柑橘黄化花叶病毒的实时定量PCR检测及其在寄主植株中的时空分布规律

【背景】柑橘黄化花叶病毒(citrus yellow mosaic virus,CYMV)是首先发现于印度并对其柑橘产业造成严重危害的一种杆状DNA病毒。目前,CYMV已被美国、日本、新西兰、欧洲和地中海地区列入检疫性有害生物名单,具有传入我国的潜在风险。【目的】建立CYMV的实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测体系;筛选CYMV敏感柑橘品种;明确CYMV在寄主植株中的时空分布规律,为该病毒的监控提供技术支持。【方法】根据NCBI中CYMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因保守序列,利用软件Primer Premier 5设计qPCR检测引物8对,通过常规PCR筛选扩增效果好、特异性强的引物。通过对引物浓度、退火温度等反应条件优化,建立CYMV的qPCR检测体系,并进一步通过对不同柑橘病原的检测评价所建体系的特异性;以梯度稀释的1.98×109—1.98 copies/μL的质粒标准品平行进行常规PCR及qPCR检测,评价所建方法的灵敏度;随机采集田间柑橘样品,平行进行常规PCR及qPCR检测,评价所建方法的适用性。将CYMV接种到玉环柚(Citrus grandis)、强德勒柚(C.grandis)、22号枳(Poncirus trifoliata)等15个柑橘品种,进行症状观察和分子检测以筛选敏感指示植物。在接种后不同时间,分别自MV甜橙(C.sinensis)植株不同组织部位取样,以柑橘生长因子1α基因为内参基因,利用所建体系进行qPCR检测,从而明确CYMV在寄主植株中的时空分布规律。【结果】建立了CYMV的qPCR检测体系,其最佳引物为CYMV-qF7/R7,最佳引物浓度为200 nmol·L^(-1),最佳退火温度为63℃。该检测体系的特异性强,检测灵敏度是常规PCR的1000倍。对来自不同地区的660个田间柑橘样品的检测结果表明,qPCR检测与常规PCR检测结果一致,除阳性对照外均未检测到CYMV阳性植株。不同柑橘品种接种试验结果表明,15个柑橘品种中,玉环柚和强德勒柚最早表现出强烈的黄化花叶典型侵染症状,可以作为敏感指示植物。qPCR检测结果表明,老叶中的CYMV滴度最高,老皮和根病毒滴度较高,嫩皮中的滴度较低。CYMV在植株中的相对含量,7—9月最高,此后逐月下降,并在次年1月达到最低值,从次年2月开始,CYMV的相对含量开始上升,与环境温度变化趋势一致。【结论】建立了特异性强、灵敏度高的CYMV实时荧光定量PCR检测方法,利用该方法明确了CYMV在寄主植株中的时空分布规律。此外,玉环柚和强德勒柚可作为CYMV敏感指示植物。

广薯87鲜薯和蒸薯挥发性风味成分分析

【目的】研究广薯87在蒸制前后挥发性风味成分的变化情况,为鲜食型甘薯风味物质改良提供参考。【方法】采用顶空固相微萃取(HS-SPME)和气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)技术对广薯87鲜薯及蒸薯的挥发性风味成分进行比较和分析。【结果】广薯87鲜薯检测出71种挥发性物质,主要包括醛类(40.52%)、萜类(16.18%)、杂环类(15.17%)、醇类(11.59%)、酯类(7.94%)、芳烃类(4.49%)、酮类(1.62%)化合物等;蒸薯检测出69种挥发性物质,主要包括醛类(47.36%)、芳烃类(21.39%)、萜类(10.33%)、卤代烃类(7.07%)、醇类(3.24%)、酮类(2.64%)、酯类(2.61%)化合物等。其中,鲜薯及蒸薯中相对含量最高的挥发物均为苯乙醛,含量分别为16.78%、19.92%,但蒸煮前后相对含量差异不显著。对所检测出的挥发代谢物进行差异筛选,共筛选出47种差异明显的代谢产物。上调的代谢物有14种,下调的代谢物有33种,其中上调倍数最高的化合物为氯乙酸2-苯乙基酯,上调倍数为4.4;下调倍数最高的化合物为2-丙基-1H-咪唑,下调倍数高达13.49。【结论】结合相对含量及差异分析,广薯87蒸制后相对含量显著上升的主要挥发物成分为2,4-二叔丁基苯酚和氯乙酸2-苯乙基酯,是最有可能构成广薯87蒸薯特征风味的挥发物。

