糖尿病模型大鼠血液microRNA的表达特征及生物信息学分析

目的筛选2型糖尿病(T2DM)大鼠与正常大鼠血液中差异表达的microRNA(miRNA),通过生物信息学分析预测差异miRNA调控的靶基因及功能。方法取20只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组和T2DM模型组,每组10只。采用高脂饲料联合腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作T2DM大鼠模型,2周后提取糖尿病大鼠及正常大鼠全血,应用miRNA测序技术筛选差异miRNA。利用生物信息学方法对差异表达的miRNA靶基因进行基因本体(gene ontology,GO)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路富集分析。结果与空白对照组相比,T2DM模型组大鼠随机血糖均≥16.7 mmol/L且明显升高、持续稳定。与空白对照组相比,T2DM模型组大鼠血液中共有56个差异表达的miRNA,其中32个上调,24个下调。GO富集分析显示差异表达miRNA的靶基因主要集中在细胞质、细胞核、细胞膜等细胞组分,DNA及RNA的转录调控等生物学过程,与蛋白结合、金属离子结合、ATP结合等分子功能相关。KEGG通路富集分析显示差异表达miRNA的靶基因主要富集于糖尿病并发症、癌症等疾病通路,内吞、自噬等细胞功能通路,MAPK、mTOR、Ras、FoxO等信号通路。结论T2DM模型大鼠血液miRNA较正常大鼠差异表达变化明显,其差异表达的miRNA可能通过影响细胞的炎症免疫反应、增殖、生长分化等功能进而参与糖尿病及其并发症的发生发展。

柴胡加龙骨牡蛎汤对2型糖尿病合并抑郁大鼠炎症因子及单胺类神经递质的影响

目的观察柴胡加龙骨牡蛎汤对2型糖尿病合并抑郁大鼠行为、炎症因子及海马区单胺类神经递质的影响,探讨其可能作用机制。方法取50只健康雄性SD大鼠,随机选取10只作为空白组,其余40只大鼠制备2型糖尿病合并抑郁模型。将造模成功的30只大鼠随机分为模型组、氟西汀组、柴胡加龙骨牡蛎汤组,每组10只。氟西汀组给予盐酸氟西汀3.17 mg/(kg·d)灌胃,柴胡加龙骨牡蛎汤组给予柴胡加龙骨牡蛎汤1.638 g/(kg·d)灌胃,空白组和模型组给予蒸馏水灌胃,均1次/d,连续灌胃8周。记录造模结束及灌胃结束后大鼠体重、空腹血糖水平、旷场试验活动总路程、悬尾不动时间、强迫游泳漂浮时间;灌胃结束后,ELISA法检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17A(IL-17A)、白细胞介素-18(IL-18)水平,HE染色观察海马组织的病理形态,免疫组化检测海马组织中五羟色胺2A受体(5-HT2aR)、多巴胺受体D2(DRD2)阳性表达情况,Real-Time PCR法检测海马组织中5-HT2aR、DRD2 mRNA表达情况。结果灌胃结束后与模型组比较,氟西汀组大鼠体重明显增高(P<0.05);柴胡加龙骨牡蛎汤组大鼠空腹血糖水平明显降低(P<0.05);氟西汀组和柴胡加龙骨牡蛎汤组大鼠活动总路程均明显延长(P均<0.05),悬尾不动时间、强迫游泳漂浮时间均明显缩短(P均<0.05);氟西汀组大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-18水平和柴胡加龙骨牡蛎汤组大鼠血清IL-1β、IL-6水平均明显降低(P均<0.05),柴胡加龙骨牡蛎汤组大鼠血清IL-2、IL-17A水平和氟西汀组大鼠血清IL-2水平均明显升高(P均<0.05);柴胡龙骨牡蛎汤组和氟西汀组大鼠神经细胞数目减少、细胞核皱缩情况均有不同程度减轻,海马组织中5-HT2aR、DRD2阳性表达平均光密度值和5-HT2aR、DRD2 mRNA相对表达量均明显增高(P均<0.05)。与氟西汀组比较,柴胡加龙骨牡蛎汤组大鼠血清IL-1β水平更低(P<0.05),血清IL-6、IL-17A水平及海马组织中5-HT2aR、DRD2 mRNA相对表达量均更高(P均<0.05)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤可降低2型糖尿病合并抑郁大鼠血糖,保护海马区神经元,减轻抑郁行为,机制可能与调控炎症因子及单胺类神经递质表达有关。

