栽培一枝蒿粗多糖混合口蹄疫疫苗乳化方法及稳定性分析

旨在探究栽培一枝蒿粗多糖(cultivated Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP)协同ISA-206油乳剂通过比较不同乳化方法与口蹄疫灭活抗原(inactivated foot-and-mouth disease viral antigen,FMD-Ag)制备FMD疫苗的效果异同,并观察不同储存条件对FMD疫苗稳定性的影响。通过搅拌和超声乳化分别制备不同疫苗组合,皮下免疫ICR小鼠后检测FMD特异性抗体及T细胞亚群比例。将搅拌乳化的不同疫苗组合在4、25℃条件下放置30、180 d后免疫ICR小鼠,检测体液和细胞免疫水平分析其稳定性。结果显示:与商品化FMD疫苗相比,搅拌和超声乳化制备的CARCP单独或协同ISA-206油乳剂的FMD疫苗组的特异性IgG水平和CD3^(+)CD4^(+)、CD3^(+)CD8^(+)T细胞比例无显著性影响(P>0.05)。4℃放置30、180 d后,与商品化FMD疫苗相比,CARCP单独或协同ISA-206油乳剂的FMD疫苗组的IgG水平和CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)CD44^(+)、CD8^(+)CD44^(+)T细胞比例无显著性差异(P>0.05)。25℃放置30、180 d后,与商品化FMD疫苗相比,免疫动物后FMD-Ag+ISA-206抗体水平及T细胞亚群比例显著降低(P<0.05),而FMD-Ag+ISA-206+CARCP抗体水平及T细胞亚群比例无显著性差异(P>0.05)。搅拌和超声乳化制备的不同FMD疫苗组合的抗体水平和T细胞水平的免疫效果没有差异;不同储存条件下,CARCP能够增强FMD疫苗的稳定性,这些研究结果为CARCP多糖佐剂的研究提供试验依据。

延长腺相关病毒递送药物的半衰期提高治疗效果

延长基于蛋白质治疗药物的半衰期可以提高药物疗效。然而,基因治疗本质上是长期表达所需的治疗性药物,药物半衰期对基因治疗疗效的影响尚不清楚。在这项腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)基因治疗研究中,通过与免疫球蛋白G1(immunoglobulin G 1,IgG1)可溶性单体Fc区(soluble monomeric IgG1 fragment crystallizable,sFc)或Fc区融合,设计了几种能够延长半衰期的蛋白质。研究表明,延长AAV递送的小分子双功能蛋白和成纤维细胞生长因子21(fibroblast growth factor 21,FGF21)的半衰期显著增加了它们在血液循环中的浓度。此外,AAV递送FGF21延长其半衰期使2型糖尿病动物模型中肝损伤和血糖显著降低,并改善了葡萄糖耐量和胰岛素敏感性。这些结果证明了延长药物半衰期的基因治疗在应对人类疾病中的治疗潜力。

栽培一枝蒿粗多糖佐剂增强口蹄疫疫苗的皮下免疫效果

旨在评价新疆栽培一枝蒿粗多糖(cultivated Artemisia rupestris L.crude polysaccharides,CARCP)对口蹄疫灭活疫苗(foot and mouth disease vaccine,FMDV)的免疫佐剂活性,确定多糖佐剂的有效性。选用不同剂量的CARCP与FMDV配伍,通过皮下途径免疫ICR小鼠。采用间接ELISA检测FMDV特异性抗体水平,流式细胞仪检测免疫后小鼠脾和淋巴结中T细胞亚群,以及脾中树突状细胞表面分子和调节性T细胞的表达情况。每周称量小鼠体重,观察免疫后小鼠的生长状况。结果表明,与FMDV单独免疫对照组相比,中剂量和高剂量的CARCP可以诱导产生更高水平的FMDV特异性IgG、IgG1和IgG2a(P<0.01)。中剂量的CARCP显著增加小鼠脾和淋巴结中CD4、CD8、CD44 T细胞百分比(P<0.05)。同时,中剂量的CARCP可以显著促进脾树突状细胞CD86和MHC-II分子的表达(P<0.05),并显著下调CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)T细胞水平(P<0.05)。CARCP对免疫后小鼠生长和体重无显著影响(P>0.05)。综上表明,CARCP作为FMDV佐剂可以促进DC成熟,抑制调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)表达,增强FMDV特异性的体液和细胞免疫应答,具有良好的佐剂效果,为口蹄疫灭活疫苗多糖佐剂的开发提供一定的研究基础。

