人CD34分化抗原转录调控序列的克隆与调控表达

目的 :克隆有特异调控活性的人CD34基因 5′端转录调控序列。方法 :根据已知的CD34抗原基因 5′ 端启动子调控序列 ,自行设计 2对引物 ,用巢式 PCR方法从染色体DNA中成功的克隆 6 6 1bp长度的CD34抗原转录调控序列 (CD34TRS) ,CD34TRS片段插入启动子报告质粒 pEGFP 1,观察重组质粒pCD34EGFP在造血系细胞和非造血系细胞中的调控表达作用。结果 :经限制性内切酶酶切鉴定及DNA序列分析证实 ,克隆的CD34启动子序列与文献报道的顺序基本一致 ,能特异调控EGFP基因在造血细胞系细胞K5 6 2中表达。结论 :所克隆的人CD34分化抗原转录调控序列有特异调控真核基因表达作用 ,本研究为构建造血干细胞特异性表达载体奠定了基础。

人骨髓基质干细胞克隆的培养及其向神经元样细胞的定向诱导分化

目的探讨人骨髓基质干细胞克隆的体外长期培养方法及其生物学特性。方法贴壁生长的基质干细胞以套环法消化分离,扩增培养,待细胞融合,传代培养。检测细胞的生长曲线、表面标记、克隆形成能力和向神经元定向诱导分化的潜能。结果克隆培养的骨髓基质干细胞能传代20代以上,表达CD13、CD29、CD59,不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR;传代17代时能诱导分化为神经元样细胞。结论该培养条件能有效扩增骨髓基质干细胞,并保持分化潜能;克隆来源的骨髓基质细胞有相同的生物学特性。

酵母PHO81基因上游调控序列的初步研究

ＰＨＯ８１基因的表达受无机磷酸盐浓度的调控，属阻遏型基因。利用本组构建的ＰＨＯ８１－ＬａｃＺ融合基因，对ＰＨＯ８１基因５＇上游核苷酸序列作限制性内切酶缺失分析。以β－半乳糖苷酶的活力表示ＰＨＯ８１的表达水平，测定上游长度不同的变种表达ＰＨＯ８１基因的水平，提示ＰＨＯ８１基因起始密码上游可能存在着两个ＵＡＳ功能区。

Tju103和CTLA4-Ig诱导MHC半相合小鼠骨髓移植耐受比较

目的:观察Tju103和CTLA4-Ig各自对MHC半相合小鼠骨髓移植免疫耐受的诱导。方法:半相合供鼠T细胞与受鼠抗原、Tju103(或CTLA4-Ig)共育后与骨髓细胞混合移植,观测移植后受情况。结果:A.单纯照射组:全部小鼠于照射后11d内死于造血衰竭;B.白血病CTX治疗组:全部小鼠于接种白血病细胞后16～23d死于白血病;C.单纯移植组:全部小鼠于移植后21d内死于移植物抗宿主病(GVHD);D.CsA预防组:5只小鼠于移植后8～22d死亡,1只死于白血病,各有2只死于GVHD和感染,5只活过30d;E.Tju103处理组:4只小鼠于移植后9～26d死亡,2只死于GVHD,各有1只死于白血病和感染,6只活过30d;F.CTLA4-Ig处理组:2只小鼠于移植后17～26d死亡GVHD,8只活过30d。结论:Tju103和CT-LA4-Ig均明显延长生存期,降低GVHD发生和严重程度,CTLA4-Ig保留有抗感染和移植抗白血病(GVL)作用,而Tju103没有。

用于造血干细胞基因治疗的逆转录病毒载体

造血干细胞是理想的血液疾患基因治疗靶细胞,具有整合功能的逆转录病毒是应用最广泛的基因转移载体。从莫洛尼小鼠白血病病毒衍生的逆转录病毒载体(MLV)对人造血干细胞转染效率低、不能长期稳定表达,已成为开展造血干细胞基因治疗的障碍。本文就提高基因转移效率、改进MLV载体特性和研究新的逆转录病毒载体等几方面的进展作一综述。

