利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼prkd1基因敲除品系

蛋白激酶D1 (protein kinase D1, PKD1;也称作PRKD1)是蛋白激酶家族成员之一,该家族由3种结构相关的应激激活酶组成,可调节机体多种生物学功能,主要涉及细胞增殖、分化、凋亡、免疫调节、心脏收缩、血管生成和癌症等,其中PRKD1与心脏肥大、收缩和缺血再灌注损伤的底物磷酸化有关。相关研究报道,先天性心脏病患者存在PRKD1基因突变,但其在心脏中的特异性功能和分子机制并未阐明。为了便于后期研究PRKD1基因在人类早期心脏发育的作用机制,本文拟利用CRISPR/Cas9技术构建斑马鱼prkd1基因敲除品系。首先,通过生物信息学网站筛选出两个最佳的基因敲除靶位点,合成相应靶位点的单链向导RNA (single guide RNA,sg RNA)和引物;然后,将两个靶位点的sg RNA进行体外转录,并将其与Cas9蛋白混合后共同注射到斑马鱼的1-细胞期;最后,对基因敲除后的F0、F1、F2及F3代斑马鱼的胚胎和成鱼进行有效性鉴定及表型观察。结果显示,靶位点附近出现了不同程度的碱基缺失;成功构建了F1代能够稳定遗传的prkd1基因敲除的3个亚系;与野生型相比, F3代纯合子胚胎表现出不同程度的心腔膨大、环化异常及心管线性化等畸形现象。综上可知,本研究利用CRISPR/Cas9技术成功构建了斑马鱼prkd1基因敲除品系,为进一步研究该基因在人类心脏发育中的特异性功能提供了有益参考,并为后期的先天性心脏病筛查和精准医疗提供了重要依据。

不同浓度1-甲基环丙烯处理对蓝莓贮藏品质的影响

为探究不同浓度1-甲基环丙烯(1-MCP)结合自发气调包装(MAP)对蓝莓冷藏期间保鲜效果的影响,以‘莱克西’蓝莓为试材,采后2 h内入预冷库,装入气调箱并对其进行0.5、1.0、1.5μL/L 1-MCP处理,冷链车运输96 h后入冰温库((-0.5±0.3)℃)贮藏,每10 d测定蓝莓的品质指标、生理指标和挥发性成分。结果表明:MAP结合3种浓度1-MCP处理均能延缓蓝莓果实硬度的下降,保持相对较高的花色苷、VC、可溶性固形物、可滴定酸含量,抑制呼吸峰值和乙烯生成速率。利用SPSS主成分分析得出各处理的保鲜效果排序为:MAP+1.0μL/L 1-MCP>MAP+1.5μL/L 1-MCP>MAP+0.5μL/L 1-MCP>MAP。在蓝莓贮藏过程中醛类(52.34%~86.13%)和萜类(7.26%~32.44%)是其主要挥发性成分,MAP+1.0μL/L 1-MCP处理的蓝莓果实能保持较高的醛类物质和萜类物质相对含量。综上,MAP结合1.0μL/L 1-MCP处理对蓝莓的保鲜效果最佳。

楮岛沙滩不同时间尺度变化特征与波能流密度相关性探讨

在波浪和水流的作用下,泥沙在不同时间尺度下的运动会引起沙滩的冲淤演变,对海岸资源有重要的影响。因此,了解沙滩季节性演变规律,并采取针对性的防护措施,是近岸沙滩亟须解决的问题。目前,现场观测是研究沙滩剖面冲淤演变的重要方法,通过沉积物组成、岸滩坡度及波浪动力的时空变化,了解沙滩剖面的变化特性,对于沙滩管理和海岸保护具有十分重要的意义。基于2017年9月—2019年11月在荣成楮岛南岸沙滩每个月采集一次的剖面数据,以及波浪动力数据,分别探究了沙滩在不同时间尺度下的变化特征,并对沙滩变化特征与波浪动力因素的相关性进行了探讨。研究发现:楮岛南岸沙滩形态变化具有较强的季节性特征,春季沙滩比较稳定;夏季沙滩受台风影响侵蚀严重,但在风暴过后的短时间内,沙滩泥沙恢复较快;冬季沙滩恢复速度逐渐减缓并趋于稳定。在夏季和冬季期间,波能流密度的向岸分量对楮岛南沙滩的演变产生重要作用,而且波能流密度向岸分量的均值(选取数据采集前15d的波浪条件参与计算)与沙滩体积的相关性最好,并给出了两者的线性拟合公式。

