表达Osmotin蛋白的转基因马铃薯对晚疫病的抗性分析

将缺失Ｃ端信号肽序列的Ｏｓｍｏｔｉｎ基因和在第９６位氨基酸处发生琥珀突变的Ｏｓｍｏｔｉｎ基因置于ＣａＭＶ双３５Ｓ启动子驱动下，转化马铃薯，获得ＮＰＴＩ抗性植株。经对２０株ＮＰＴＩ抗性植株的Ｓｏｕｔｈｅｒｎ检测和对５５株ＮＰＴＩ抗性植株的Ｎｏｕｔｈｅｒｎ分析，证实了Ｏｓｍｏｔｉｎ基因的插入和转录。对２１株转Ｏｓｍｏｔｉｎ基因和１７株转琥珀突变Ｏｓｍｏｔｉｎ基因植株的抗病性测定，分别筛选出８株和１０株抗病性与非转基因植株有显著差异（α＝００５）的转基因植株。对８株转Ｏｓｍｏｔｉｎ基因植株的ＤｏｔｂｌｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交分析，证明Ｏｓｍｏｔｉｎ蛋白胞外分泌能够赋予转基因植株叶片抗晚疫病的能力，研究结果暗示Ｏｓｍｏｔｉｎ蛋白具有抑菌活性的部位可能位于其Ｎ端。

我国芥菜型油菜品种遗传多样性初探

用RAPD技术对包括春、冬芥菜型油菜及国外品种在内的36个芥菜型油菜品种的遗传多样性进行了分析。在扩增得到的128条DNA带中,多态性DNA片段达88.28%。分析表明:春、冬油菜间遗传差异较大,国内冬性芥菜型油菜地方种多样性水平较高,25份冬性品种分属Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类群,而春性芥菜型油菜地方种均归于Ⅳ类;印度的RLM198与四川的珙县金黄油菜、澳大利亚品种与我国春油菜品种亲缘关系密切。

中国甘薯病毒的血清学检测

作者用4种甘薯病毒抗体(IgG),3种血清学方法(DAS-ELISA、Dot-blot-ELISA和ISEM)对北京,江苏、四川、山东四省(市)的253份甘薯病毒病样品进行了检测。结果表明:上述地区甘薯中普遍存在甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和甘薯潜隐病毒(SPLV),尚难确定是否存在甘薯轻斑驳病毒(SPMMV)和甘薯花叶菜花叶状病毒(Sweet Potato Caulimo-like Virus,SPCLV)。21%的显症样品同上述4种病毒的抗血清不产生反应,显示我国甘薯上尚存在其它病毒。用Dot blot-ELISA和ISEM检测甘薯病毒比用DAS-ELISA灵敏准确。

甘薯病毒病的研究Ⅰ甘薯羽状斑驳病毒的分离、鉴定

本文从寄主范旧,蚜传特性、病毒颗粒形态、免疫电镜等方面对嫁接获得的甘薯羽状斑驳病毒廊坊分离物(SPFMV—LF)进行了鉴定,并和SPFMV—RC(美国株)进行了实验比较。SPFMV—LF易汁液摩擦传播和嫁接传播,并以蚜虫非持久性传播,SPFMV—LF系统侵染巴西牵牛(Ipomoea setosa)、牵牛(I.nil);不侵染Chenopodium quinoa、C.ama-ranticolor、Nicotiana benthamiana及其它烟草。尚未发现其局部斑寄主。SPFMV—LF及SPFMV—RC感染I.setosa后引起相似的症状,但感染I.nil后症状差别较大。病毒颗粒长860—830nm,经两次蔗糖垫超速离心从SPFMV—LF感染的I.setosa叶片提取病毒并在BALB/C小鼠中制备抗SPFMV—LF的腹水多克隆抗体,免疫电镜表明,SPFMV—LF的抗体和SPFMV—RC株系有反应。上述实验结果表明SPFMV—LE是SPFMV的一个株系,但不同于SPFMV—RC。

Harpin蛋白基因的克隆及序列分析

以梨火疫病细菌基因组ＤＮＡ为模板，通过合成５′－端及３′－端一对特异引物，利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增获得ｈａｒｐｉｎ蛋白基因。将其克隆到Ｅ．ｃｏｌｉ质粒上进行序列分析。结果表明：基因由１１５５个核苷酸组成，编码３８５个氨基酸残基组成的多肽。与发表序列相比较，核苷酸序列及推导出的氨基酸序列的同源性分别为９９．３１％和９８．９６％。

