应用淤胆血清“病理微环境”从ESC中筛选肝干细胞的研究

目的:探讨淤胆血清"病理微环境"培养体系诱导胚胎干细胞(ESC)向肝细胞分化的效果及对肝干细胞的筛选作用。方法:将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养,使其自发分化为拟胚体,加入FGF-4和HGF初步诱导,然后置于5%淤胆鼠血清"病理微环境"筛选培养液中继续培养2周,然后进行细胞形态学观察,ALB和CK8/18免疫荧光染色,电镜检查和吲哚氰绿(ICG)摄取试验。结果:经初步诱导分化的ESC置于5%淤胆血清"病理微环境"筛选培养液中培养,初期细胞生长受抑制,部分细胞坏死、凋亡并脱落。1周左右可见上皮样细胞集落呈优势生长。2周左右可见较多肝细胞样集落形成单位(H-CFU),大部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞,呈现较好的均质性,从中央到周边呈逐渐分化成熟的趋势;免疫荧光染色显示ALB和CK8/18表达;电镜检查可见与肝细胞相似的超微结构;吲哚氰绿(ICG)摄取试验可见大量ICG阳性细胞,提示这些细胞具备部分肝细胞特性,且筛选诱导组ICG阳性率显著高于对照组(P<0.05)。结论:采用含淤胆血清的"病理微环境"培养体系从经FGF-4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞样细胞。

小儿卵巢肿瘤56例临床分析

目的总结小儿卵巢良恶性肿瘤病理特点,以血清AFP作为指标评价治疗效果及预后。方法回顾性分析本院2005年至今手术治疗56例卵巢肿瘤患儿的肿瘤病理特点、肿瘤与年龄的关系以及治疗前后血清AFP值的变化(按良恶性分组并进行组间及组内比较)。结果 56例患儿中,年龄最小4个月,最大17.6岁;良性39例,恶性17例;良性肿瘤中,以卵巢成熟性畸胎瘤(20/39)及囊肿(19/39)多见;恶性肿瘤中,以卵巢未成熟性畸胎瘤(6/19)发病率高。恶性组血清AFP值术前或术后总体AFP值均显著高于良性组(P<0.01)。良性组手术前后血清总体AFP值的变化无统计学意义(P>0.05),而恶性组术后血清总体AFP值较术前下降,差异有统计学意义(P<0.01)。结论小儿卵巢肿瘤中良性者发病率高于恶性;血清AFP值可能作为良恶性鉴别及评估手术疗效的临床指标。手术是有效治疗小儿卵巢肿瘤、改善恶性卵巢肿瘤患儿预后的重要方法。

miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟

目的:通过miRNA-122(miR-122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞,观察及评估其是否能推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法:采用丁酸钠、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松(Dex)联合序贯诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞,然后利用Gateway技术构建出pAV.Ex1d-CMV>miR122/IRES/eGFP重组腺病毒表达载体,使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞,获得稳定高表达miR-122的细胞后继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化;使用real-time RT-PCR检测肝特异性基因的表达;免疫荧光检测肝特异性蛋白表达水平;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR-122后,细胞在形态学上更接近成熟肝细胞;肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、α1抗胰蛋白酶、葡萄糖-6-磷酸酶、细胞角蛋白8、胆固醇7α-羟化酶及细胞色素P450 3A4的mRNA表达均增高;肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高,而甲胎蛋白表达降低;吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR-122后肝细胞功能较对照组明显增强。结论:丁酸钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞;miR-122能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。

腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿胃十二指肠穿孔的临床疗效比较

目的比较腹腔镜与传统开腹手术治疗小儿胃十二指肠穿孔的临床效果,探讨腹腔镜治疗的优势。方法将我院收治的50例胃十二指肠穿孔患儿按照随机数字表法分为观察组和对照组各25例,观察组采用腹腔镜治疗,对照组采用传统开腹治疗,比较两组患儿治疗及手术过程中的各项指标,术后视觉模拟评分(VAS)、并发症发生情况及患儿家属满意度。结果两组手术时间差异无统计学意义(P>0.05)。术后2h和4h两组患儿视觉模拟评分(VAS)差异无统计学意义(P>0.05),术后12h和24h观察组患儿VAS评分低于对照组(P<0.05)。观察组住院时间、术后肛门首次排气时间、手术中出血量均低于对照组,术后并发症发生率亦低于对照组,患儿家属满意度高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论与传统开腹手术比较,腹腔镜手术治疗小儿胃十二指肠穿孔有利于患儿术后恢复,降低了手术风险,术后并发症少,且伤口小,可减轻小儿疼痛感,住院时间也相对减少,更符合现在的临床治疗。