马铃薯主栽品种抗马铃薯金线虫鉴定及抗性分子标记检测

[目的]马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)是国际公认的重要检疫性有害生物,目前已在云南、贵州、四川3省7县(市)发生危害,产区内多个种薯基地受到传播威胁。通过西南地区马铃薯主栽品种对马铃薯金线虫的抗性鉴定、分子标记检测及田间抗性评价,明确已知抗病基因的分布情况,为该地区马铃薯金线虫应急防控、抗病品种合理布局和良种推广提供依据。[方法]利用云南马铃薯金线虫群体对15份马铃薯主栽品种进行室内盆栽接种,计算最终单株孢囊数和相对感病性,根据抗性等级划分标准进行抗性评价;同时利用57R和TG689分子标记鉴定抗马铃薯金线虫H1,以β-胡萝卜素羟化酶基因的BCH分子标记为对照;并于2020年和2021年在云南省昭通市开展两年度的田间试验,在播种前和收获后分别采集土壤样品并分离孢囊,计算播种前初始群体密度(Pi)、最终群体密度(Pf)及平均繁殖系数(Pf/Pi)。马铃薯现蕾至始花期测定株高,收获时测定产量。[结果]15个马铃薯主栽品种中的云薯505、宣薯5号、会薯15号、会薯19号以及云薯304共5个品种为高抗品种,马铃薯金线虫基本不能在这些品种上繁殖;丽薯6号、宣薯6号为中感品种;其余8个为高感品种,尤其是会-2、丽薯15号以及宣薯8号的平均繁殖系数高于感病对照品种会薯16号(Pf/Pi=17.15)。两个H1基因鉴定分子标记结果大致相同,5个马铃薯品种,即云薯505、宣薯5号、会薯15号、云薯304和宣薯6号含H1。马铃薯金线虫的繁殖系数在田间抗/感马铃薯品种上具有显著性差异,抗性等级为9的高抗品种田间平均繁殖系数在2021年(0.04-0.12)和2022年(0.05-0.14)均<1.00,表明高抗品种种植后线虫田间群体密度有一定程度的降低。高感品种平均繁殖系数在2021年(1.18-2.75)和2022年(1.76-3.24)均>1.00,高感品种种植后田间线虫种群数量增加。不同品种间株高和产量差异显著(P<0.05),5个高抗品种株高的均值在两年间均显著高于8个高感品种。宣薯5号、会薯15号和会薯19号产量最高,两年度分别为51.67-56.48和33.28-40.57 t·hm^(-2),会-2产量最低。[结论]西南混作区主栽马铃薯高抗品种对马铃薯金线虫具有优良抗性,主要携带H1抗病基因且能够显著减少田间马铃薯金线虫群体密度。高抗品种中宣薯5号、会薯15号和会薯19号为高产抗病良种,云薯304为富锌薯片加工型品种。亟待根据马铃薯金线虫的发生分布,进一步有针对性地扩大对主栽品种抗性水平的鉴定。

黄河流域先锋植物的生态价值和经济价值分析

黄河流域先锋植物不仅在生态保护中具有重要作用,同时也拥有广阔的经济应用前景。本文选取黄河上、中和下游区域的部分典型先锋植物,综合评估其在维持生态平衡、生物多样性及保持土壤等方面的生态价值,同时探讨了先锋植物作为饲料、药材和食物等可持续利用方面的潜在经济价值。结果表明,黄河流域分布的部分先锋植物,具有出色的耐盐碱、耐旱和抵御沙漠化的能力,在减少沙漠化、改善土壤侵蚀和盐碱化等方面发挥着重要的生态作用,同时其食用、药用和饲用等功能为当地经济发展提供了重要支撑。