化疗联合单倍体淋巴细胞输注治疗难治性白血病

背景与目的:常规化疗治疗难治性白血病的缓解率低于50%,增加化疗强度常因严重并发症导致患者死亡,我们既往的研究表明单倍体淋巴细胞在体外具有较强杀伤白血病细胞效应。本研究旨在观察常规化疗联合经7.5Gyγ射线照射的单倍体淋巴细胞输注治疗难治性白血病的效果和不良反应。方法:16例难治性白血病患者在化疗后,当白细胞降至最低时平均输注1×108/kg(0.8～1.2×108/kg)经7.5Gyγ射线照射的单倍体淋巴细胞,观察难治性白血病的缓解率和单倍体淋巴细胞输注的不良反应。结果:13例难治性急性非淋巴细胞白血病经该治疗后,11例达完全缓解,2例达部分缓解。3例难治性急性淋巴细胞白血病患者,2例完全缓解,1例无效。全组16例患者的总缓解率为81.2%。单倍体淋巴细胞输注后患者感觉良好,无一例长时间骨髓抑制,无输注相关的移植物抗宿主病。结论:化疗联合单倍体淋巴细胞输注可以提高难治性白血病的缓解率,减少化疗引起的并发症。

异基因MHCⅠ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响

目的 :观察异基因MHCⅠ修饰对骨髓细胞的免疫学特性的影响 ,探讨MHCⅠ类分子在诱导免疫耐受中的作用机制。方法 :由逆转录病毒载体pMSCV介导 ,将BALB C小鼠的MHCⅠ类分子H 2Dd 基因导入C5 7BL 6小鼠的骨髓细胞 ,流式细胞仪检测转染后基因的表达。MTT法检测混合淋巴细胞反应 ,乳酸脱氢酶释放法测定BALB C小鼠NK细胞对H 2Dd 修饰后C5 7BL 6小鼠骨髓细胞的杀伤活性。结果 :重组逆转录病毒感染的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞对BALB C小鼠脾细胞的刺激强度或应答程度 ,与未转染和空载体病毒感染的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞相比都显著减弱。BALB C小鼠NK细胞对转染H 2Dd 基因后的C5 7BL 6小鼠骨髓细胞的杀伤显著降低。结论 :在骨髓移植中用受者MHCⅠ分子修饰供者骨髓细胞可能诱导免疫耐受。

酵母PHO81基因与酸性磷酸脂酶家族中其他基因的关系

为阐明酵母ＰＨＯ８１基因与酸性磷酸脂酶（ＡＰａｓｅ）家族中其他基因的相互关系，用已构建的ＰＨＯ２、ｐＨＯ８５、ＰＨＯ５、ＰＨＯ１１及ＰＨＯ８１基因与半乳糖音酶基因（ＬａｃＺ）的重组质粒对野生型酵母菌和ＰＨＯ２、ＰＨＯ８５、ＰＨＯ８１等调控基因突变株分别转化，以β－半乳糖苷酶的活力表示各基因的表达水平，分析这些调控基因对其它基因表达的影响。结果表明，ＰＨＯ８１基因对结构基因的表达起着正调控作用。调控基因ＰＨＯ２、ＰＨＯ８５的表达不受ＰＨＯ８１基因的影响，而ＰＨＯ８１基因的表达却受前者的调控。在低磷条件下，ＰＨＯ２基因的突变使ＰＨＯ８１表达水平下降７倍，ＰＨＯ８５的突变则使ＰＨＯ８１呈构成型高效表达。

Th1、Th2样细胞因子对CD158^+细胞比率的调节作用

目的:观察Th1、Th2样细胞因子对外周血CD158+细胞比率的调节作用,为寻找干细胞移植免疫耐受的方法提供论理依据。方法:将Th1样细胞因子(IL-2、IFN-γ)和Th2样细胞因子(IL-4、IL-6),单独或联合与人外周血单个核细胞(PBMC)培养72h,用流式细胞法分析总CD158a+、CD158b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞亚群中CD158a+、CD158b+细胞的比率。结果:①细胞因子对CD3+、CD4+、CD8+细胞及CD16+ CD56+细胞的影响:IL-2和IFN-γ均可增加上述细胞的百分率(P<0.05),但IL-2的作用大于IFN-γ(P<0.05)。IL-2+IFN-γ联合处理的效应高于IFN-γ单独处理(P<0.05)。IL-4+IL-6可降低上述细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4对上述细胞百分率的影响,高于IL-4(P<0.05)但低于IL-2(P<0.05)。②细胞因子对CD158a+/b+细胞的影响:IL-2可增加总的CD158a+/b+细胞及CD3+、CD4+、CD8+和CD16+ CD56+细胞中的CD158a+/b+细胞的百分比率(P<0.05);IL-2+IFN-γ可增加CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但与IL-2单独处理无明显区别,IL-4+IL-6可降低CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05)。IL-2+IL-4可增加总的CD158a+/b+细胞及各亚群中CD158a+/b+细胞的百分率(P<0.05),但低于IL-2单独处理(P<0.05)。结论:IL-2有促进CD158基因表达或使CD158a+、CD158b+?

