豚鼠内耳微血管解剖结构的特点

为研究内耳微血管解剖结构的特点，应用微血管铸型技术，在扫描电镜下观察了１０只豚鼠基底膜、椭圆囊、球囊和三个壶腹的微血管三维空间构架。研究发现，无论在耳蜗或前庭，细动脉在到达供应部位以前均作螺旋状盘旋数周，延长了血管的长度，可维持内耳稳定的血液供应，并使内耳感受器不致受到血管搏动和血流噪声的影响。内耳微血管解剖的另一特点是，壶腹嵴半月面区的血管网较血管纹区稀疏，提示血管纹区的代谢比暗细胞区者旺盛；而基底膜中的微血管网较前庭区感觉上皮下方的血管网明显稀少，提示耳蜗毛细胞的能量需求较少，对缺氧的耐受力较强。

生长因子对离体听神经元存活与轴突再生的影响

为了证实生长因子对体外培养成熟听神经元的影响，应用无血清培养技术和细胞学定量方法，观察了神经生长因子（ＮＧＦ）、硷基成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）对生后１０～１６日龄白莱亨鸡初级听神经元的体外存活及其轴突再生的生物学作用。结果表明，出生后鸡的听神经元在生长因子作用下仍可在体外存活。早期生长细胞以非神经元成份（Ｓｃｈｗａｎｎ细胞，成纤维细胞）为主，２４小时可见听神经元突起（双极或单极）形成。培养４８～７２小时轴突生长旺盛。实验表明，外源性ＮＧＦ与ｂＦＧＦ对幼鸡听神经元具有直接的营养作用。两者在听神经元的体外存活与轴突再生过程中呈现出协同作用。上述生物效应在体外条件下存在浓度依赖性与饱和特点。

声损伤后基底乳头中DNA复制与细胞增殖

为探讨听觉上皮修复过程的细胞生物学特点，用剂量为１１５ｄＢ（Ａ）×７２小时的宽带噪声建立８～１４日龄鸡声损伤模型。于不同时间用ＤＮＡ合成示踪剂——氚标记胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）予以标记。取基底乳头连续培养并进行放射自显影观察。实验显示，首次标记４８小时后受损区可见标记阳性细胞（或前体细胞）。标记毛细胞出现于９６小时。５～６天时，标记毛细胞处于分化过程中。对照组未见标记毛细胞。结果表明，声损伤后听觉上皮存在着ＤＮＡ的复制与细胞增殖，３Ｈ－ＴｄＲ标记阳性细胞最终定位于基底乳头表层并分化为毛细胞。提示基底乳头局部组织中的某些支持细胞为再生毛细胞的前体。

双醋酸荧光素－碘化丙啶双染色法鉴别豚鼠外毛细胞活性

为提供一种准确判断单离细胞活性的方法，采用双醋酸荧光素（ＦＤＡ）－碘化丙啶（ＰＩ）双染色，荧光显微镜观察，鉴别了豚鼠耳蜗单个外毛细胞的活性。在激发光下染色后的活细胞显绿色，失活细胞核呈红色。在室温下计数５只豚鼠（１０侧听泡）在断头１、２、３、５和７ｈ后的单离细胞平均存活百分率分别为８５．０％、７８．０％、７０．０％、２３．５％和０。本方法为一种鉴别细胞活性的客观可靠的方法。

大鼠喉同种异体移植术后组织学观察

为探讨大鼠同种异体喉移植免疫排斥反应发生的时间和发展过程，共实施大鼠喉移植术３１只。其中对照组（ｎ＝１３）：供、受体均为封闭群ＳＤ大鼠，属同系喉移植术。实验组（ｎ＝１８）：供体为封闭群ＳＤ大鼠，受体为Ｗｉｓｔａｒ大鼠，属同种异体移植术。免疫排斥反应开始于术后第３天，表现为受体颈部皮肤肿胀，淋巴结肿大，７天后颈部皮肤硬肿显著，移植物组织水肿，逐渐被纤维结缔组织包裹。相应的组织学变化特点是：术后第３天变化与对照组基本相同，５天后实验组粘膜上皮逐渐出现鳞状上皮化生，固有层和粘膜下层腺体发生萎缩并消失，横纹肌变性坏死，上述各层组织出现进行性淋巴细胞、单核细胞和多形核白细胞浸润，血管纤维素样变性，管壁增厚，管内血栓形成，１４天后喉移植物的正常组织结构被纤维结缔组织和肉芽组织取代，最终出现完全性变性坏死。由此判断了同种异体喉移植免疫排斥反应发生的时间、顺序和程度，为免疫抑制剂的应用及功效评价提供了客观依据。