感觉统合训练在智能迟缓患儿中的应用效果

目的:分析感觉统合训练在智能迟缓患儿中的应用效果。方法:选取2021年1月—2022年12月衡水市第五人民医院收治的智能迟缓患儿64例为研究对象,按照随机数字表法分为对照组和观察组,各32例。对照组采用常规康复,观察组在对照组基础上进行感觉统合训练。比较两组临床疗效及格塞尔发育量表、婴幼儿智能发育量表、中国-韦氏幼儿智力量表(C-WYCSI)评分。结果:观察组治疗总有效率高于对照组,差异有统计学意义(P=0.039);干预后,两组精细动作、适应性行为、语言、社交行为、大运动评分高于干预前,观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);干预后,两组婴幼儿智能发育量表及C-WYCSI评分高于干预前,观察组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:感觉统合训练在智能迟缓患儿中的应用效果显著,可以提高神经功能及智力发育水平,促进智能提高。

重视开展种植活动

幼儿园与小学的衔接阶段至关重要,这一时期,幼儿将从以游戏为主的幼儿园生活过渡到以学习为主的小学生活,因此,如何帮助幼儿顺利地完成这一过渡,是幼儿教育工作者需要深入思考的问题。种植活动作为一种实践性强的教育方式,对于幼儿的认知、情感、社会性以及身体发展都有着重要的影响。因此,本文旨在深入探讨种植活动在幼小衔接过程中的教育价值、原则与策略,以期为幼儿园教师的教育实践提供有益的参考。

斑马鱼prkd1基因在心脏早期发育过程中的作用研究

为了探究蛋白激酶D(protein kinase D,PKD;又名PRKD)家族典型成员prkd1基因对早期心脏发育的影响,选用模式动物斑马鱼为研究对象,设计了吗啉代反义寡核苷酸敲低实验。表型观察结果显示,prkd1基因敲低会导致斑马鱼心脏发育异常,出现心包水肿、环化异常、心管线性化等畸形表型;斑马鱼心率分析数据显示,与野生型斑马鱼相比,prkd1基因的敲低会导致早期斑马鱼心率降低。利用转录组高通量测序技术对受精后3 d(3 days post fertilization,3 dpf)的斑马鱼对照组和敲低prkd1组进行测序,差异基因富集分析表明,prkd1的敲低与心脏相关信号通路如心肌细胞的肾上腺素信号通路等显著相关。进一步通过qRT-PCR对高通量测序结果进行验证,并对早期心脏发育关键因子进行检测,结果显示,部分心血管相关基因显著下调,tbx5a、gata4等心脏调控关键基因同样显著下调。这些表明prkd1基因可能通过调控心脏发育相关信号通路以及心脏发育关键基因来影响早期心脏发育,在早期心脏发育过程中发挥重要作用。

