86.1%轻度智力低下患儿和41.7%重度智力低下患儿的IQ均提高5分以上,与治疗3个月比较差异有显著性(P<0.01),且轻度智力低下组的智力改善显著优于重度智力低下组(P<0.01)。左乙拉西坦治疗6个月后,41%轻度智力低下患儿平均IQ较治疗前显著提高(P<0.01);而重度智力低下患儿平均IQ较治疗前无显著提高(P>0.05)。结论:左乙拉西坦单药治疗小儿癫痫,可以明显改善轻度智力低下患儿的智力水平。

混合稀土常乐对孕鼠胚胎细胞的DNA损伤作用

为评估农用稀土常乐对人体胚胎的影响 ,采用微核试验和单细胞凝胶电泳技术检测混合稀土常乐能否通过胎盘屏障造成胎儿细胞DNA损伤。于雌鼠妊娠第六天开始染毒 ,每天分别以 0 .3 ,2 ,5和 2 0mg·kg- 1 混合稀土常乐灌胃 ,直至妊娠第 18d。结果显示 :除 0 3mg·kg- 1 剂量组外 ,其他各剂量组微核细胞率显著高于对照组 ,呈剂量—反应关系。单细胞凝胶电泳结果显示 ,随着染毒剂量的增加 ,彗星细胞率增加 ,也呈剂量—反应关系 ,由此得出结论 :农用稀土常乐在 2 ,5和 2 0mg·kg- 1 剂量下可不同程度地通过胎盘屏障 ,并引起胚胎肝细胞和多染红细胞DNA损伤。

石菖蒲及其有效成分-细辛醚对癫痫幼鼠海马区神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的探讨在戊四氮(PTZ)诱发的癫痫动物模型中,石菖蒲及其主要成分α-细辛醚对海马区神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体1(NMDAR1) mRNA表达水平的影响。方法3周龄Wistar幼鼠ipPTZ60mg/kg建立癫痫模型。动物模型随机分为模型对照组、石菖蒲组、α-细辛醚组,另设正常对照组。各组均ig给药。正常对照组给予生理盐水1.0mL/d,其余各组分别给予石菖蒲2350mg/(kg·d),α-细辛醚29mg/(kg·d),连续7d。次日ipPTZ60mg/kg,观察动物行为变化,1d后处死动物,取左侧大脑固定用于原位杂交;取右侧海马组织用于半定量RT-PCR,检测海马CA1、CA3区神经元NMDRA1 mRNA的表达情况。结果原位杂交结果显示,阳性染色颗粒定位于海马神经元胞质内。石菖蒲和α-细辛醚治疗组海马区神经元阳性细胞数和平均吸光度均明显少于模型对照组(P<0.05)。半定量RT-PCR结果显示,石菖蒲和α-细辛醚治疗组海马组织中NMDAR1 mRNA的相对表达量均较显著低于模型对照组(P<0.05)。结论石菖蒲和α-细辛醚可能通过抑制海马区神经元谷氨酸NMDAR1表达而发挥抑制PTZ诱发的幼鼠癫痫发作。

长期服用低剂量硝酸镧对大鼠心脏超氧化物歧化酶和脂质过氧化物含量的影响

目的 :研究长期服用低剂量硝酸镧对大鼠心脏铜 -锌超氧化物歧化酶 ( Cu- Zn SOD)和脂质过氧化物 ( LPO)含量的影响。方法 :以 Wistar大鼠为对象 ,分别以每日 1次硝酸镧 0 .1、0 .2、2 .0、1 0 .0及 2 0 .0 mg· kg-1连续灌胃 6个月 ,应用生物化学方法研究大鼠心脏 Cu- Zn SOD和 LPO含量的变化。结果 :给予硝酸镧 6个月后 ,2 0 .0 mg· kg-1组 SOD含量较对照组显著降低 ,而 LPO的含量则显著升高 ;SOD的含量随给药剂量的增加而减少 ,LPO的含量随给药剂量的增加而增加。结论 :较高剂量 ( 2 0 .0、1 0 .0 mg·kg-1)硝酸镧的直接损伤可使大鼠心脏脂质过氧化加强 ,清除自由基的能力下降 ;较低剂量 ( 2 .0、0 .2及 0 .1 mg·kg-1)时 。

低剂量混合稀土常乐对大鼠血清胰岛素及肝细胞糖原的影响

目的研究长期灌胃低剂量混合稀土常乐对大鼠血清胰岛素、血糖及肝细胞糖原的影响。方法将Wistar大鼠随机分为两大组,即6月组和7月组,每组又分为对照组与混合稀土常乐组。混合稀土常乐组又分为4个剂量组:0.1、0.2、2.0、10.0mg/kg,每组30只大鼠,雌雄各半。混合稀土常乐组每日以灌胃方式给予上述不同剂量的混合稀土常乐,对照组给予等量0.9/生理盐水。6月组持续灌胃6个月,7月组于灌胃6个月后,停止给予混合稀土常乐及等量生理盐水,正常饲喂1个月。利用放射免疫分析技术和显微图像分析技术检测大鼠血清中胰岛素的水平、血糖水平和肝细胞糖原的水平。结果给予混合稀土常乐6个月后,10.0mg/kg组雌性、雄性大鼠胰岛素水平下降、血糖水平升高和肝细胞糖原的灰度值升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。0.1、0.2、2.0mg/kg组雄性大鼠胰岛素水平升高、血糖水平下降和肝细胞糖原的灰度值下降,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。灌胃6个月后,停药1个月检测,雌性、雄性大鼠各组胰岛素水平和肝细胞糖原的灰度值基本恢复正常。结论低剂量混合稀土常乐长期作用可以引起大鼠血清中胰岛素水平和肝细胞糖原发生变化,这种变化可在短期内恢复正常;较低浓度的混合稀土常乐(0.1、0.2和2.0mg/kg)可促进胰岛素分泌和肝细胞糖原合成。