鸡内耳听觉器官的原代培养

为在体外环境中的毛细胞形态学观察及其相关研究提供组织模型，应用原代器官培养技术，对出生后８～１６ｄ的２０只鸡的听觉上皮——基底乳头（ＢＰ）连续培养１～７ｄ，观察并比较了ＢＰ组织中的细胞存活状态。结果显示，培养期内ＢＰ组织构型与毛细胞、支持细胞形态在离体条件下仍能良好维持，与在体对照组无显著差别。以重组碱基成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）－胶原复合物为基质的贴壁培养法效果理想，培养６ｄ之内ＢＰ存活良好；悬浮培养法适用于４８ｈ的短期培养。

单色及二色生物微球的制作及其在内耳微循环实验研究中的应用

1.内耳微循环的研究该研究与内耳生理、病理及临床研究息息相关,对阐明许多内耳疾病的发病机理,寻找有效的治疗方法具有重要意义。

链霉素、庆大霉素和卡那霉素对豚鼠单个离体毛细胞活性影响的比较

为比较氨基甙类抗生素对豚鼠单个离体外毛细胞和前庭毛细胞的影响， 用酶解加机械分离方法获得单个离体的外毛细胞和前庭毛细胞，置于分别含有１ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ的链霉素、庆大霉素和卡那霉素的培养液中短期培养，并以ＦＤＡ－ＰＩ双染色法鉴定细胞活性。结果发现在仅含上述药物的培养液中， 细胞活性无明显改变， 而在无钙、镁培养液中３ 种药物均可引起细胞形态和活性的改变，其中链霉素和庆大霉素对前庭毛细胞活性影响较大，卡那霉素对外毛细胞活性影响较强。

豚鼠半规管及壶腹微血管的电镜观察

应用血管铸型技术和扫描电镜观察了豚鼠３个半规管及其壶腹的微血管三维空间结构，发现了３个壶腹的微血管结构基本相同，血供动脉均从壶腹嵴的基底部进入壶腹，壶腹嵴中央毛细血管网最为密集，半月面处较为稀疏，静脉血从壶腹底部及顶部回流。

声损伤后鸡听觉上皮的修复和毛细胞再生──扫描电镜与图像分析研究

应用扫描电镜和图像分析方法对宽带噪声损伤后鸡基底乳头病变以及听觉毛细胞再生反应进行定量研究。观察了存活０、２、７、１５和３０天时平均毛细胞表面积，平均毛细胞密度，毛细胞／支持细胞面积比及基底乳头损伤范围等参数。结果显示，基底乳头病变范围为近端１０％至中段６０％。早期反应包括支持细胞扩张和毛细胞静纤毛变性及皮板表面积缩小。损伤后２天可见新生毛细胞，形态与胚胎期幼稚毛细胞相似。７～１５天毛细胞数目与表面积逐渐增加，基底乳头ｍｏｓａｉｃ构型基本恢复。静纤毛排列与极性至３０天时尚未完全恢复。损伤区仍有散在的残存毛细胞及分化早期的幼稚毛细胞。上述结果提示，再生毛细胞的前体存在于受损区局部并与支持细胞的活动有关。前体细胞的增殖至再生毛细胞出现的时间约为４８ｈ，但亦存在一定程度的非同步现象，损伤后７～１５天为细胞修复的主要时期。

全自动细胞图像分析系统在炎性和癌性腹水鉴别诊断中的作用

目的 应用全自动细胞图像分析系统 (automaticimagingcytometer ,AICM )鉴别炎性和癌性腹水。方法 63例腹水标本 ,经离心涂片 ,每例制成 4张薄层细胞片。 2张细胞片做巴氏染色 ,用于常规细胞学检查。另 2张经Feulgen Thionin染色 ,用AICM进行细胞核DNA定量测定检查。每例标本受检细胞总数不少于 40 0 0个。结果 63例腹水标本经临床或病理诊断证实 ,2 6例为炎性腹水 ,3 7例为癌性腹水。常规细胞学方法对炎性腹水和癌性腹水的的诊断阳性率分别为 88%、 84% ,AICM的诊断阳性率分别为 10 0 %、 92 %。癌性腹水的检测中 ,AICM可检出数量不等的DI >2 5细胞 ,而炎性腹水不能检出该类细胞。在癌性腹水标本中 ,异倍体细胞与细胞总数的百分比 (恶性间皮瘤 3 4% ,转移性癌 9 7% )明显高于炎性腹水标本 (<0 6% ) ,而炎性细胞与受检细胞总数的百分比 (恶性间皮瘤 5 8% ,转移性癌 4 8% )远低于炎性腹水 (46 8% )和结核性腹水 (8 8% )。结论 AICM用于炎性和癌性腹水的鉴别诊断较常规细胞学方法更客观。