新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖皮下免疫对流感病毒疫苗的免疫效果

目的探讨新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖（wild Cistanche deserticola Y．C.Ma crude polysaccharides，WCDCP）配伍流感病毒疫苗（influenza virus vaccine，IVV）的免疫增强作用。方法将低、中、高3个剂量的WCDCP分别与0.5 μg的IVV配伍，皮下免疫ICR小鼠，以0.9%NaCl为空白对照组，单独免疫0.5 μg的IVV为无佐剂对照组，铝佐剂（Alum）为阳性对照组。免疫2次，初免后14 d加强免疫，观察小鼠生长状况。间接ELISA法检测IgG抗体滴度及抗体分型IgG1和IgG2a，MTT法检测淋巴细胞增殖，流式细胞术检测CD3＋CD4＋、CD3＋CD8＋、CD4＋CD44＋和CD8＋CD44＋T细胞的表达水平。结果WCDCP对各组小鼠生长状况无显著影响（P〉0.05）；各剂量组均可以提高IgG抗体水平（P〈0.05），且中剂量组为最优剂量组，与铝佐剂组相当；可以提高IgG1和IgG2a的抗体水平（P〈0.05）；增强淋巴细胞增殖（P〈0.05）；显著提高CD3＋CD4＋和CD3＋CD8＋T细胞的表达水平（P〈0.01）；显著提高CD4＋CD44＋和CD8＋CD44＋T细胞的表达水平（P〈0.01）。结论WCDCP可以显著提高流感病毒疫苗的体液免疫应答和细胞免疫应答，尤其可以提高T细胞的免疫水平，且具有一定的安全性。

新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖免疫增强活性比较

目的比较新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖（wild/cultivate Cistanehe deserticola Polysaccharids, WCDPS/CCDPS）的免疫增强效果。 方法不同剂量（低、中、高）的WCDPS和CCDPS与卵清蛋白（ovalbumin，OVA）皮下共免疫ICR小鼠，ELISA法检测OVA特异性抗体IgG及抗体亚型IgG1和IgG2a，MTT法检测OVA特异性的淋巴细胞增殖活性，流式细胞术检测CD4＋ T细胞和CD8＋ T细胞的表达水平。结果WCDPS和CCDPS均能够显著提高OVA特异性抗体IgG及抗体分型IgG1和IgG2a的表达水平（P〈0.05），且WCDPS和CCDPS相同剂量之间差异无统计学意义（P〉0.05）；WCDPS和CCDPS能显著促进OVA特异性的淋巴细胞增殖，且相同剂量之间差异无统计学意义（P〉0.05）；WCDPS和CCDPS也能显著提高CD4＋T和CD8＋T细胞的百分含量（P〈0.05），且相同剂量之间差异无统计学意义（P〉0.05），WCDPS和CCDPS对免疫后的小鼠体重没有影响。结论WCDSP和CCDPS均能显著增强OVA特异性的体液和细胞免疫应答，两者之间差异无统计学意义，并具有较好的安全性。

