供者源性的骨髓间质干细胞对急性移植物抗宿主病的影响

目的 :采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞 (MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病 (GVHD)的影响。方法 :体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞 ,扩增至第 5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型 (F344→Wistar)。受者Wistar大鼠采用致死性全身照射预处理 ,当天移植F344大鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组则移植F344大鼠骨髓细胞、脾细胞和第 5代的MSCs。观察各组移植后急性GVHD的发生时间、发病率和存活时间。结果 :共移植MSCs推迟急性GVHD的发病时间 [( 19 1± 1 7)dvs( 15 6± 1 5 )d ,P <0 0 5 ],延长该组的存活时间 [( 35 6± 7 0 )dvs ( 2 5 4± 6 0 )d ,P <0 0 5 ],但无法完全消除急性GVHD的发生。结论 :MSCs在体内具有免疫抑制功能 ,供者来源的MSCs在不使用免疫抑制剂情况下 。

中性粒细胞抑制人单个核细胞释放TNF-α及其机理的研究

目的 :探讨人中性粒细胞 (PMNs)对人外周血单个核细胞 (PBMCs)释放TNF -α的影响及其作用机理。方法 :采集健康供血者的新鲜外周静脉血 ,以葡聚糖沉淀和密度梯度离心法分离其PMNs和PBMCs ,将PMNs细胞与PBMCs细胞按 2 :1的数量比与脂多糖共同培育后 ,分别采用酶联免疫吸附法测定培养上清的TNF -α浓度 ,并用流式细胞术测定结合荧光标记脂多糖的单核细胞的百分率及单核细胞表面平均荧光强度。结果 :PMNs在细菌脂多糖刺激下不释放TNF -α,PMNs可以抑制PBMCs释放TNF -α ,其抑制作用具有细胞特异性 ;经多聚甲醛固定的PMNs仍具有上述的抑制作用。流式细胞术结果显示PMNs并不影响单核细胞与脂多糖结合。结论 :PMNs可抑制人PBMCs释放TNF -α ,其机理可能是PMNs干扰脂多糖激活PBMCs的信号转导过程 ,抑制细菌脂多糖对其的活化 ,从而下调TNF

树突状细胞诱导T细胞免疫耐受的机理

DC是一类专职的抗原呈递细胞 ,不仅具有强大的免疫应答诱导能力 ,而且能够通过多种机制诱导T细胞产生抗原特异性免疫耐受 ,这些机制包括诱导T细胞无能、专职地释放免疫抑制性细胞因子、介导T细胞的克隆清除、诱导和募集调节性T细胞和诱导免疫偏离。DC诱导免疫耐受机制研究的深入必将为DC的临床应用提供更坚实的基础。

经皮撬拨手法复位夹板外固定治疗高龄Barton骨折的临床疗效探究

目的探讨经皮撬拨手法复位夹板外固定治疗高龄Barton骨折的临床疗效。方法90例高龄Barton骨折患者,根据治疗方法不同分为A组、B组、C组,每组30例。A组患者采用经皮撬拨手法复位夹板外固定治疗,B组患者采用闭合复位支架外固定治疗,C组患者采用切开复位钢板内固定治疗。比较三组患者的临床疗效、Gartland-Werley腕关节功能评分、腕关节活动度、并发症发生情况及治疗前后尺偏角、掌倾角、桡骨高度。结果三组患者治疗优良率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,A组患者尺偏角、掌倾角以及桡骨高度均大于B组、C组,且B组均大于C组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,A组患者Gartland-Werley腕关节功能评分(2.40±1.32)分显著低于B组的(6.59±3.54)分、C组的(8.62±3.41)分,且B组低于C组,差异具有统计学意义(P<0.05);A组患者腕关节背伸、掌屈、旋前、旋后活动度显著高于B组、C组,且B组高于C组,差异具有统计学意义(P<0.05)。A组患者并发症发生率6.67%显著低于B组的36.67%、C组的40.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论经皮撬拨手法复位夹板外固定对于恢复高龄Barton骨折患者腕关节功能具有积极意义,降低了术后并发症发生率,值得推广。