甘薯病毒及类似病毒病害

近十年来,发现甘薯种性退化比较严重,导致块根产量降低。退化的原因除去无性变异等外,病毒及类似病毒病的危害也是重要因素之。病毒引起马铃薯退化已是众所周知,而引起甘薯退化尚未引起足够的重视。 甘薯是我国四大主要的粮食作物之一,也是食品工业、轻工业和饲料工业的重要原料。我国甘薯种植面积达8000万亩。

分泌抗甘薯羽状斑驳病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株构建及抗体初步应用

甘薯羽状斑驳病毒(Sweet Potato Feathery Mottle Virus,SPFMV),粒体条状,长800—850nm,不仅通过甘薯块根传播,而且被多种蚜虫非持久性传播,在世界甘薯产区均有发生,引起甘薯叶片明脉,脉带。褪绿斑及紫色羽状纹等症状,是我国甘薯产区的主要病毒之一。

植物抗菌物病害的遗传工程研究进展

The genetic engineering for plant resistance against fungal diseases has been promoted by the molecular genetic studies of plant\|pathogen interactions in last few years.This article reviewed the progress made in this aspect.The genes utilized included that of pathogenesis related proteins (PRPs),thaumatin\|like proteins (TLPs),ribosome inactivation proteins (RIPs),plant defensins,plant thonins,phytoalexin,Inhibitor of fungal hydrolysase,mediating production of reactive oxygen species (ROS) and hypersensitive response (HR).

R-Avr基因互作介导的植物抗病性

Ｒ－Ａｖｒ基因互作介导的植物抗病性李汝刚范云六伍宁丰李茂林（中国农业科学院生物技术研究中心，北京１０００８１）植物在整个生长发育周期中面临着种类繁多的病原微生物袭击，但真正能引起植物病害的病原并不多，这表明植物能抵抗大多数病原微生物袭击，表现非亲合性...

用于检测马铃薯X病毒HB株系的单克隆抗体的研制

经诱导耐受性免疫、细胞融合及克隆化培养,建立了2类6株稳定分泌抗马铃薯X病毒(PVX)株系特异性高滴度的单克隆抗体(McAb)小鼠杂交瘤细胞系。间接DAS—ELISA测定表明:Ⅰ类细胞系(1—6G8,1-7E8,2—5G9)分泌的抗体只与PVX—HB和PVX—c反应,Ⅱ类细胞系(1-6F1,1-9C11,1—9C8)分泌的抗体与测试的5个株系均有反应,但当用病毒直接包被ELISA板时,Ⅲ类抗体同PVX—C不产生反应。因此将两类单克隆抗体配合使用可鉴别诊断PVX—HB株系。用辣根过氧化物酶(HRP)对McAb1—7E8进行了标记并成功地以DAS—ELISA法检测。这两类能鉴别诊断PVX—HB株系的抗体对马铃薯抗病品种的选育、无病毒种薯的生产及进口种苗的检测都是相当有用的试剂。

分子标记在苹果品种鉴定中的应用

本文报道了应用随机扩增多态性DNA(RAPD)标记鉴定苹果‘Fuji’品种的芽变和实生苗植株的结果。17个10核苷酸随机引物用于扩增6个品种的基因组DNA,共产生150条DNA片段。其中9个引物产生了18条多态性DNA片段,将6个品种分成2组。第一组包括‘Fuji’,‘Red Fuji’,和‘Nagafu Fuji’;第二组则包括‘Senshu Fuji,‘Flava Fuji’和‘Ultraearli Fuji’。在每一组样品之间观察不到任何变异。结果表明:(1)RAPD能区分开芽变与实生苗植株,但检测不到芽变株之间的遗传变异;(2)‘Senshu Fuji’,‘Flava Fuji’和‘Ul-traearli Fuji’具有一致的基因型,可能是同一实生苗的无性繁殖后代。

乙酰乳酸合成酶基因在芸苔属栽培种内的遗传变异

利用乙酰乳酸合成酶（ａｃｅｔｏｌａｃｔａｔｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＡＬＳ）基因开发抗除草剂的转基因植物引起了植物分子生物学家的广泛兴趣。了解农业上重要物种中ＡＬＳ基因的结构、组织、功能及其遗传变异是十分必要的。在芸苔属植物中，ＡＬＳ基因以多基因家族的形式存在。本研究采用ＰＣＲ技术试图：１）揭示ＡＬＳ基因在芸苔属３个栽培种（Ｂｒａｓｉｃａｒａｐａ，Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ和Ｂ．ｎａｐｕｓ）间的遗传变异；２）确定在种、亚种和品种３个水平上ＡＬＳ基因变异的分布；３）评价利用由ＡＬＳ基因产生的遗传标记区分Ｂ．ｎａｐｕｓ品种的可行性。研究表明，ＡＬＳ基因在芸苔属亚种间和品种间存在广泛的遗传变异，但遗传变异的程度在不同的种内各有不同；在亚种水平上，Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ种内的遗传变异比Ｂ．ｎａｐｕｓ种内的遗传变异低，但比Ｂ．ｒａｐａ种内的遗传变异高；在Ｂ．ｎａｐｕｓ品种间发现了相当大的遗传变异，表明ＡＬＳ基因可用于区分Ｂ．ｎａｐｕｓ的品种。