马铃薯根系分泌物对马铃薯金线虫孵化和趋化的影响及外源酸类物质的验证

【目的】探究马铃薯不同抗性品种、不同生育期根系分泌物对马铃薯金线虫(Globodera rostochiensis)孵化和趋化的影响,为马铃薯金线虫绿色防控提供理论依据。【方法】收集4个马铃薯品种3个生育期的根系分泌物,采用浸泡法和滤纸片法研究根系分泌物对马铃薯金线虫孵化和趋化的影响;通过GC-MS分析各根系分泌物的组分;选用8种外源酸类物质咖啡酸、丁二酸、氢化肉桂酸、3-羟基丙酸、3-氨基-3-甲基丁酸、乙醇酸、硬脂酸、L-乳酸的标准品,运用浸泡法和滤纸片法验证根系分泌物中占比较大的主要酸类物质对马铃薯金线虫孵化和趋化的影响。【结果】感病品种青薯9号、会-2的根系分泌物比抗病品种宣薯6号、云薯505的根系分泌物刺激孵化快且孵化量大,在3个生育期(15 d(发芽期)、30 d(幼苗期)和55 d(块茎形成期)),感病品种根系分泌物的刺激孵化效果强于抗病品种,各品种30 d(幼苗期)的根系分泌物刺激孵化效果好于15 d(发芽期)、55 d(块茎形成期),青薯9号根系分泌物的刺激孵化率15、30、55 d依次为7.20%、27.30%、5.70%,会-2依次为10.50%、38.00%、9.40%,宣薯6号依次为5.40%、20.40%、16.30%,云薯505依次为13.20%、21.80%、3.10%。感病品种青薯9号的根系分泌物对马铃薯金线虫幼虫的吸引能力强;从3个生育期看,除了宣薯6号,其余3个品种15 d根系分泌物的吸引效果好于30、55 d,15、30、55 d的根系分泌物吸引率青薯9号依次为13.73%、9.68%、6.13%,会-2依次为5.65%、4.76%、4.89%,云薯505依次为4.86%、4.13%、2.91%,宣薯6号依次为4.11%、5.77%、6.47%。用GC-MS对根系分泌物进行分析鉴定,马铃薯根系分泌物中主要含有9类物质,其中酸类24种、氨基酸类13种、盐类5种、醇类3种、烃类3种、糖类3种、酚类2种、酮类1种、脂类1种,从种类和所占比例可知酸类、氨基酸类、酚类和醇类是供试马铃薯根系分泌物中的主要成分。选择8种代表性酸类物质验证表明,8种物质中丁二酸、3-羟基丙酸对马铃薯金线虫的孵化有显著影响,咖啡酸、氢化肉桂酸对马铃薯金线虫的趋化有显著影响。但与4个品种30 d根系分泌物对马铃薯金线虫的影响对比,上述影响显著的酸类物质刺激孵化效果显著低于根系分泌物,趋化则无显著差异。【结论】不同马铃薯品种的根系分泌物均对马铃薯金线虫孵化和趋化有较大影响,感病品种根系分泌物对马铃薯金线虫孵化、趋化的影响强于抗病品种,总体表现为抗病、感病品种对马铃薯金线虫的影响在根系出现时即播种15 d(发芽期)开始,在30 d(幼苗期)影响最强,到55 d(块茎形成期)影响减弱。马铃薯的根系分泌物种类多样,主要组分为酸类、氨基酸类和醇类,抗病、感病品种略有差异。丁二酸、3-羟基丙酸对孵化的影响显著,咖啡酸、氢化肉桂酸对趋化的影响显著,单一酸性物质对马铃薯金线虫孵化的影响显著小于根系分泌物。

斑马鱼wbp11基因敲除品系的建立

WBP11是WW结构域结合蛋白家族的一员,参与前体mRNA剪接过程,是重要的剪接因子。斑马鱼作为重要的模式生物之一,其基因组中含有人类WBP11的同源基因wbp11。为了研究WBP11在脊椎动物早期发育过程中的作用机制,利用CRISPR/Cas9技术构建了斑马鱼wbp11基因敲除品系。首先,在wbp11基因的第二个外显子上设计基因敲除靶位点,体外转录合成sgRNA,通过显微注射技术对斑马鱼进行基因敲除,得到F0代嵌合体斑马鱼。随后,将嵌合体斑马鱼与野生型斑马鱼杂交,所得到的F1代斑马鱼进行基因型鉴定,筛选出其中的杂合子斑马鱼,并对杂合子斑马鱼的缺失条带进行测序,结果显示其为wbp11基因的2种缺失突变。让同种突变的F1代杂合子斑马鱼自交,对得到的后代F2进行基因型鉴定,筛选获得了纯合子斑马鱼,表明wbp11基因敲除品系构建成功。经显微镜白光成像观察发现,受精后48 h的斑马鱼出现心包水肿、心脏线性化、骨骼弯曲畸形,这可能是由于wbp11基因突变引起剪接机制异常所导致的。此研究为探究WBP11基因在脊椎动物的早期发育中的作用机制开辟了道路。

