基于网络药理学与分子对接探讨苓桂术甘汤治疗新冠肺炎合并支气管哮喘潜在作用机制研究

目的研究苓桂术甘汤治疗新型冠状肺炎合并支气管哮喘潜在的作用机制。方法基于TCMSP数据库筛选苓桂术甘汤主要活性有效成分。利用GeneCards、OMIM、DisgNET等数据库获取新冠肺炎和支气管哮喘疾病作用靶点。使用STRING数据库筛选核心靶点并构建蛋白网络互作分析,通过微生信对核心靶点进行GO和KEGG通路富集分析。借助Cytoscape3.7.1软件构建主要活性成分-靶点-信号通路的可视化处理。最后通过Autodocking 1.5.7将核心成分和核心靶点进行分子对接验证。结果苓桂术甘汤中含主要活性成分121个,支气管哮喘靶点共2115个,新冠肺炎靶点1972个,交集靶点58个,GO分析涉及细胞组成、细胞间信号调控和分子间蛋白结合;KEGG信号通路注释到AMPK通路、NF-kappa B通路、PI3K-Akt通路等152条信号通路。其中靶点IL6与槲皮素呈现出最低的亲和力为-7kcal/mol,TNF、IL6与槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇结合能均小于-5 kcal/mol。结论本研究揭示了苓桂术甘汤通过多成分作用、多靶点、调节多条信号通路协同发挥对新冠肺炎合并支气管哮喘的治疗作用,为苓桂术甘汤的进一步分子机制研究提供理论依据。

Ad-ING4-IL-24对骨肉瘤生长抑制效应的实验研究

目的:研究肿瘤生长抑制因子4(ING4)和人白细胞介素24(hIL-24)双基因共表达腺病毒载体对MG-63人骨肉瘤细胞及其裸鼠移植瘤的抑癌增效作用。方法:将Ad-ING4-IL-24腺病毒感染MG-63细胞,用RT-PCR法检测ING4和(或)IL-24基因在肿瘤细胞中的表达。MTT法和流式细胞仪(FCM)检测ING4和(或)IL-24基因的表达对MG-63的生长抑制和促凋亡的影响。用骨肉瘤细胞的裸鼠移植瘤动物模型,检测Ad-ING-IL-24对移植瘤生长的抑制作用,并通过免疫组化法检测Bcl-2、Bax、Caspase-3等基因的表达。结果:ING4和IL-24基因在MG-63细胞中成功表达,并对MG-63增殖有明显抑制作用,并能引起细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高有关。动物实验表明Ad-ING4-IL-24能显著抑制移植瘤生长,瘤重抑瘤率达75.7%。免疫组化结果显示Ad-ING4-IL-24能明显上调Bax、P21和Caspase-3等基因的表达,同时下调Bcl-2和CD34的表达。结论:Ad-ING4-IL-24在肿瘤基因治疗中是非常理想的抑癌增效载体。

MDA-7/IL-24对乳腺癌MDA-MB-231细胞生长抑制和凋亡的影响

目的探讨IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制和促凋亡作用。方法利用脂质体将穿梭质粒pDC316-hIL-24-EGFP瞬时转染至乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR检测转染后hIL-24基因mRNA的转录,Western blot检测转染后IL-24和caspase-3蛋白的表达,MTT比色法测定细胞增殖的抑制,流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化,Hoechst 33258染色检测细胞凋亡。结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达。IL-24可上调MDA-MB-231细胞中caspase-3蛋白表达。IL-24基因的表达使得乳腺癌MDA-MB-231细胞出现增殖抑制。流式细胞仪检测显示MDA-MB-231细胞DNA合成受到抑制,细胞周期主要抑制在G2/M期。Hoechst 33258染色显示IL-24基因转染后MDA-MB-231细胞出现凋亡。结论 IL-24基因转染乳腺癌MDA-MB-231细胞后可能通过上调caspase-3的表达而抑制细胞增殖,促进其凋亡。