钢板螺钉内固定术与经皮微创内固定术治疗胫骨下段骨折

目的比较钢板螺钉内固定术与经皮微创内固定术治疗胫骨下段骨折的临床效果。方法选取2014年8月至2016年7月我院收治的胫骨下段骨折患者168例进行本次研究,采取数字表法将其分为观察组和对照组。88例观察组患者采用经皮微创内固定术进行治疗,80例对照组采用钢板螺钉内固定术进行治疗,比较治疗效果、手术情况及术后感染发生率。结果经不同治疗后,观察组优良率(94.32%)明显高于对照组(71.43%),差异具有统计学意义(P<0.05);观察组手术用时、术后发热时间、住院时间、痊愈时间与对照组相比均明显缩短,差异具有统计学意义(P<0.05);术后随访结果显示,观察组患者的感染率(12.50%)明显低于对照组(2.27%),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论胫骨下段骨折的临床治疗中,经皮微创内固定术的治疗效果明显高于钢板螺钉内固定术,有效降低了术后感染率,缩短住院、发热时间等,有利于骨折肢体的恢复。

交锁髓内钉内固定术与外固定支架术治疗胫腓骨骨折临床疗效比较

目的:比较交锁髓内钉内固定术与外固定支架术治疗胫腓骨骨折的临床效果。方法:120例胫腓骨骨折患者随机分为内固定组(n=70)和外固定组(n=50),分别采用交锁髓内钉内固定术、外固定支架术治疗。对比分析两组患者术后的肢体运动功能及手术情况。结果:治疗后内固定组患者下肢运动功能评分明显高于外固定组,骨折愈合时间明显短于外固定组,组间比较差异具有统计学意义(P<0.01)。两组患者完全负重时间、术中出血量和手术时间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:与外固定支架术比较,采用交锁髓内钉内固定术治疗胫腓骨骨折有利于提高患者肢体的运动功能,缩短骨折愈合时间,值得临床应用推广。

麝香多肽体外诱导成年大鼠和人骨髓间充质干细胞定向分化为神经元的研究

目的 :观察麝香多肽体外定向诱导成年大鼠和人骨髓间质干细胞 (Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSCs)分化为神经元的能力。方法 :采用含 10 0 - 15 0mg/L麝香多肽的无血清L -DMEM培养基诱导成年大鼠和人BMMSCs分化为神经元 ,免疫组化鉴定神经元烯醇化酶 (NSE)、神经丝蛋白 (NF)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、神经巢蛋白 (nestin)的表达。结果 :成年大鼠和人BMMSCs在加入含麝香多肽的无血清L -DMEM培养基诱导后 ,BMMSC胞体收缩 ,突起伸出 ,形似神经元 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。结论 :麝香多肽可以在体外诱导成年大鼠和人BMMSCs定向分化为神经元。

活血利水法预防下肢骨折术后深静脉血栓形成的疗效研究

【目的】观察活血利水法预防下肢骨折术后深静脉血栓形成(DVT)的临床疗效。【方法】根据一般情况及骨折分类将200例下肢骨折术后病例按照分层随机化法分为试验组、对照组各100例。根据《中国骨科大手术静脉血栓栓塞症预防指南》,2组予以相同的综合预防方案,同时试验组予以活血利水法代表方剂活血通脉汤治疗,每日1剂,连续14 d。分别观察2组术后第1天、第5天、第14天血清D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(Fg)水平并行伤肢彩色多普勒超声检查。【结果】(1)术后第1天,2组的血清D-D、Fg水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。术后第5天、第14天,2组的血清D-D、Fg水平逐步下降,与术后第1天比较,差异均有统计学意义(P<0.05);且试验组下降较同期对照组显著,差异均有统计学意义(P<0.05),表明试验组在降低患者的血清D-D、Fg水平方面优于对照组;(2)彩色多普勒超声检查显示:术后第1天,2组伤肢DVT发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后第5天、第14天,试验组伤肢DVT发生率均显著低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】根据《中国骨科大手术静脉血栓栓塞症预防指南》制定综合预防方案,同时配合中医活血利水法治疗,能够降低下肢骨折术后血清D-二聚体、纤维蛋白原水平,预防伤肢深静脉血栓形成。

