构建重组枯草芽孢杆菌催化制备D-对羟基苯甘氨酸

目的:在Bacillus subtilis中表达异源D-海因酶基因(hyd)和D-氨甲酰水解酶基因(adc),构建重组细胞作为催化剂,用于生产D-对羟基苯甘氨酸(D-HPG)。方法:构建hyd表达质粒,考察培养基中二价金属离子对D-海因酶活性的影响。过表达acoR基因,考察AcoR蛋白胞内水平与P_(acoA)-hyd基因拷贝数的关系。筛选表达adc基因的启动子,构建hyd和adc基因共表达质粒,考察双酶活性菌株的催化特性。结果:成功构建了海因酶表达质粒pHPS和pUBS,培养基中添加0. 8mmol/L的MnCl_2·4H_2O,使168N/pUBS菌株的D-海因酶活性达到956U/gDCW。整合表达P_(cdd)-acoR基因,使LSL02/pUBS菌株的D-海因酶活性达到1 470U/gDCW。单拷贝P_(AE)-adc基因的表达水平相对最高。双酶共表达质粒pUBSC被成功构建,菌株LSL02/pUBSC的最适催化温度为40℃～45℃,催化活性能够持续12h,当底物起始浓度为20g/L时,反应12h生成的D-HPG达到14. 32g/L,转化率达到95%,收率超过80%。结论:构建具有D-海因酶和D-氨甲酰水解酶双酶活性的重组Bacillus subtilis作为全细胞催化剂,用于海因酶法生产D-HPG,具有技术上的可行性和优势。

化脓性胆管炎病原学检查及药物敏感性研究

目的了解化脓性胆管炎胆汁中致病菌及抗生素的敏感性,为临床合理选用抗生素提供依据。方法对2003年5月～2005年6月病原菌培养阳性的64例胆汁标本及药敏试验结果进行统计分析。结果64例标本培养出80株细菌,其中革兰阴性杆菌占68.5%;革兰阳性球菌占31.5%。13例为混合感染。其中大肠埃希菌占48.6%,肠球菌占20.5%,葡萄球菌占10.0%,克雷白杆菌占12.4%,肠杆菌占7.5%。细菌对青霉素类、头孢类、喹诺酮类、大环内酯类敏感性有所下降。对亚胺培南、万古霉素保持相当高的敏感性。对氨基糖苷类抗生素仍保持较高的敏感性,尤其对革兰阴性杆菌。结论化脓性胆管炎细菌群不断改变。药物敏感性普遍下降。建议治疗化脓性胆管炎时应合理使用抗生素。