五味子乙素对HepG2细胞凋亡及Hsp-70基因表达的影响

目的探讨五味子乙素(Sch B)对人肝癌HepG2细胞的抑制作用,并研究其可能机制。方法 10、25、50、75、100μmol/L Sch B作用于HepG2细胞,通过MTT法筛选低毒性的Sch B浓度,梯度浓度Sch B作用HepG2细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态;MTT法检测细胞活性;Western blot法检测Sch B作用HepG2细胞48 h后不同浓度组热休克蛋白-70(Hsp-70)的表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡及周期改变。结果Sch B能够抑制HepG2细胞的生长,并呈浓度依赖性;流式细胞术结果显示10、25μmol/L Sch B组细胞在SubG1期明显高于阴性对照组(P<0.05)。结论 Sch B促凋亡机制可能与下调Hsp-70蛋白的表达有关;如做免疫调节剂与其他抗癌药物联合使用最佳给药浓度为10μmol/L。

抑癌基因IL-24在乳腺癌细胞中的表达及意义

目的研究hIL-24(人白细胞介素24)对MDA-MB-231乳腺癌细胞的生长抑制作用。方法将pDC316-hIL-24-EGFP转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Western blot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的表达。结晶紫染色法检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制。RT-PCR检测侵袭、转移相关基因的转录。ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平。结果 IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用。能明显下调MMP-2、MMP-9的转录。VEGF、Ang-1表达下降。结论 IL-24对乳腺癌细胞有明显的抑制生长、侵袭转移、血管生成的作用。

科研引导型实验教学模式在临床检验基础实验教学中的应用与实践

本文提出了科研引导型临床检验基础实验教学模式构建的思路,通过五个方面的实验教学改革,全面提高了学生的综合素质,尤其是科研素质。改革取得了一定成效,并为提高医学检验专业学生实践能力进行了有益的探索。

YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子敏感特性的研究

为探讨YFP-H148Q/I152L在FRT细胞中的表达及其对碘离子的敏感性,应用点突变试剂盒将真核表达载体YFP特异编码序列第148位氨基酸H突变为Q,第152位氨基酸I突变为L,脂质体介导将YFP-H148Q/I152L转染入稳定表达Ano2的FRT细胞中,应用荧光淬灭动力学试验检测YFP-H148Q/I152对其碘离子的敏感性。测序结果证实,成功将YFP突变为YFP-H148Q/I152L,且荧光淬灭动力学试验表明,表达YFP-H148Q/I152L的FRT细胞在加入激活剂和碘离子后,相对荧光强度显著下降。表明成功构建YFP-H148Q/I152L真核表达载体,并证实表达于FRT胞浆中的YFPH148Q/I152L具有对碘离子敏感的特性。

腺病毒介导的ING4对裸鼠人骨肉瘤移植瘤的生长抑制作用

目的:研究腺病毒介导的人ING4基因(Ad-ING4)对MG-63人骨肉瘤细胞移植瘤的生长抑制作用及其机制。方法:将本室构建好的重组腺病毒表达载体Ad-ING4,经QBI-293A细胞感染多轮扩增后获得高效价重组病毒子以用于肿瘤基因治疗试验,首先建立MG-63人骨肉瘤细胞移植瘤裸鼠模型,然后将15只荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(PBS组)、空载体对照组(Ad-GFP组)、Ad-ING4实验组(Ad-ING4组),3组均使用瘤体内注射干预用药,隔日一次,共5次。分别于用药前和用药后测量皮下瘤的体积,治疗开始后的第15天将裸鼠脱颈处死,摘取瘤体称重,计算抑瘤率。HE染色观察移植瘤细胞形态,免疫组化法检测瘤体中Bcl-2、Bax、Caspase-3、VEGF、CD34细胞因子的表达。结果:获得了高滴度(109pfu/ml)的重组腺病毒Ad-ING4;经瘤体基因治疗后,Ad-ING4组与PBS组及Ad-GFP组相比,可以明显抑制裸鼠MG-63人骨肉瘤细胞移植瘤生长,瘤重抑制率可达59.3%,移植瘤组织中可出现典型的细胞凋亡、坏死现象,其分子机制可能与Ad-ING4明显上调瘤体中促进凋亡的细胞因子Bax、Caspase-3的表达,下调抑制凋亡因子Bcl-2及血管形成细胞因子VEGF、CD34的表达有关。结论:Ad-ING4可以显著抑制MG-63人骨肉瘤细胞荷瘤生长,其机制可能通过激活细胞凋亡和抑制血管形成等途径来发挥抑瘤作用。