新疆野生一枝蒿粗多糖作为佐剂的免疫调节活性研究

目的探讨新疆野生一枝蒿粗多糖(WARCP)作为卵清白蛋白(OVA)疫苗佐剂肌肉免疫小鼠的增强效果。方法将ICR小鼠按随机数字表法分为6组(每组5只):9 g/L NaCl组(空白对照组)、OVA组(10μg OVA)、低剂量WARCP/OVA组(OVA+50μg WARCP)、中剂量WARCP/OVA组(OVA+200μg WARCP)、高剂量WARCP/OVA组(OVA+400μg WARCP)、铝佐剂/OVA组(阳性对照组,OVA+100μg Alum)。肌肉注射免疫小鼠,免疫后称量小鼠体质量,采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清中的IgG及IgG1和IgG2a抗体水平,流式细胞术检测小鼠脾脏和淋巴结中的T细胞亚群。结果中剂量WARCP/OVA组可增强IgG、IgG1水平(均P<0.05),提高早期抗体水平;中剂量WARCP/OVA组和高剂量WARCP/OVA组可明显增强IgG2a水平(均P<0.05),且与Alum/OVA组相比差异均无统计学意义(均P>0.05)。低剂量WARCP/OVA组可提高小鼠脾脏CD4^+T细胞和淋巴结中CD4^+T、CD8^+T、CD4^+CD44^+T细胞比例;中剂量WARCP/OVA组和高剂量WARCP/OVA组可提高小鼠脾脏CD4^+T、CD8^+T、CD4^+CD44^+T、CD8^+CD44^+T细胞和淋巴结中CD8^+CD44^+T细胞比例,差异均具有统计学意义(均P<0.05);且WARCP免疫对小鼠体质量(均P>0.05)和生长无影响。结论植物来源的WARCP作为OVA蛋白疫苗佐剂可增强细胞免疫和体液免疫,且安全可靠,为WARCP的推广应用提供了理论依据。

新疆野生和栽培一枝蒿粗多糖免疫调节活性的稳定性分析

目的研究储存温度和储存状态对新疆野生一枝蒿粗多糖(WARCP)和新疆栽培一枝蒿粗多糖(CARCP)免疫调节活性的影响,探究WARCP与CARCP的最佳储存条件。方法将WARCP和CARCP分别于不同温度(4℃、-20℃和-80℃)和不同状态(粉末和溶液)下储存6个月。然后以不同剂量(10、50、100μg/ml)的WARCP和CARCP分别体外刺激小鼠骨髓树突状细胞(DCs)24 h,脂多糖(100 ng/ml)作为阳性对照,RPMI-1640培养基作为阴性对照,采用流式细胞术检测DCs表面分子CD40和CD86的表达情况。结果粉末状态的WARCP、CARCP与溶液状态的WARCP分别于不同温度下(4℃、-20℃和-80℃)储存,其免疫调节活性差异均无明显统计学意义(均P>0.05);一定剂量的溶液状态CARCP分别于-20℃和-80℃下储存,其免疫调节活性明显优于4℃下储存(均P<0.05)。结论储存6个月后WARCP与CARCP的免疫调节活性均不受储存状态的影响,且在不同储存温度下均能保持良好的免疫调节活性。

富含多糖肉苁蓉水提物对T细胞亚群及抗体持久性的影响

目的研究新疆栽培荒漠肉苁蓉水提物(aqueous extracts of cultivated Cistanche deserticola Y.C.Ma in Xinjiang,AECCD)对小鼠T细胞应答和抗体持久性的影响,探讨其对小鼠的免疫增强作用。方法选取ICR雌性小鼠60只(共两批小鼠,每批30只),每批随机分为6组,每组5只,分别将低、中、高3个剂量的AECCD配伍模式抗原卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)为实验组,0.9%NaCl为空白对照组,OVA单独免疫组为阴性对照组,铝佐剂(aluminium adjuvant,Alum)作为阳性对照组,肌肉免疫2次,间隔2周。采用流式细胞术检测T细胞亚群、细胞因子及树突状细胞(dendritic cells,DC)表面分子的表达水平;间接ELISA法检测小鼠血清中的IgG抗体水平。结果AECCD能够显著增强脾细胞中CD4+、CD8+T细胞亚群的比例(P<0.05),显著提高CD4+CD44+和CD8+CD44+效应性T细胞的表达水平(P<0.05);促进T细胞IFN-γ的分泌,也能够促进DC表面分子CD40和CD80的表达水平(P<0.05);ELISA检测结果表明高剂量AECCD可以显著提高OVA诱导的IgG抗体表达水平的持久性(P<0.05)。结论AECCD能增强OVA蛋白诱导的T细胞免疫应答,保持抗体的持久性,从而提高机体的免疫应答水平。