全生命周期失效模式在海工装备资产管理中的应用

受国际油价市场低迷波动影响,部分海工装备订单被纷纷弃单。为推进改革应对市场变化,国资委组建国海海工资产管理有限公司(以下简称国海公司)。国海公司结合自身特点,对海工装备出租前、出租中、出租后等阶段进行风险识别,分析潜在风险因素。通过FMEA风险失效模式分析,确定了90项潜在失效模式,分析潜在原因,进行风险评价,并根据评价结果采取相应的风险处置措施。

一个人类新基因ZNF322的研究初报

利用果蝇心脏发育基因 zfh-1的 c DNA序列和计算机克隆方法 ,在 9号染色体上发现了一个新的人类同源基因 .经国际基因命名委员会批准 ,命名为 ZN F32 2 .该基因总长度约为 2 .8kb,为一个连续的序列 ,编码一个 4 0 2个氨基酸的蛋白质 ,与小鼠 zfp-35编码的蛋白质最相似 (同源度为 51 .4 % ) .该基因在人体肾、脑、结肠、胚胎心脏及黑色素瘤等多种组织中广泛表达 ,其功能有待深入研究 .

不同贮水材质容器中贮存水余氯衰减规律研究

为了研究水在贮存过程中,不同贮水材质对水中余氯衰减的影响,选取工程上常用的混凝土、不锈钢、玻璃钢、陶瓷和塑料五种材质贮水容器,分别在环境温度为22 ℃和31 ℃两种情况下,研究了不同材质贮水容器中贮存水余氯衰减规律。结果表明,一定温度下,五种材质贮水容器中贮存水余氯衰减系数由大到小为: K混凝土>K塑料>K玻璃钢>K不锈钢>K陶瓷,即混凝土容器中贮存水余氯衰减最快,其次分别是塑料容器、玻璃钢容器和不锈钢容器,陶瓷容器中贮存水余氯衰减最慢。

洁悠神防治急性放射性皮炎29例效果观察

目的评价洁悠神防治急性放射性皮炎的临床效果。方法58例接受放射治疗过程中出现急性放射性皮炎的头颈部恶性肿瘤患者随机分为两组,治疗组29例采用洁悠神治疗,对照组29例用冰片、滑石粉外敷,两组治疗时间均为6周。评价6周后治疗组与对照组2级及以上放射性皮炎的发生率。结果治疗组和对照组2级以上急性放射性皮炎的发生率分别为58.6%(17/29)和86.2%(25/29),治疗组与对照组差异有显著性(χ2=0.4179,P<0.05)。结论洁悠神可促进放射性皮肤损伤的愈合,能降低急性放射性皮炎的发病率。

肺动脉内隧道术治疗婴幼儿左冠状动脉起源于肺动脉:超声心动图随访

目的 探讨超声心动图评价肺动脉内隧道术治疗婴幼儿左冠状动脉起源肺动脉 (ALCAPA)疗效。方法 对 5例肺动脉内隧道术矫治ALCAPA患儿 ,于手术后出院前及门诊随访时行超声心动图检查。结果 全部患儿重建之左冠状动脉 /肺动脉内隧道通畅 ,左心室功能明显改善 ,射血分数显著增加 ,术后 2～ 3个月恢复正常。结论 肺动脉内隧道术可以显著改善ALCAPA患儿左心功能。超声心动图随访能够显示内隧道通畅情况、心功能恢复程度、并发症及术后残留异常。