吉林地区汉族人群12个STR基因座的遗传多态性

目的:分析吉林地区汉族人群短串联重复序列(STR)六个双基因座即12个STR位点的遗传多态性分布,获得相应多态位点的群体遗传学数据. 方法:采集103份吉林地区汉族无血缘关系的个体血样,提取DNA,经聚合酶链式反应(PCR)分六组进行复合扩增(Ⅰ:TPOX+CSF1PO, Ⅱ:D3S1358+D13S317, Ⅲ:D5S818+D19S400, Ⅳ:VWA+D12S391, Ⅴ:D1S1656+FGA, Ⅵ:D8S1179+D19S253),非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离后,银染显色分析. 统计各等位基因的基因频率,分别计算各基因座的杂合度(H)、个人识别能力(DP)、非父排除率(PE)和多态性信息含量(PIC). 结果:得到12个基因座各等位基因的基因频率,经χ2检验,基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有较高的H和PIC. 上述12个基因座的H为0.7511～0.8524,DP为0.8214～0.9580,PE为0.5167～0.6956,PIC为0.7100～0.8358. 累积DP为0.9999999999992,累积PE为0.999988. 结论:此STR六个双基因座具有高度多态性,是较理想的遗传标记,所得到的等位基因频率等数据可为法医学个人识别、亲子鉴定及群体遗传学研究提供依据.

客观结构化实践考试在医学课程中的应用现状

客观结构化实践考试(Objective Structured Practical Examination,OSPE)是一种用来评价实验室实践技能的评价工具,具有客观、公正、全面的优势,能深刻反映学生对知识的掌握与运用能力,在国外早期医学课程的应用中获得了良好效果,得到了广泛认可。现将近年来有关OSPE在医学课程中的应用做一简要综述,以期为医学课程评价方法的改革与探索提供有益思路。

AML1-ETO融合蛋白对BCL-2基因表达的影响

本研究旨在观察AML1-ETO在白血病细胞中对于抗凋亡基因BCL-2表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937-WT、U937-Mock和经AML1-ETO基因转染的U937-A/E1-4的细胞凋亡率;使用免疫印迹法检测cleaved caspase-3蛋白的表达;荧光实时定量PCR检测转染细胞和对照组细胞以及AML-M2患者白血病细胞BCL-2 mRNA的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与BCL-2基因启动子之间直接的相互作用情况。结果表明:AML1-ETO转染细胞的凋亡率明显增加,且检测到cleaved caspase-3蛋白的表达;转染了AML1-ETO的U937细胞系和具有AML1-ETO融合基因的AML-M2患者中,BCL-2的mRNA表达水平显著下调;转染细胞沉淀富集的AML1-ETO直接结合的DNA中含有BCL-2基因的启动子序列。结论:BCL-2是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调BCL-2的表达。

类风湿性关节炎患者外周血单个核细胞DcR3基因表达水平的分析

目的探讨诱骗受体3(DcR3)在类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中基因表达水平的变化。方法采用实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)检测40例RA患者(22例活动期,18例缓解期)和25例健康体检者中外周血单个核细胞DcR3mRNA的基因表达水平,并将检测结果与DAS28评分进行相关性分析。结果 RA患者PBMCs中,DcR3mRNA表达水平明显高于正常人(P<0.05);RA患者活动期PBMC中DcR3mRNA表达水平高于缓解期RA患者和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)RA患者外周血DcR3mRNA水平与DAS28评分呈显著正相关趋势。结论 RA患者PBMCs中DcR3mRNA表达水平升高,与疾病的活动性密切相关,可能与免疫调节的紊乱有关,参与了RA的发病过程。

基于OBE理念的BOPPPS教学模式在临床基础检验学技术教学中的探索与实践

临床基础检验学技术是医学检验专业的一门重要的基础课程,将OBE教育理念为依据,重新构建课程内容,实现理论与实践有机融合,并通过BOPPPS教学模式对该课程进行教学实践,可以有效促使学生加深对与该课程相关知识点的理解和应用,为符合现代临床检验工作岗位要求的胜任力及培养学生学习的积极性、主动性和动手实践能力等应用型人才,为“一流本科”课程建设,打造“线上线下混合式金课”奠定基础。