新疆栽培荒漠肉苁蓉粗多糖肌肉免疫对OVA蛋白免疫效果的影响

目的 探讨新疆栽培荒漠肉苁蓉粗多糖（cultivated C. deserticola crude polysaccharides,CCDCP）作为模式抗原卵清白蛋白（ovalbumin,OVA）佐剂的免疫增强作用.方法 将低、中、高3 个剂量的CCDCP 分别配伍OVA 蛋白,肌肉免疫小鼠,免疫2 次,间隔2 周,阳性对照为铝佐剂组,ELISA法检测小鼠血清中的IgG 及其分型IgG1、IgG2a 抗体的表达水平;MTT 法检测脾细胞增殖;并观察免疫后小鼠的生长状况.结果 高剂量CCDCP 组在免疫后7 d 就可以显著提高IgG 的水平（P〈0. 05）,在免疫后的21 d 和28 d 可极显著提高IgG 的抗体水平（P〈0. 01）,与铝佐剂组相比差异有统计学意义（P〈0. 05）;高剂量CCDCP 组可以显著提高IgG1 和IgG2a 的抗体水平（P〈0. 05）,与铝佐剂组相当;中剂量和低剂量的CCDCP 显著增强脾细胞的增殖水平（P〈0. 05）,与铝佐剂组相比差异有统计学意义（P〈0. 01）;CCDCP 对小鼠体重的影响差异无统计学意义（P〉0. 05）.结论 CCDCP 作为OVA 蛋白的佐剂能够增强Th1 型和Th2 型的免疫应答,尤其可以诱导早期抗体的产生和Th1 型的免疫应答,为CCDCP 作为疫苗佐剂的研究提供参考.

新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖对OVA诱导小鼠免疫应答的影响

目的探讨新疆野生荒漠肉苁蓉粗多糖(WCDCP)对卵清白蛋白(OVA)诱导小鼠免疫应答的影响。方法将42只ICR小鼠按随机数字表法分为7组(每组6只):9 g/L NaCl组(空白对照组)、WCDCP组(400μg WCDCP)、OVA组(10μg OVA)、低剂量WCDCP/OVA组(100μg WCDCP+10μg OVA)、中剂量WCDCP/OVA组(400μg WCDCP+10μg OVA)、高剂量WCDCP/OVA组(800μg WCDCP+10μg OVA)、铝佐剂/OVA组(阳性对照组,200μg铝佐剂+10μg OVA)。采用两点注射于小鼠后腿肌内进行免疫,共免疫2次,初次免疫后间隔2周加强免疫1次。分别于初次免疫后7、14、21、28 d称量小鼠体质量,观察小鼠体质量和生长状态变化,并采用间接酶联免疫吸附测定法检测小鼠血清IgG抗体及抗体分型水平。初次免疫后21 d,采用噻唑蓝法检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖水平,流式细胞术检测小鼠脾脏和淋巴结中的T细胞亚群比例。结果初次免疫后7 d,高剂量WCDCP/OVA组的血清IgG抗体水平(0.5976±0.1107)明显高于OVA组(0.2544±0.0748)(P<0.05)。初次免疫后28 d,高剂量WCDCP/OVA组的血清IgG、IgG1和IgG2a抗体水平均高于OVA组(0.9723±0.2438比0.3892±0.0774,1.1560±0.0884比0.6126±0.0597,1.6480±0.1039比0.5572±0.1815),差异均具有统计学意义(P<0.05,P<0.001,P<0.001)。高剂量WCDCP对刀豆蛋白A和脂多糖诱导的脾脏细胞增殖均具有明显的促进作用(P<0.001,P<0.05)。高剂量WCDCP/OVA组小鼠脾脏中的CD3+CD8+T和CD3+CD4+T细胞比例明显高于OVA组[(10.83±0.44)%比(6.76±0.58)%,(28.17±1.67)%比(19.17±2.73)%],差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。WCDCP对小鼠体质量(均P>0.05)和生长无影响。结论WCDCP可增强OVA抗原的体液免疫反应和细胞免疫反应,且对小鼠生长无不良反应,是一种安全有效的候选疫苗佐剂。