成年大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为神经元样细胞

目的 探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞（ａｄｕｌｔ ｒａｔ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ｒＭＳＣｓ）的体外 增殖和特异性诱导分化为神经元样细胞的能力。方法 分别采用３种不同的诱导方法体外定向诱导第三至五代的 ｒＭＳＣｓ向神经元样细胞分化，并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达 的神经元特异性标志［神经元特异性烯醇化酶（ｎｅｕｒｏｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｅｎｏｌａｓｅ，ＮＳＥ）和神经丝蛋白（ｎｅｕｒｏｆｉｌａｍｅｎｔ，ＮＦ）］及 星形胶质细胞特异性标志［胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａ ｆｉｂｅｒ ａｃｉｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）］，并进行神经元样细胞定量分析。结 果 所采用的３种定向诱导方法都能使ｒＭＳＣｓ特异性诱导分化为神经元样细胞，此神经元样细胞都能特异性地表 达出ＮＳＥ和ＮＦ，而不表达ＧＦＡＰ。经过定量计数分析发现用上述方法处理ｒＭＳＣｓ后出现ＮＳＥ阳性的细胞约为 ７５．５％±３．５％，出现ＮＦ阳性的细胞约为７７．２％±２．８％。结论ｒＭＳＣｓ能在体外扩增、传代，并能被定向诱导分 化为神经元样细胞。

长期传代的大鼠骨髓间质干细胞的生物学特性分析

目的 :通过对大鼠骨髓间质干细胞 (BMMSC)体外长期传代培养 ,进一步了解其增殖、表型变化及是否有突变倾向。方法 :用流式细胞仪分析 80 %融合生长的传代细胞的细胞周期、表型变化 ;并对早期和长期传代的BMMSC进行核型对比分析。结果 :早期和长期传代 (30代 )的BMMSC均呈现旺盛的的增殖力 ,但 4 0代BMMSC的表型与 2 0代以前则有所不同 ;早期和长期传代的BMMSC均显示正常核型。结论 :大鼠BMMSC可简便迅速地在体外长期扩增 ,在保持这种高增殖力的同时 ,核型仍保持正常二倍体 ;长期传代的BMMSC的表型变化提示其有一定自发分化趋势。

BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。

大鼠骨髓间质干细胞基本生物学特性的研究

目的:研究成年大鼠骨髓间质干细胞(rBMMSCs)的基本生物学特性,并与成人骨髓间质干细胞(hB-MMSCs)作比较。方法:分别采用贴壁法和Ficoll-Paque淋巴细胞分离法分离获得rBMMSCs和hBMMSCs,进行体外传代、扩增、纯化,比较分析不同代数的rBMMSCs和hBMMSCs的增殖能力和克隆形成能力,观察传代次数对rBMM-SCs的神经分化能力的影响,流式细胞仪检测rBMMSCs表面抗原表达;采用中期分裂相秋水仙素阻抑法分析rBMM-SCs的核型。结果:原代rBMMSCs和hBMMSCs在体外扩增后可分别获得(7-8)×10~5和(5-6)×10~5个细胞,体外扩增5代后可分别获得1.7×10~8和1×10~8个细胞,体外扩增15代后,可分别获得(4-8)×10^(12)和(3-4)×10^(12)个细胞,随着传代次数的增加,细胞的增殖能力、克隆形成能力和神经分化能力有所下降,但各代rBMMSCs的增殖能力和克隆形成能力都比hBMMCs较强。流式细胞仪检测结果显示rBMMSCs的CDllb、CD45、CD61、CD71、CD80、CD86、MHCⅠ、MHCⅡ表达为阴性,而CD29和CD44表达阳性。rBMMSCs为正常大鼠二倍体核型。结论:rBMMSCs具有极强的自我更新能力和神经分化能力,是一种具有正常二倍体核型的间质干细胞,在组织工程中具有广阔的应用前景。