人自然杀伤细胞抑制性受体P58.2基因克隆与鉴定

目的 :P5 8.2基因克隆与鉴定。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增自然杀伤细胞抑制性受体P5 8.2基因全长cDNA ,经酶切后构建重组克隆载体 ,双酶切和测序鉴定。结果 :RT -PCR获得了预期的扩增产物P5 8.2全长cDNA ,成功构建了 pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体 ,酶切、酶谱分析与预期结果相符。DNA测序结果与GenBank登记的人P5 8.2cDNA全长碱基序列一致。结论 :pSPORT1-P5 8.2重组克隆载体构建成功 ;P5 8.2基因序列与文献报道一致 ,为下一步构建表达载体和基因转染等工作打下良好的基础。

Tju103和CTLA4-Ig诱导T淋巴细胞免疫耐受的比较(英文)

目的观察比较Tju103和CTLA4-Ig分别调节、诱导T淋巴细胞免疫耐受的作用。方法用经丝裂霉素处理的异基因正常BALB/c(H-2d)小鼠巨噬细胞做耐受诱导原,分别用Tju103和CTLA4-Ig体外训导、调节C57BL/6(H-2d)小鼠T淋巴细胞,通过增殖效应(单向混合淋巴细胞反应,MLR)和杀伤效应(MTT法),考察经训导的C57BL/6小鼠T淋巴细胞分别对BALB/c小鼠和CBA(H-2k)小鼠脾细胞以及EL9611(H-2d)红白血病细胞的增殖效应和杀伤效应的改变。结果经Tju103调节后,C57BL/6小鼠T淋巴细胞对BALB/c和CBA小鼠脾细胞以及EL9611红白病细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显,未能诱导对已接触抗原(BALB/c小鼠)产生特异性免疫耐受。经CTLA4-Ig孵育后,C57BL/6小鼠T淋巴细胞对这三种细胞的增殖反应和杀伤效应抑制作用明显;对已接触抗原呈现免疫耐受,而对第三种抗原(CBA小鼠)和EL9611白血病细胞保持反应性。结论在特异抗原存在下,Tju103和CTLA4-Ig均能明显抑制异基因小鼠T淋巴细胞增殖反应性和杀伤效应,但Tju103诱导非特异免疫抑制,而CTLA4-Ig诱导特异免疫耐受,更适合于诱导移植免耐受。

人p58.2重组逆转录病毒载体的构建及稳定包装细胞系的鉴定

目的 构建并鉴定携带人p5 8 2基因的重组逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法 用PCR技术从pSPORT1-p5 8 2扩增出编码p5 8 2N端 1～ 3 45个氨基酸的全长基因 ,定向克隆入逆转录病毒载体pMSCVneo中 ,酶切鉴定 ;脂质体法将重组逆转录病毒转入包装细胞系PT67,G418筛选建立稳定产病毒的细胞株。结果 双酶切鉴定 ,成功构建重组逆转录病毒载体 ;重组逆录病毒载体转入包装细胞 ,经G418筛选 ,形成了抗性克隆 ,并测得病毒滴度为 3×10 5cfu/ml,提示构建携带人p5 8 2基因的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系成功。结论 构建人p5 8 2基因的逆转录病毒载体可行 。

论木斋、宇文所安古诗研究对台湾国文教学的影响

古诗起源及其形成与发展,是否如同传统文学史所言,大约是东汉中后期无名氏文人所作,在木斋先生《古诗十九首与建安诗歌研究》与宇文所安《中国早期古典诗歌的生成》二本古诗研究相关著作问世后,这个概念濒临重组或解构的挑战。

TJU103联合CTLA4-Ig对T细胞表型和分泌细胞因子的影响

本研究应用HLA半相合供、受者间单向混合淋巴细胞培养 (MLC )体系 ,体外检测了联合应用TJU10 3和CTLA4 Ig对供者T细胞增殖以及表型和分泌细胞因子的影响。结果显示 ,单独应用TJU10 3和CTLA4 Ig均能够降低T细胞的增殖活性 ,二者联合应用具有明显的协同抑制增殖效应 ,并能够使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,Th1型细胞因子 (TNF α ,IFN γ )分泌减少 ,Th2型细胞因子 (IL 4 )分泌增加。提示TJU10 3和CTLA4 Ig联合应用能够阻断供者T细胞激活的抗原和共刺激双信号通路 ,抑制T细胞的增殖活性 ,使CD4 + CD6 9+ /CD8+ CD6 9+ 比值降低 ,并能够调节Th细胞分化 ,诱导Th细胞免疫偏离 ,使辅助性T细胞更多地向Th2细胞方向分化 ,可以作为一条预防临床HLA半相合造血干细胞移植重度移植物抗宿主病 (GVHD )