基于网络药理学探究肾炎消白颗粒治疗糖尿病肾病作用机制

目的:基于网络药理学方法分析肾炎消白颗粒治疗糖尿病肾病的潜在机制,为临床运用提供理论参考。方法:挖掘中医药系统药理学平台(TCMSP)获得肾炎消白颗粒有效成分及作用靶点,并研究相关文献进行补充,通过挖掘GeneCards、TTD、OMIM、DisGeNET数据库获取其疾病潜在靶点,于STRING 11.0平台构建蛋白质互作网络,预测关键靶点并进行基因本体-生物过程分析(Gene Ontology-biological process,GP-BP)及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,构建“肾炎消白颗粒-糖尿病肾病-通路”网络图。结果:肾炎消白颗粒主要有效成分有紫杉碱、花生四烯酸、β-胡萝卜素、β-谷甾醇、联苯酸酯、芒柄花素等,其关键靶点有TNF、RELA、JUN、AKT1、MAPK3等,生物过程可调节多种介质,调控DNA结合转录因子的活性,并针对细胞进行氧化应激反应,其涉及通路主要包括白细胞介素-17(IL-17)信号通路、Toll样受体信号通路、TNF信号通路、糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、细胞凋亡、MAPK信号通路、Th17细胞分化通路等。结论:肾炎消白颗粒具有多成分、多靶点、多通路作用的优势,治疗糖尿病肾病可能与炎症反应、自噬-凋亡通路等相关。

中医药治疗桥本氏甲状腺炎研究进展

桥本氏甲状腺炎(hashimoto thyroiditis,HT)是导致甲状腺功能减退的主要原因之一。近年来,HT的发病率逐年上升。中医药治疗HT通过多靶点用药可缓解HT患者临床症状、双向调节免疫反应及体内激素水平,从整体上调节人的内环境,使其恢复稳态。通过分析、概括近年来中医药治疗桥本氏甲状腺炎的相关文献,阐述桥本氏甲状腺炎的中医药治疗(包括分期论治、分型论治、从脏腑论治、医家特色理论论治、中成药及针灸治疗)并强调含碘中药在其治疗中的合理运用,以期为临床提供理论依据和治疗方案。

柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性应激抑郁大鼠炎症因子及单胺类神经递质受体表达的影响

目的通过研究柴胡加龙骨牡蛎汤对血清炎症因子及海马区单胺类神经递质受体的影响,探讨其治疗抑郁的可能机制。方法随机从40只大鼠中选取30只建立慢性应激抑郁大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、中药组、西药组,每组10只,未进行造模的10只大鼠为空白组。空白组、模型组每天给予蒸馏水6.3 mL/kg,西药组每天给予盐酸氟西汀3.17 mg/kg,中药组每天予柴胡加龙骨牡蛎汤1.638 g/kg,每组均连续灌胃干预8周。干预前后,采用旷场试验观察大鼠活动总路程;采用悬尾实验观察大鼠挣扎静止时间;采用强迫游泳实验观察大鼠游泳不动时间。干预8周后,采用HE染色观察各组大鼠海马组织的病理形态学变化;采用ELISA法检测各组大鼠血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)水平;采用免疫组织化学法观察各组大鼠海马组织中的5-羟色胺2A受体(serotonin 5-hydroxytryptamine 2A receptor,5-HT_(2A)R)、多巴胺受体D2(dopamine receptor D2,DARD2)表达水平;采用实时荧光PCR检测各组大鼠海马组织中的5-HT_(2A)R、DARD2 mRNA相对表达量。结果空白组海马区组织结构正常,神经细胞形态正常,排列整齐,细胞质饱满,细胞核清晰;模型组神经细胞数目相对减少,体积变小,细胞核出现皱缩;与模型组比较,柴胡龙骨牡蛎汤组和西药组大鼠神经细胞数目较多、体积较大、细胞核皱缩情况均有不同程度减轻,其中,中药组改善明显。与空白组比较,模型组活动总路程、悬尾挣扎时间均明显缩短(P<0.01),游泳不动时间明显延长(P<0.01),IL-1β、IL-6、IL-18含量明显升高(P<0.01),IL-2含量明显降低(P<0.01),5-HT_(2A)R、DARD2蛋白及mRNA表达水平均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,中、西药组活动总路程、悬尾挣扎时间均明显延长(P<0.01),游泳不动时间均明显缩短(P<0.01),IL-1β、IL-6、IL-18含量均明显降低(P<0.05,P<0.01),IL-2均明显升高(P<0.01),5-HT_(2A)R、DARD2蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,中药组IL-17含量明显降低(P<0.05)。中、西药组间活动总路程、游泳不动时间、悬尾挣扎时间比较,IL-1β、IL-2、IL-6、IL-17、IL-18含量比较,5-HT_(2A)R、DARD2蛋白及mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。干预后,中、西药组活动总路程、悬尾挣扎时间均明显长于干预前(P<0.01),游泳不动时间均明显短于干预前(P<0.01)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤可能通过调控炎症因子及单胺类神经递质功能治疗抑郁。

