苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及RhoA基因表达的影响

目的研究苦参碱对人结肠癌SW620细胞增殖及Rho A基因表达的影响。方法利用Cell Counting Kit-8检测不同浓度苦参碱对人结肠癌SW620细胞的增殖抑制作用,利用流式细胞仪检测细胞的凋亡率,RT-PCR检测SW620细胞内Rho A mRNA表达的水平。结果苦参碱能明显抑制SW620细胞的增殖,呈现剂量和时间依赖性关系,随着浓度增加能使SW620细胞的凋亡率增加,并且使SW620细胞内Rho A mRNA表达下降。结论苦参碱能显著抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,其作用机制可能与诱导细胞凋亡、下调Rho A mRNA的表达有关。

新铂类药物双环铂对8种结肠癌耐药细胞的化疗敏感性分析

目的用双环铂对8种耐奥沙利铂或伊立替康结肠癌耐药细胞及其原代细胞作化疗敏感性研究,为扩大该新药的临床应用范围,给耐药结肠癌患者提供更多化疗选择奠定基础。方法将8种耐奥沙利铂或伊立替康结肠癌耐药细胞系及其原代细胞系-COLO320与COLO320/OHP,COLO320与COLO320/CPT,SW620与SW620/OHP,SW620与SW620/CPT,SW480与SW480/OHP,SW480与SW480/CPT,LOVO与LOVO/OHP,LOVO与LOVO/CPT配对培养于96孔板。按从低到高的浓度加入双环铂作用一段时间后做3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)细胞毒性试验,计算各原代及耐药细胞的IC50、耐药指数及临床用药浓度下对各耐药细胞的抑制率,分析双环铂对上述耐药细胞的疗效。结果 8种结肠癌耐药细胞对双环铂的耐药指数均为1.10～2.46,而各细胞系原有耐药指数在10.16～25.87,且双环铂对8种中的7种耐药细胞均敏感,对其中1种细胞系具有高度化疗敏感性,3种中度敏感,3种低度敏感,1种不敏感。结论多数耐奥沙利铂/伊立替康的结肠癌耐药细胞(7/8)对双环铂具有不完全交叉耐药性,可以考虑将其作为临床耐药结肠癌患者的另一化疗选择。

Rho GTP酶与肿瘤细胞耐药性的关系研究进展

肿瘤细胞耐药性是导致肿瘤治疗效果不佳的主要原因之一。Rho GTP酶(Rho GTPases)作为细胞内的重要信号分子,对肿瘤的发生发展也有重要影响。目前研究发现与肿瘤细胞耐药性有关的GTPases主要包括Rho A、Rho B、Rho E、Cdc42,它们可通过对细胞膜转运蛋白、凋亡相关蛋白、信号转导通路相关分子表达的调节来影响肿瘤细胞对多种化疗药物的耐药性。

小G蛋白Cdc42对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞多药耐药性的影响

目的研究细胞分裂周期蛋白(cell division cycle 42,Cdc42)对人结肠癌奥沙利铂耐药细胞系多药耐药性的影响。方法 Western blot检测人结肠癌SW480、Colo320细胞与已成功构建的奥沙利铂耐药细胞系SW480/L-OHP、Colo320/L-OHP细胞中Cdc42的表达,用LipofectamineTM2000介导重组质粒pDEST26-His-Cdc42转染入Cdc42表达相对较低的亲代细胞系,介导Cdc42 siRNA转染入Cdc42表达相对较高的耐药细胞系。Western blot和RT-PCR检测转染是否成功。利用Cell Counting Kit-8(CCK-8)检测各细胞系5氟尿嘧啶、顺铂、奥沙利铂,紫杉醇,依托泊苷,长春新碱,阿霉素等结直肠癌常用化疗药物的药物敏感性,计算出各种药物的半数致死浓度(IC50)。行Western blot检测不同细胞系P-gp、MRP1蛋白表达水平。结果在耐药细胞系中Cdc42的表达高于亲代细胞系。成功转染外源Cdc42基因的亲代细胞CCK-8(CCK-8)法检测对多种化疗药物的IC50以及P-gp、MRP1蛋白表达水平高于未转染细胞系。成功转染Cdc42 siRNA的耐药细胞CCK-8法检测对多种化疗药物的IC50显著低于耐药细胞系。结论 Cdc42与人结肠癌细胞耐药性形成有关,Cdc42可增强人结肠癌细胞的多药耐药性的形成。提示Cdc42可能成为降低结肠癌细胞多药耐药性的分子靶点。

血府逐瘀丸治疗老年2型糖尿病伴失眠的临床疗效及其对认知功能的影响

目的:探究血府逐瘀丸治疗老年2型糖尿病伴失眠患者的临床疗效及其对认知功能影响。方法:选取43例我院收治的老年2型糖尿病伴失眠患者,将其随机分为实验组及对照组。对照组21例予地西泮治疗,实验组22予血府逐瘀丸治疗。观察两组治疗前后失眠症状及认知功能的变化情况。结果:治疗后,实验组总有效率(86.4%)高于对照组(61.9%),其差异经比较有统计学意义(P<0.05);两组匹兹堡睡眠质量指数量表(PSQI)评分均较治疗前显著降低(P<0.05),与对照组相比,实验组PSQI评分较低(P<0.05),空腹血糖水平较低(P<0.05),蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分较高(P<0.05)。结论:血府逐瘀丸可有效降低老年2型糖尿病伴失眠患者的血糖水平,提升睡眠质量,改善失眠及认知功能障碍。