人骨髓间质干细胞向造血细胞分化潜能的实验研究

目的 :在体研究人骨髓间质干细胞 (hBMMSCs)向造血细胞分化的潜能。方法 :将hBMMSCs经尾静脉注射给环磷酰胺处理的严重联合免疫缺陷 (SCID)小鼠 ,利用流式激活细胞分析系统 (FACS)检测hBMMSCs输注后存活 35d的SCID小鼠外周血、骨髓和脾脏中人源性造血细胞的表型和水平。结果 :hBMMSCs输注组外周血 (PB)、骨髓(BM)和脾脏 (spleen)中可检测到人CD45+ /H - 2Dd - 、CD34+ /H - 2Dd - 细胞 ,而对照组PB、BM和脾脏均未检测到上述表型的人造血细胞。结论

胎肝条件培养液体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为造血细胞的研究

目的探讨人骨髓间充质干细胞(hMSCs)体外造血分化潜能。方法选用孕125-145d(125-145dpc)的昆明小鼠,分别制备小鼠胎肝基质细胞条件培养液(FLSC-CM)及胚胎成纤维细胞饲养层(FD),将体外扩增的CD34-CD45-hMSCs分别接种于含FLSC-CM、FD和IL-6及SCF组合的培养体系中,培养7d后,通过形态学、表型、粒-单/巨噬细胞系集落培养(CFU-GM)对分化细胞进行鉴定。结果hMSCs与FLSC-CM共培养组产生的非贴壁细胞明显增多,形态类似于单核或小淋巴细胞,部分细胞可表达人造血细胞特异性表面分子(CD34和CD45),在含人粒-单集落刺激因子(GM-CSF)的甲基纤维素培养体系中能够形成CFU-GM,而FD和IL-6+SCF诱导组无上述作用。结论FLSC-CM可诱导CD34-CD45-hMSCs分化为造血细胞,提示hMSCs具有体外造血分化潜能。

阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究

目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受鼠 (BALB CH 2d)脾细胞作为刺激细胞 ,设单抗组 (加抗CD4 0L单抗 )和对照组 (不加单抗 ) ,初次混合淋巴细胞培养(MLR) 7天 ,在不同时间点采用3H TdR掺入法检测细胞增殖率 ,以ELISA法测定培养上清液中IFN γ、IL 2、IL 4、IL 10等的水平 ,第 5天采用流式细胞仪检测CD4 + T和CD8+ T细胞上CD2 5、CD6 9、CD4 0L和CD4 5RA的表达。再次MLR 5天 ,第 1、3、5天采用3H TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平。结果 :初次和再次MLR结果均显示 ,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组。初次MLR单抗组中CD4 + T和CD8+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ;单抗组中CD4 + CD2 5 + T、CD4 + CD6 9+ T、CD8+ CD2 5 + T、CD4 + CD4 0L+ T和CD8+ CD6 9+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而CD8+ CD4 0L+ T和CD4 + CD4 5RA +T细胞的比例与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL 4和IL 10几乎无法测出 。

锁骨钩钢板联合带线锚钉治疗TossyⅢ型肩锁关节脱位

目的探讨锁骨钩钢板联合带线锚钉修复喙锁韧带治疗TossyⅢ型肩锁关节脱位的临床疗效。方法收治TossyⅢ型肩锁关节脱位患者共85例,钩钢板组50例,其中男36例,女14例;年龄21~58岁,平均36.3岁;实施锁骨钩钢板内固定治疗。联合锚钉组35例,其中男27例,女8例;年龄23~55岁,平均35.7岁;采用锁骨钩钢板内固定联合带线锚钉修复喙锁韧带治疗。结果参照Karlsson评价标准,钩钢板组50例患者中优18例(36%),良26例(52%),差6例(12%);联合锚钉组35例患者中优16例(45.7%),良17例(58.6%),差2例(5.7%)。两组疗效优良率对比,差异具有统计学意义(P<0.05)。肩部外侧疼痛情况:钩钢板组13例(26.0%),联合锚钉组5例(14.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。内固定拆除后钩钢板组出现不同程度肩锁关节脱位复发7例(14.0%),联合锚钉组未见脱位复发(P<0.05)。结论锁骨钩钢板联合带线锚钉治疗肩锁关节脱位,复位良好、固定牢靠,利于肩关节早期功能锻炼,在钢板拆除后能有效避免脱位复发,临床效果满意。