影响肝母细胞瘤儿童术后生存的因素分析

目的分析影响肝母细胞瘤儿童术后生存期的网素。方法选择2003年1月～2010年3月于术治疗的肝母细胞瘤患儿76例，进行定期随访，统计术后5a生存率，并分析其影响因素。结果本组肝母细胞瘤儿童术后5a生存率为48．68％（37H6）；在≤2岁、血清LDH水平〉240U／L、m清CRP水平〉10mg/L患儿，5a生存率分别为46．15％、35．90％、37．84％，明显低于〉2岁、血清LDH水平≤240U／L、血清CRP水平≤10mg，L患儿（分别为54．16％、62．16％、58．97％）；血清AFP水平〉10000μg/L患儿5a生存率为10．71％，明显低于〈100μg/L、100～10000μg/L患儿的68．75％、71．88％；PretetⅠ期、Ⅱ期、Ⅲ期患者5a生存率分别为80％、55．56％、8．33％，病理分型胎儿型、胚胎型、混合型分别为60．98％、44．44％、23．53％，5a生存率均依次减低，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；血清AFP水平、Pretext分期、病理分型是影响肝母细胞瘤儿童术后生存期的独立危险因素（OR1=4．223，OR2=5．826，OR3=9．342，P〈0．05）。结论肝母细胞瘤儿童术后5a生存期仍较低，血清AFP水平、Pretext分期和病理分型是需要重点考虑的问题。

不同水压在超声引导下灌肠治疗小儿肠套叠的效果观察

目的探讨超声引导下不同水压灌肠治疗小儿肠套叠的临床疗效。方法将我科收治的148例肠套叠患儿按照随机数字表法分对照组和观察组各74例,对照组在X射线引导下行空气灌肠治疗,观察组采用超声引导下不同水压灌肠治疗,比较两组患儿的治疗效果。结果观察组复位成功率(97.30%)显著高于对照组(78.38%),复位平均用时、并发症发生率、复发率均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论超声引导下不同水压灌肠治疗小儿肠套叠具有较高的复位成功率,且具有复位用时较短、并发症少、复发率低的优点。

小儿腹部包块伴腹痛1例

患儿女,7岁,因＂反复腹痛7d＂入院,入院后患儿无发热,无恶心呕吐,饮食二便好。入院查体：神清语利,营养中等,心肺未见异常,腹部平坦,腹软,脐部右侧腹部有压痛,未扪及明显包块,无局部反跳痛及肌紧张,肠鸣音正常,未闻及血管杂音,肝脾未扪及。入院血常规：WBC：7.38×109/L,NEU：

超声引导下生理盐水灌肠复位治疗小儿肠套叠的临床价值研究

目的:探讨超声引导下生理盐水灌肠治疗小儿肠套叠的临床疗效及价值。方法:将我院收治的124例肠套叠患儿按照随机数字表法分为超声组和X线组各62例,超声组采用超声引导下生理盐水灌肠治疗,X线组采用X射线引导下行空气灌肠治疗,比较两组患儿的治疗效果。结果:超声组复位成功率为93.55%,X线组复位成功率为88.71%,两组之间差异没有统计学意义(P>0.05);超声组(67.42%)复位用时<30 min的患儿比例明显高于X线组(27.27%),超声组(1.72%)复位用时为60~90 min的患儿比例明显低于X线组(9.09%),超声组(25.68%)复位用时间为30~60 min的患儿比例与X线组(41.82%)组没有差异,超声组(1.72%)复位用时间为>90 min的患儿比例与X线组(9.09%)没有差异。超声组复位时间少于X线组,差异具有统计学意义(Z=-4.49,P<0.01)。两组患儿复位后复发率比较,超声组(6.90%)明显低于X线组(27.27%),差异具有统计学意义(χ~2=8.38,P<0.05)。结论:超声引导下生理盐水灌肠治疗小儿肠套叠不仅具有较高的复位成功率,且具有耗时少、无放射损害、复发率低的优点,同时还能为临床提供更多的治疗依据。