禾本科8种牧草DNA条形码通用序列筛选

DNA条形码技术是利用DNA保守片段对物种进行快速准确鉴定的新兴技术。本研究根据GenBank中禾本科牧草matK和rbcL基因的核苷酸序列,设计4对通用引物,建立并优化了针对禾本科7个主要牧草属8种牧草11个样品[高丹草（Sorghum bicolor×S.sudanense）、玉米（Zea mays）、针茅（Stipa capillata）、＂贝克＂多年生黑麦草（Lolium perenne‘Plxie）、＂凯帝莎＂多年生黑麦草（L.perenne‘Caddieshack’）、甘肃羊茅（Festuca kansuensis）、＂百琪＂紫羊茅（F.rubra‘Bargena’）、＂梦神＂紫羊茅（F.rubra‘Maxima’）、＂百胜＂草地早熟禾（Poa pratensis‘Barvictor’）、＂钻石＂草地早熟禾（P.pratensis‘Diamond’）和芨芨草（Achnatherum splendens）]的目的片段的扩增条件。对扩增产物进行测序和分析,经分别比对,筛选出8种牧草的4个标记位点5’端和3’端保守序列。对各标记位点保守区内的核苷酸进行单核苷酸多态性（SNPs）的单倍型分析。结果表明,matK1、matK2、matK3分别有6个单倍型（H1^A、H1^B、H1^C、H1^D、H1^E和H1^F）、7个单倍型（H2^A、H2^B、H2^C、H2^D、H2^E、H2^F和H2^G）和3个单倍型（H3^A、H3^B和H3^C）,rbcL基因有5个单倍型（H4^A、H4^B、H4^C、H4^D和H4^E）。根据matK（matK1、matK2、matK3）和rbcL基因筛选的4个标记位点为8种牧草建立了相对应的特异DNA识别码。本研究可为混合禾本科牧草饲料中的高粱属、玉蜀黍属、芨芨草属、针茅属、黑麦草属、羊茅属和早熟禾属的8种牧草准确识别提供分子水平上的科学依据。

西葫芦新品种嫩玉的选育

嫩玉是以植株生长势强、光合效率高的自交系63-1为母本,以株型紧凑、耐寒、早熟的63-2为父本配制而成的。它适应于露地、保护地栽培。在节能日光温室冬季栽培,长势较强,叶色浓绿,抗逆性较强,耐弱光短日照,节成性好,高产、稳产,瓜直长筒形,瓜色淡绿,商品性好,在全国各地推广面积已达2万hm2以上。

原发性腹膜后肿瘤31例诊疗分析

目的：总结腹膜后肿瘤的临床特征以及与肾肿瘤的鉴别，提高腹膜后肿瘤诊治率。方法回顾性分析31例腹膜后占位患者的临床资料及治疗情况。结果本组患者手术治疗22例（肿瘤切除20例，无法切除2例），放弃治疗7例，放射治疗2例。随访时间1~60个月，患良性肿瘤的患者死于原发性腹膜后肿瘤1例；患恶性肿瘤的患者死亡10例。结论原发性腹膜后肿瘤病理成分复杂，以恶性为主，手术是腹膜后肿瘤的首选治疗方式。

双色FISH和DNA纤维FISH方法的建立与应用

在构建了含毛细胞白血病相关的结构性倒位inv(5)(p13.1q13.3)的细胞系后,为了确定该新建细胞系在建株过程中其倒位断裂点关键区遗传物质是否发生改变,以生物素或地高辛标记的cCI5-216和cCI5-267黏粒DNA为探针,进行染色体中期、间期和DNA纤维3种双色荧光原位杂交的分析。结果表明:该新建细胞系的3种双色荧光原位杂交结果,均与该细胞系的原代细胞的完全相同,证实了该细胞系倒位断裂点关键区的遗传物质结构未发生改变。该细胞系是揭示毛细胞白血病发病的分子机理的重要研究材料。

一个与果蝇心脏基因同源的人类新基因——WNT-17基因的研究初报

利用果蝇心脏发育基因Wg的cDNA序列 ,运用计算机克隆方法 ,发现了一个新的人类同源基因 ,命名为WNT 17.该基因总长度为 10kb ,有 4个外显子和 3个内含子 ,定位于染色体1p35 1～ 1p36 2 3之间 .其mRNA全长约 2kb ,编码一个 2 96个氨基酸的蛋白质 ,与小鼠Wnt 4编码的蛋白质高度相似 .该基因与Wnt基因家族成员具有相似的同源框序列 .