马铃薯X、Y病毒的单克隆抗体及其在马铃薯病毒检测上的应用

1 前言晚疫病、环腐病、黑茎病、青枯病及病毒病是危害我国马铃薯生产的5种主要病害。其中病毒病发生最普遍,自70年代以来一直是困扰我国马铃薯生产的主要因素,引起马铃薯的退化,大幅度降低产量,马铃薯X病毒(PVX)。

北京引致大丽菊花叶症的三种病毒

大丽菊(Dahlia pinnata Cav. )花叶病已成为花卉生产出口的严重障碍。作者于1986—1987年在表现花叶的北京大丽菊上分离到两种形态大小不同的病毒分离物,电镜检测到一直径较大的球形病毒,分别定为BDM—1、BDM—2和BDM—3。经寄主反应、体外抗性、粒体形态、血清学等鉴定,病毒分离物BDM—1是黄瓜花叶病毒CMV;BDM—2是烟草花叶病毒TMV;BDM—3是大丽菊花叶病毒DaMV。从寄主反应、粒体大小、衣壳蛋白氨基酸组份及沉降特性综合分析看,BDM—1可能是CMV的另一株系CMV—DP。

感染大丽菊花叶病毒的大丽菊细胞超微结构观察

本文描述了大丽菊花叶病毒(DaMV)感染大丽菊叶片细胞的超微结构变化。受侵细胞内形成切面直径约1.6—3.1μm的球状或卵球状缅胞贡内含体。病株细胞内过氧物酶体的数量显著增加。内含体周围较细胞其它部位有较多的核糖体。高尔基体及微泡。叶绿体,线粒体正常。

中国甘蓝型油菜遗传多样性的RAPD分子标记

本文利用ＲＡＰＤ方法和统计学分析，对我国７省市和国外引进的总计４０份甘蓝型油菜品种的遗传多样性进行了研究。结果表明，４０个品种的甘蓝型油菜存在着广泛的遗传变异，根据ＲＡＰＤ指纹图谱，通过在ＤＮＡ分子水平上的聚类分析可以将它们分为３大类群，反映出这些品种之间的亲缘关系，并对如何引进甘蓝型油菜资源进行了初浅的讨论。

我国部分白菜型油菜RAPD的研究

本研究用ＲＡＰＤ技术和统计学方法，对以湖南和湖北省油菜为主的３４个白菜型油菜品种的遗传多样性进行了分析。根据离差平方和，用Ｗａｒｄ’ｓ聚类方法进行聚类。结果表明：白菜型油菜的遗传变异与生态地理分布有密切的关系；湖南和湖北两省的白菜型油菜品种存在广泛的遗传变异；在ＤＮＡ水平上可将所分析的３４个品种分成８个类群。作者对研究结果在遗传育种中的应用进行了讨论。

表达Harpin_(Ea)基因的转基因马铃薯的晚疫病抗性分析

通过根癌农杆菌介导 ,用HarpinEa基因转化马铃薯四倍体栽培种大西洋 (Atlantic) ,获得 10 7个马铃薯转化株系。经过卡那霉素的抗性鉴定和PCR分子检测 ,有 5 9株PCR检测成阳性 ,占所有转化植株的 5 5 14 % .实验对部分转基因植株进行室内抗病性评价 ,从 2 4个PCR阳性株系中筛选到 9个株系的抗病性与对照相比有显著差异 (P <0 0 5 ) ,其中 7株的抗病性与对照相比差异极显著 (P <0 0 0 1)。结果初步表明HarpinEa基因已整合到马铃薯的基因组中并得到表达 ,提高了植株的晚疫病抗性。

甘薯羽状斑驳病毒cDNA探针的克隆及其应用

从表现病毒症状的甘薯叶片中直接提取甘薯羽状斑驳病毒(sweet Potato Feathery Mo-ttle Virus,SPFMV),用酚-SDS-蛋白酶 K 法提取 SPFMV RNA,以 Oligo(dT)作引物合成cDNA。以质粒 pUC19为载体,转化 E.coli DH5α,筛选出插入片段长度为1.9kb 的阳性克隆,以此制备探针,与 SPFMV(RC 株)感染的巴西牵牛(Ipomoca setosa)和牵牛(I.nil)叶片总核酸抽提液进行斑点杂交呈阳性反应。^(32)P 和生物素标记的 cDNA 探针杂交试验均得到理想结果。