复方五味子口服液的制备及抗疲劳功能评价

目的研究复方五味子口服液的制备工艺,并对其抗疲劳功能进行评价。方法选用五味子、黄芪、覆盆子为原料,制成复方五味子口服液;通过不同料液比、提取温度、提取次数、提取时间进行单因素正交实验以确定最优提取方法;选取ICR雄性小鼠,观察复方五味子口服液低、中、高剂量组的抗疲劳作用。结果复方五味子口服液的最佳提取工艺为:料液比1∶40,提取时间3 h,提取温度90℃,提取次数3次;复方五味子口服液可增加小鼠的运动耐力,提高小鼠的负重游泳时间和体内肝糖原的水平,降低血清尿素氮和血乳酸等指标的水平。结论复方五味子口服液制备工艺稳定、可行,具有明显的抗疲劳作用。

课件、教案及讲稿三者在高校教学中的应用体会

课件(courseware)是根据教学大纲和教学目的要求,制定教学内容、教学任务、教学活动结构及界面设计等环节,而经过严格的教学设计,并以多种媒体的表现方式和超文本结构制作而成的课程软件,即多媒体课件。教案是教师的教学设计和设想,是设计者教育思想、智慧、动机、经验、个性和教学艺术性的综合体现。讲稿是教课前、报告或演讲所写的底稿,对于我们高校教员而言,讲稿即讲课的发言稿。课件、教案及讲稿三者有机结合是高校教师上好每堂课的基础,在提高教学质量中发挥着重要作用。

人参皂甙单体Rh_2对K562细胞增殖和凋亡作用的实验研究

目的研究人参皂甙单体-Rh2(GS-Rh2)对人K562细胞增殖和凋亡作用的影响。方法采用MTT比色法观察GS-Rh2对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度GS-Rh2对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR)。结果MTT比色法测定显示,细胞经GS-Rh2作用后生长受抑制,呈剂量依赖性和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)为25.8μg/m l。结论GS-Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡。

临床检验基础理论教学中的体会及初探

临床检验基础作为医学检验专业基础课,学好本门课至关重要。如何能够让学生更好地掌握理论知识以达较好的教学效果,要注重教师的教态和谐的师德培养、创设问题情境、课前做精心教学设计、灵活运用多种教学方法及教师自身素质等多方面培养,以激发学生学习兴趣、培养学生主动学习和发散思维的能力,提高教师教学质量及教师的自身能力。

《临床检验基础》实验课考核评估方法的探讨

《临床检验基础》实验课质量的考核和评估,就是要科学的分析《临床检验基础》实验课教学在医学检验专业整个活动中的地位和对完成国家教育部规定的总培养目标所起的作用。通过对教师和学生的双向性考核和评估,树立典型、总结经验、提高教学质量、建立信息反馈、不断改进实验课的教学,提高全教研室总体实验课的教学水平。

Ad-IL-24抑制乳腺癌生长的体外实验研究

目的研究腺病毒介导的IL-24基因(Ad-IL-24)表达对乳腺癌的生长抑制作用。方法将扩增的Ad-IL-24腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用RT-PCR法、Westernblot法检测IL-24基因在肿瘤细胞中的转录和表达;MTT法和FCM检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制和凋亡率;半定量RT-PCR检测IL-24基因的表达对乳腺癌细胞的凋亡相关基因Bax、Bcl-2及Survivin转录的影响;ELISA法检测VEGF、Ang-1的分泌水平。结果IL-24基因可在MDA-MB-231细胞中成功转录及表达,并对乳腺癌细胞增殖有明显抑制作用,并能引起细胞凋亡,其凋亡机制可能与Bax/Bcl-2比值升高、Survivin降低有关;VEGF、Ang-1表达下降。结论腺病毒介导的IL-24基因在体外可明显抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长,诱导其凋亡,其机制可能与下调Survivin、VEGF、Ang-1,上调Bax的基因表达水平有关,该研究可为乳腺癌的基因治疗提供一定实验依据。