酸水解法提取柑橘皮果胶的工艺优化

采用酸水解法提取柑橘皮果胶。通过单因素实验探讨液料比、pH值、提取温度、提取时间等因素对果胶提取率的影响;在此基础上,以果胶提取率为评价指标,通过L16(45)正交实验确定最优提取工艺为:液料比20∶1(mL∶g)、pH值1.0、提取温度90℃、提取时间30min,在此条件下,果胶提取率可达18.93%。

一株产灵菌红素黏质沙雷氏菌的分离鉴定及其基因组分析

【目的】对甘蓝根际微生物进行分离,从中选择具有优良性状的菌株,对其次级代谢产物合成能力进行评估,为甘蓝根际微生物资源的发掘利用奠定基础。【方法】采集重庆市武隆区仙女山镇仙女山村甘蓝根,分离培养根际微生物菌株,从中选择一株黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),利用PacBio RS II平台和Illumina HiSeq平台完成全基因组测序,通过antiSMASH分析评估其合成次级代谢产物的潜力,采用Red/ET重组工程技术克隆目的基因簇并进行异源表达。【结果】从甘蓝根际分离鉴定到一株产灵菌红素的黏质沙雷氏菌,对其进行基因组测序及分析发现,基因组含有11个次级代谢产物生物合成基因簇,其中9个基因簇与已知化合物编码基因簇相似性较低,说明该菌具有产生多种新型次级代谢产物的潜力;HPLC分析和高分辨质谱检测鉴定了灵菌红素;克隆了灵菌红素生物合成基因簇,并在大肠杆菌中实现了异源表达;选择4种大肠杆菌常用启动子驱动灵菌红素基因簇的表达,发现rpoS启动子具有较好的效果。【结论】本研究从甘蓝根际分离得到一株产灵菌红素的黏质沙雷氏菌,完成了全基因组测序和分析,从中克隆得到灵菌红素生物合成基因簇,并成功在大肠杆菌中异源表达。

茎瘤芥根际一株产紫色杆菌素杜擀氏菌的分离鉴定及其基因组分析

【目的】对茎瘤芥根际微生物进行分离鉴定,分析微生物菌群构成,选择具有优良特性的菌株,评估其次级代谢产物合成能力,为茎瘤芥根际微生物多样性和菌种资源的挖掘利用奠定基础。【方法】采集重庆市涪陵区二渡村和邓家村的茎瘤芥根,分离培养根际微生物菌株,通过菌株形态观察和看家基因的序列分析,对菌株进行初步鉴定、归类和保存。选择具有优良性状的菌株,利用Pacbio RS II和Illumina HiSeq平台完成全基因组测序,通过antiSMASH分析评估其次级代谢产物合成潜力,克隆目的基因簇并进行异源表达和产物鉴定。【结果】分离得到256株微生物,初步鉴定120株;从中鉴定了一株产紫色杆菌素的杜擀氏菌BjR8,完成了基因组测序及分析,发现该菌基因组为一条环状染色体,全长7205593 bp,GC含量为64.67%,含有6241个编码基因。生物信息学分析发现基因组含有9个次级代谢产物生物合成基因簇,其中7个基因簇与已知化合物编码基因簇同源性较低,说明该菌具有产生多种新型次级代谢产物的潜力;克隆得到紫色杆菌素生物合成基因簇,并在变铅青链霉菌TK23中完成了异源表达。【结论】从茎瘤芥根际分离得到256株微生物,初步分析了茎瘤芥根际的微生物菌群构成;完成了一株产紫色杆菌素杜擀氏菌的基因组测定与分析,从中克隆了紫色杆菌素基因簇,并成功在链霉菌中实现异源表达。