豚鼠耳蜗微血管铸型的扫描电镜观察

应用血管铸型技术和扫描电镜观察了豚鼠耳蜗的微血管，结果见耳蜗血管均被铸型物完全充填，耳蜗血管的总体三维空间图像得以清晰地显示。作者对外放射状动脉及其分支，以及耳蜗侧壁回流静脉的解剖进行了仔细观察。

耳蜗微血管铸型方法的探讨

血管铸型法是向血管系统内灌注铸型剂,待其聚合硬化后腐蚀并去除组织,制成血管铸型标本。将标本置扫描电镜下观察,可探讨器官内微血管的立体构型及血管分布状况,为微循环的形态学研究开辟了途径。为了对耳蜗微血管进行形态学研究,我们选用甲基丙烯酸甲酯作为铸型剂。

消炎痛拮抗卡那霉素耳毒作用的实验研究

为研究消炎痛对卡那霉素耳毒性的拮抗作用,本实验用听力正常的健康花斑豚鼠60只,分两组,KF组用卡那霉素450mg/kg ip及速尿60mg/kg iv,观察8天;KFI组用卡那霉素450mg/kgip,速尿60mg/kg iv,半小时后用消炎痛10mg/kg iv,第2-8天继续用消炎痛5mg/kg/d ip。两组动物于用卡那霉素、速尿前及用药后第8天检测ABR,CAP,最后一次检测听功能后,在扫描电镜及光镜下观察耳蜗螺旋器及血管纹。发现KF组ABR(Ⅲ)及CAP(N_1)声反应阈阈值较KFI组明显提高(P<0.05),耳蜗毛细胞出现程度不同的形态学变化,血管纹无水肿。结果提示,消炎痛可减轻卡那霉素的耳毒性。

小鸡单离听毛细胞的分离及其形态学观察

用胶原酶孵育后机械分离15只小鸡的听毛细胞，平均每侧可分离428个。对其中5只鸡的215个活性良好的单离毛细胞进行了形态学测量，其中高毛细胞164个，长20．22±3．32μm，宽9．93±2．01μm，矮毛细胞30个，长10．97±2．29μm，宽14．8±2．29μm，中间型毛细胞21个，长宽相等，均为11.93±1.74μm。用双醋酸荧光素-碘化丙啶对另外5只鸡单离毛细胞进行染色，在荧光显微镜下观察细胞的变性过程。鸡断头3h内，活性良好的细胞着非常明亮的绿色荧光，到5h，活性细胞呈现不清晰的绿影。实验结果表明，判断单离毛细胞的活性，应将形态学观察标准与细胞染色结合起来。

雏鸡内耳听器的比较解剖学研究

应用显微组织学方法观察雏鸡内耳听觉器官的形态学特点并与豚鼠进行相关比较。结果显示,鸡内耳听器感觉毛细胞类型、排列方式及神经支配乃至基底膜、盖膜构筑等与豚鼠十分相似。提示二者在其发生与发育过程中具有明显的种属同源性。并对其组织学特点以及在实验研究中的应用价值进行了讨论。

血管铸型扫描电镜对豚鼠耳蜗底周微血管解剖研究

应用微血管铸型技术和扫描电镜观察豚鼠耳蜗底周微血管解剖结构,得到了耳蜗血管的三维空间结构图象。耳蜗底周微的血管与其他3周不同,其前1/3段和其他周极为相似,其血液供应来自耳蜗主动脉。较低的一段可见从一动脉主干分出许多放射状动脉,而后段则由前庭耳蜗动脉的分支供应。

雏鸡初级听神经元的原代培养方法

报告对出生后10～16d龄鸡初级听神经细胞（PAN）进行原代培养的方法；用倒置相差显微镜和扫描电镜，观察不同培养时间听神经元的生长发育过程与形态学特征。结果显示，培养PAN数量和形态以及存活时间，均可满足体外研究的要求，可作为多种体外研究的材料。表明PAN原代培养方法．扩大了培养材料的来源，为开展内耳体外研究提供了一种新的实验手段。

豚鼠单个离体前庭毛细胞的光镜观察

分离豚鼠前庭器感觉毛细胞，并使其在体外保持特有的形态和活性，用倒置显微镜进行观察。结果显示，细胞在形态和大小上有较大的差异，说明哺乳动物的前庭毛细胞仅分为Ⅰ型和Ⅱ型是不够的。笔者认为，将哺乳动物的前庭毛细胞分成４型，似在细胞形态学上更具代表性。