RhoE对cd44基因启动子的转录活性及大肠癌细胞系恶性生物学行为的影响

目的研究RhoE对cd44基因启动子的转录调控,并探讨RhoE对裸鼠体内成瘤性的影响。方法采用PCR技术从人胚肾HEK293细胞中扩增出cd44启动子,并将其插入荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic中,经测序确定所扩增的DNA序列,并将其转染入SW480及LoVo细胞中监测其活性。将pcDNA3.1-RhoE和pcDNA3.1分别与pGL3-CD44 promoter共转染大肠癌LoVo细胞和SW480细胞,双荧光素报告基因检测活性。另外将pcDNA3.1-RhoE和对照组分别稳定转染LoVo细胞和SW480细胞,并将筛选的稳定表达的细胞分别接种裸鼠,观察肿瘤的生长;用免疫组化的方法检测RhoE对肿瘤组织细胞形态及CD44分子表达的影响。结果测序结果表明,扩增的cd44启动子序列正确,双报告基因实验检测荧光素酶活力表明构建的报告基因具有启动子活性。含cd44启动子序列的报告基因在pcDNA3.1-RhoE阳性的LoVo细胞中表达受到抑制;HE染色显示pcDNA3.1-RhoE转染组较对照组肿瘤细胞明显变小,且大小和形态呈现一致性,已没有瘤巨细胞,相应的肿瘤细胞核的体积也变小。结论 RhoE通过抑制cd44基因启动子的活性部分逆转肿瘤的恶性生物学行为。为研究RhoE表达与cd44基因的关系及CD44蛋白表达与结直肠癌发生、发展及浸润转移的关系提供了良好的实验基础。

Rac1b小干扰RNA对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的观察Rac1b小干扰RNA(Si-Rac1b)对结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 Si-Rac1b在lipofectamineTM2000介导下转染筛选出的Rac1b高表达的结直肠癌细胞SW1116,分别从RNA和蛋白水平检测转染细胞Rac1b的表达,采用细胞增殖实验,损伤刮擦实验,体外侵袭实验(Trans well小室)和hoechst方法分别检测Si-Rac1b转染细胞的增殖潜力,迁移与侵袭能力和凋亡的变化。结果成功转染Si-Rac1b的肿瘤细胞,Rac1b mRNA和蛋白表达都明显下调,而Rac1 mRNA和蛋白表达无明显变化;Si-Rac1b可明显抑制结直肠癌细胞SW1116的增殖、迁移和侵袭均并能促进SW1116细胞的凋亡。结论 Si-Rac1b能够部分逆转结直肠癌细胞SW1116的恶性生物学行为。

雌激素受体α36影响他莫昔芬治疗乳腺癌的分子机制研究进展

雌激素受体α(ERα)36是相对分子质量为36×103的ERα的一种亚型。它缺失转录活性区1(AF-1)和转录活性区2(AF-2),在生物学功能上与ERα66有很大不同。ERα36主要位于细胞膜和细胞质中,主要参与膜介导的非基因组信号通路。它能抑制ERα66介导的传统基因组信号通路,引起不同蛋白的层级磷酸化反应,增加乳腺癌和子宫内膜癌细胞及其干细胞的耐药性、迁移能力和浸润能力。研究显示ERα36与乳腺癌采用他莫昔芬治疗耐药有密切关系。对ERα36的深入研究有助于深化乳腺癌发生发展的理论知识,为内分泌治疗药物选择提供可能的理论依据。

华蟾素对人胃癌SGC7901细胞增殖及RhoGTPase表达的影响

目的研究华蟾素对人胃癌SGC7901细胞增殖及Rho GTPase表达的影响。方法将人胃癌SGC7901细胞分为华蟾素组和对照组,利用Cell Counting Kit-8检测(0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL)华蟾素组和对照组的人胃癌SGC7901细胞的增殖抑制情况,利用Western blot和RT-PCR分别检测不同浓度(0.5、1.0、2.0ng/mL)华蟾素组和对照组的人胃癌SGC7901细胞内Rho GTPase(RhoA、Cdc42、Rac1)蛋白和mRNA表达的水平。结果与对照组相比,0.5、1.0、1.5、2.0mg/mL华蟾素组对SGC7901细胞均具有增殖抑制作用(P<0.05)。0.5、1.0、2.0mg/mL华蟾素组的SGC7901细胞内Rho GTPase(RhoA、Cdc42、Rac1)蛋白和mRNA表达明显降低且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论华蟾素抑制胃癌SGC7901的增殖的机制可能与下调Rho GTPase(RhoA、Cdc42、Rac1)信号通路的表达有关。