BALB/c小鼠MHCI类基因的克隆与逆转录病毒载体的构建

目的 构建BALB/c小鼠MHCI类分子的逆转录病毒表达载体。方法 用RT -PCR从BALB/c小鼠脾细胞基因组中扩增BALB/c小鼠MHCI类分子H -2Dd的编码基因 ,克隆于载体pGEM -T中。经EcoRI和XhoI双酶切后 ,亚克隆于逆转录病毒载体pMSCV ,构建pMSCV -H2Dd重组逆转录病毒表达质粒 ,并进行酶切和序列测定鉴定。结果 用EcoRI和XhoI双酶切鉴定证实 ,H -2Dd基因正确插入载体pMSCV。H -2Dd的编码基因经序列测定证实 ,与文献报道完全一致 ,阅读框架与设计相符。结论 成功构建BALB/c小鼠MHCI类分子编码基因的逆转录病毒载体 。

细胞免疫激活对杀伤细胞抑制性受体(KIR)P58^+细胞的影响

本研究的目的是观察细胞免疫激活对P5 8基因表达的影响 ,探讨免疫激活与抑制的相互调节关系 ,为临床干细胞移植后的移植物抗宿主病 (GVHD)防治提供理论依据。用IL 2 ,膜抗原 (LP)和ConA分别或联合与人外周血单个核细胞培养 72小时 ,流式细胞术分析单个核细胞中总P5 8.1+ ,P5 8.2 + 细胞及CD3+ ,CD4 + ,CD8+ 和CD16 + CD5 6 + 细胞亚群中的P5 8.1+ 和P5 8.2 + 细胞比率变化。结果发现 ,IL 2 ,LP和ConA分别均可使CD3+ ,CD4 + ,CD8+ 和CD16 + CD5 6 +细胞比率增加 (P <0 .0 1) ,IL 2 ,LP和ConA联合与人外周血单个核细胞培养 72小时有协同刺激P5 8基因表达的作用 (P <0 .0 5 )。结论 :IL 2 ,LP和ConA均可在激活细胞免疫的同时刺激P5 8基因表达或P5 8.1+ 和P5 8.2 + 细胞增殖 ,表明P5 8基因的表达受免疫激活因子调控 ,存在激活诱导表达机制。

MHCⅠ类基因逆转录病毒表达载体的构建及其在造血细胞中的表达

目的构建BALB/c小鼠MHCⅠ类基因的逆转录病毒表达载体并探讨该基因在C57BL/6小鼠造血细胞中的表达。方法由逆转录病毒载体pMSCV介导,将BALB/c小鼠的H-2Dd基因导入C57BL/6小鼠的造血细胞中,并用逆转录聚合酶链反应和流式细胞仪检测转染后基因的表达。结果用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定证实,H2Dd基因正确插入载体pMSCV。重组逆转录病毒感染的C57BL/6小鼠造血细胞整合了BALB/c小鼠的H2Dd基因,且能转录为mRNA,在其细胞膜上有H2Dd分子的表达。结论成功构建小鼠H-2Dd编码基因的逆转录病毒载体,该基因已稳定地整合进C57BL/6小鼠造血细胞的基因组内,且在细胞中得到表达。

体外人骨髓基质细胞克隆培养及分化特性的研究

目的:探讨人骨髓基质细胞(BonemarrowstromLcells,MSCs)克隆方法的有效性及其向神经干细胞(Neuralstemcells,NSCs)的定向分化的潜性。方法:贴壁生长的MSCs以套环法消化分离,扩增培养,流式细胞仪检测细胞的表面标记,应用维甲酸诱导向神经干细胞分化。结果:克隆培养的MSCs能够传代扩增,它们表达CD13、CD59、CD29,而不表达CD11、CD14、CD31、CD34、CD45、CD80、CD86、CD117、HLA-DR,并能诱导分化为NSCs。结论:该培养条件能有效扩增MSCs,并保持分化潜能。

血小板内皮细胞粘附因子基因多态性与冠心病的关系

目的观察血小板内皮细胞粘附因子(PECAM-1)在Leu125Val、Ser563Asn位点的基因多态性与冠心病之间的关系。方法将经心电图、心肌酶谱和冠状动脉造影检查确诊的156例病人作为冠心病组,同期住院经冠状动脉造影检查无冠脉病变的75例患者作为对照组,应用聚合酶链反应和限制性内切酶方法检测PECAM-1基因的多态性。结果冠心病组和对照组PECAM-1基因Leu125Val、Ser563Asn位点的基因型和等位基因分布均有显著性差异(P<0.05)。结论PECAM-1基因的多态性与冠心病的发病有明显相关性,可能是冠心病的遗传危险因素。