农村电商人才培养路径研究

随着科技的进步,电子商务逐步渗透到农村的每个角落,对农村的经济、社会、生产生活产生了较大影响。然而,在农村电子商务快速发展的过程中,人才匮乏的问题日渐显现,阻碍了农村电商的顺利转型。文章分析了目前农村电商发展的现状与重要性,以及农村电商人才培养存在的问题,并以乡村振兴为背景,提出了加大对农村电商人才的政策扶持力度,整合政府资源、统一规划课程,根据人才的需求分类开发,采取多种形式定期评估培训效果等农村电商人才培养路径建议。

小学综合实践课的生活化教学对策

基于素质化教育背景,在小学教育过程中,综合实践课程的作用逐渐显露出来,这需要教育人员进行相应的课程教学变革,以推动生活化教学活动的开展,全面增强教学效果。基于此,先对生活化教学开展的必要性进行了分析,然后提出了有关的教学对策,助力课程教学效率的提升。

从独奏者到伴奏者——浅谈新课程教学活动中师生的变化

传统的课堂教学,由于师生关系不平等,严重抑制了学生的主体性发展。在新课程改革中,重新调整师生的角色,是素质教育能否切实实施的关键。师生角色转变的核心是老师从教学主宰者转变为指导者,学生从教学的被动者转变为主动者。师生之间是一种平等、信任、民主的关系。

城市历史景观(HUL)视角下的历史文化街区保护规划编制方法研究—以广州逢源大街—荔湾湖历史文化街区为例

逢源大街—荔湾湖历史文化街区是广州历史城区内唯一同时具有岭南历史城市、乡村价值与特色的街区,现存遗产内容多样、特征多元,当前面临以保护为出发点的新一轮城市发展压力,需要建构街区保护的多元共识。文章采用城市历史景观(HUL)视角,以逢源大街—荔湾湖历史文化街区保护规划的编制为例,探讨新时期基于“动态层积”“整体关联”“真实性传达”“能力建设”的历史文化街区保护规划编制方法创新。

中职学校平面设计教学对学生艺术设计思维的培养探讨

平面设计是艺术设计专业中的一门重要的基础课程,同时也是每位艺术专业学生必须接受的一项内容。面对中职学校平面设计教学现状,教师在开展教学时也必须对传统平面设计教学中存在的问题进行探索,并培养学生艺术设计的新型观念。本文探讨了中职学校平面设计教学对学生艺术思维培养的相关策略,以供相关人士参考。

小学语文前置性学习对促进学生课堂学习效率的探究

面对我国教育教学水平不断提高的现状,小学语文前置性学习的方法具有有效性,需要从多方面探究学生课堂学习效率的提升效果。基于此,分析了小学教学前置性学习的优势,讨论了小学语文前置性学习对促进学生课堂学习效率的探究,包括在前置性学习中复习旧的知识,在前置性学习中探究新的知识和在前置性学习中质疑问题难点,为相关人员的研究提供帮助。

粤北地区森林生态产品价值实现研究——以韶关市仁化县为例

为了实现粤北地区森林生态产品价值,以韶关市仁化县为例,实证研究森林生态产品价值的实现路径。研究认为,仁化县的森林生态产品存在产业科技创新能力弱、投入严重不足、市场竞争力不强、销售渠道有限、缺乏政府支持等问题。对此,要从拓宽销售渠道、提高产品竞争力、完善森林生态补偿机制、推动碳交易市场发展等方面着力,实现粤北地区森林生态产品价值最大化。

谷胱甘肽和凋亡酶-3响应的环肽分子荧光探针

设计、合成了一类新型谷胱甘肽(glutathione,GSH)和凋亡酶-3(Caspase-3)响应的环肽分子荧光探针.该类探针主要由能量共振转移(FRET)分子荧光对、Caspase-3特异性识别多肽序列和GSH响应双硫键组成,分为不含穿膜肽序列(CP)和包含穿膜肽序列(cp CP)的两种不同环肽分子荧光探针.2种环肽分子荧光探针均能实现在GSH和Caspase-3同时存在情况下的精确成像,同时具有良好的响应性、特异性和高信噪比.该类环肽分子荧光探针在细胞培养环境中具有良好的稳定性和生物相容性.利用该探针,可以实现对星形孢菌素(STS)诱发的细胞凋亡进行实时、原位的成像监测,并对抗肿瘤药物阿霉素(DOX)和顺铂(cisplatin)诱导的细胞凋亡进行成像.这种具有多重响应并能用于精确成像的分子荧光探针将极大地促进疾病的精确诊断.