人胎盘血间质干细胞分离培养

目的分离培养人胎盘血间质干细胞(hMSC),为hMSC探寻新来源。方法采用羟乙基淀粉(HES)方法分离、富集胎盘血有核细胞;DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC;流式细胞仪检测细胞表面标记;地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下,生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞,阳性获得率2917%(7/24),该细胞传代培养达6个月以上;流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性;加入脂肪细胞诱导剂,细胞在形态上向脂肪细胞转化,胞内出现脂滴、脂泡,油红O阳性。结论人胎盘血可以分离培养出hMSC,是hMSC的重要来源。

火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病的实验研究

目的探讨火把花根片在小鼠骨髓移植模型中减轻急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease,aGVHD)的效果及可能的作用机制。方法建立小鼠异基因骨髓移植GVHD模型,预处理为放疗8．0Gy,分为：对照组(n=10)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植组；火把花根片组(n=20)异基因骨髓细胞(2×10~6)加脾T淋巴细胞(2×10~6)移植加火把花根片预防组。比较受鼠生存时间和GVHD发生情况,受鼠外周血象中白细胞、血球压积等恢复情况和骨髓细胞中嵌合体H-2D^b阳性细胞百分比以评价造血重建。在移植后不同时间点分别采用流式细胞仪检测受鼠的脾细胞中CD4^+和CD8^+以及CD25和CD69的表达。结果移植后对照组受鼠均于25天内死于GVHD,火把花根片组GVHD的发生率为20%(4/20),与对照组小鼠相比,存活率和时间明显增高和延长(P＜0．01)；存活的火把花根片组小鼠(n=4)40天时骨髓细胞中的H-2D^b阳性细胞百分比达(93．38±4．32)%。移植后10天开始,火把花根片组小鼠CD4^+和CD8^+T细胞比例明显低于对照组(P＜0．05),CD4^+CD25^+T细胞、CD4^+CD69^+T细胞、CD8^+CD25^+T细胞和CD8^+CD69^+细胞比例明显低于对照组(P＜0．05)。结论火把花根片能明显减轻骨髓移植模型中aGVHD的发生率,其作用机制可能在于抑制aGVHD发生过程中T细胞的免疫反应。

麝香组分诱导成年大鼠骨髓间质干细胞体外定向分化为神经元样细胞的能力

【目的】探讨麝香组分体外诱导成年大鼠骨髓间质干细胞 (adultratbonemarrowmesenchymalstemcells,rBMM SCs)定向分化为神经元样细胞的能力。【方法】分别采用含麝香多肽或麝香酮的L DMEM培养基体外定向诱导第 5代至 10代的rBMMSCs,并分别应用相差显微镜观察神经元样细胞和免疫细胞组化检测神经元样细胞所表达的神经干细胞特异性标志 (nestin)、神经元特异性标志 [神经元特异性烯醇化酶 (neuronspecificenolase ,NSE)和神经丝蛋白 (neurofilament ,NF) ]及星形胶质细胞特异性标志 [胶质纤维酸性蛋白 (gliafiberacidprotein ,GFAP) ],并进行神经元样细胞记数分析。【结果】成年大鼠BMMSCs在加入含麝香多肽的无血清L DMEM培养基诱导后 ,发现细胞胞体收缩 ,突起伸出 ,形似神经元 ;免疫组化显示诱导出的神经元样细胞NSE、NF、nestin表达阳性 ,GFAP阴性。神经元样细胞记数分析发现 :rBMMSCs经过麝香多肽诱导后 ,NSE+ 神经元样细胞和NF H+ 神经元样细胞的比例分别高达 93 5和 88 2 %;而用含麝香酮的无血清L DMEM培养基却无上述变化。【结论】麝香多肽能在体外诱导rBMMSCs定向分化为神经元样细胞 ,而麝香酮却无此能力。

初中数学教学中培养学生纠错习惯的措施

在实际的初中数学教学开展的过程当中,教师不仅要求学生掌握相关的数学基础知识,同时也要使学生掌握正确有效的解题方法,这样才能使学生的解题正确率和数学成绩能够得到全面的提升。但是,虽然教师花费了较多的时间和精力来进行数学纠错教学,但是仍然有部分的学生不能够掌握正确的纠错方法和技巧,在具体的解决过程当中往往很容易出现各种错误。