成人尿道下裂37例治疗体会

目的总结成人尿道下裂治疗的经验。方法 2010年10月至2012年1月收治的37例16～41岁成人尿道下裂患者,其中11例为初治患者,26例为再手术患者,幼年时经过一次或者多次手术后出现各种并发症或正在进行分期手术。所有患者均行手术矫治,术后随访3～15月。结果 37例患者中13例术后出现并发症,发生率为35.1%。11例初始患者中有3例出现并发症,发生率为27.2%;26例再手术患者中有10例出现并发症,发生率为38.5%;其余患者均获得较好外观及功能。结论尽管成人尿道下裂与儿童尿道下裂治疗在手术步骤和方法上相同,但最终结果却有很大差异。多次手术的患者更易出现各种并发症。在成人尿道下裂治疗中应更加重视围手术期的处理。

不同超声显像小儿阑尾炎治疗结果分析

目的分析不同超声显像小儿阑尾炎的治疗结果。方法将我院收治的121例小儿急性阑尾炎患儿按照超声检查结果分为阳性组77例和阴性组44例组,分析临床特点及治疗结果。结果学龄前及学龄期(<12岁)患儿中超声阳性组和阴性组阑尾炎保守治疗有效率分别为3.8%和34.5%,(P<0.01);青春期(≥12岁)患儿中超声阳性组和阴性组分别为4%和60.0%,(P<0.01)。性别和发病年龄对超声诊断率的影响差异无统计学意义(P>0.05)。结论术前无创超声检查可以做为诊断小儿阑尾炎常规辅助检查手段,同时也对手术或保守治疗提示参考。诊断评估结合超声影像学检查结果可以帮助提高临床小儿阑尾炎保守治疗率及降低阴性阑尾切除率。

小鼠miR-122重组慢病毒载体的构建和鉴定

目的构建携带miR-122的重组慢病毒表达载体,为研究miR-122的功能和作用机制奠定基础。方法从小鼠基因组DNA采用PCR法扩增出pre-miR-122基因,测序后克隆至pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP逆转录病毒载体上,测序鉴定,病毒包装后,转染NIH3T3细胞,并通过绿色荧光蛋白进行病毒滴度测定。将重组慢病毒感染肝前体细胞(HPCs),利用实时定量PCR检测miR-122的表达。结果重组慢病毒载体pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP经PCR扩增及测序鉴定正确,并得到了滴度为(1～5)×106IU/mL的病毒液。pCDH-CMV-miR-122-EF1-copGFP感染的肝前体细胞中miR-122表达显著增强。结论成功构建了小鼠miR-122重组慢病毒,并在肝前体细胞中高效表达出miR-122,为进行miR-122的功能和机理奠定了良好的基础。

急性肠梗阻患儿血清乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、白细胞与高敏C反应蛋白的表达及临床意义

目的分析急性肠梗阻患儿血清乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(ALP)、白细胞(WBC)与高敏C反应蛋白(hsCRP)在手术及非手术治疗前后表达情况,并探讨其临床意义。方法回顾性总结分析我院(2016年11月至2019年12月)66例患儿(33例手术治疗组及33例非手术治疗组)急性肠梗阻患儿在治疗前后血清LDH与ALP、WBC与hsCRP的表达。结果手术组与非手术组相比,治疗前LDH、ALP和hsCRP的差异具有统计学意义(P<0.05),WBC差异无统计学意义;治疗后LDH差异有统计学意义(P<0.05),ALP、hsCRP与WBC差异无统计学意义(P>0.05)。结论LDH、ALP与hsCRP结果都可以反映急性肠梗阻患儿的病情严重程度;相比ALP,LDH与hsCRP检查结果能够更好地评估急性肠梗阻患儿病情。

小儿美克尔憩室的诊断及治疗分析

目的探讨小儿美克尔憩室的术前诊断及手术治疗结果。方法回顾性分析64例手术病理证实为美克尔憩室患儿术前高锝酸盐及超声检查差异,便血与病理的关系,术后并发症情况。结果术前34例行99 m Tc-高锝酸盐放射性核素扫描显像,64例行超声检查,阳性率分别为55. 88%与67. 18%,差异无统计学意义(P> 0. 05)。便血组与未便血组患儿术后异位胃黏膜组织病理检查阳性率分别为87. 80%与30. 43%,差异有统计学意义(P <0. 05),腹腔镜与开腹手术术后并发症差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论 99 m Tc-高锝酸盐放射性核素显像与超声是小儿美克尔憩室诊断的重要检查方法;异位胃粘膜组织与患儿便血密切相关;美克尔憩室患儿手术后恢复普遍较好,并发症少。