基于液相色谱-四极杆/飞行时间质谱血液代谢组学的黄芪桂枝五物汤干预血瘀证大鼠的研究

目的:探讨黄芪桂枝五物汤用于血瘀证大鼠的作用机制。方法:将大鼠分为空白组、模型组和给药组,采用皮下注射肾上腺素联合冰水浴方法诱发大鼠血瘀证模型(模型组、给药组);给药组大鼠灌胃给予黄芪桂枝五物汤8 g/kg,空白组、模型组大鼠灌胃给予等量0.9%氯化钠溶液,每日灌胃1次,连续7 d,检测三组大鼠的凝血指标水平。采用液相色谱-四极杆/飞行时间质谱采集和处理海量的内源性代谢物数据。采用非参数单变量分析法和多元统计分析法对潜在生物标志物进行筛选和鉴定。构建基于血液生物标志物的代谢通路示意图,以探讨大鼠血瘀证的发病机制和黄芪桂枝五物汤的作用机制。结果:与空白组比较,模型组大鼠凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT)显著缩短,纤维蛋白原(FIB)含量显著升高,差异均有统计学意义(P <0.01);与模型组比较,给药组大鼠TT、PT和APTT明显延长,FIB含量显著降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。代谢组学研究结果表明,黄芪桂枝五物汤对血瘀证大鼠的干预可引起其代谢谱的实质性和特征性改变。筛选出10种代谢物,如L-谷氨酸、L-苯丙氨酸和L-色氨酸等;给予黄芪桂枝五物汤后上述代谢物恢复至正常水平。结论:黄芪桂枝五物汤对血瘀证有一定的治疗作用,调节谷氨酸、苯丙氨酸和色氨酸等代谢通路可能是其治疗血瘀证的作用机制。

基于代谢组学的丹贝益肺方对肺纤维化合并抑郁症大鼠作用机制的研究

目的:采用血液代谢组学技术探索丹贝益肺方对肺间质纤维化合并抑郁症大鼠的疗效及潜在机制。方法:将大鼠分为正常对照组、模型组、给药组。模型组和给药组采用气管内注入博来霉素联合慢性不可预测轻度压力(CUMS)诱导肺纤维化合并抑郁症,给药组进一步灌胃给予丹贝益肺方溶液(10 g·kg^(-1)·d^(-1))4周。分别行肺功能检测、旷场实验和糖水偏好实验。处死动物后,收集血清和肺组织。肺组织行HE染色,ELISA法测定大鼠血清白细胞介素(IL)水平,采用高分辨代谢组学技术分析大鼠血清内源性代谢产物变化。结果:与模型组相比,丹贝益肺方处理能显著性缓解大鼠肺纤维化症状和改善肺功能,降低血清IL-1、IL-4、IL-6、IL-8水平(P<0.05或P<0.01),增加旷场实验水平和垂直得分以及糖水偏好率(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组相比,模型组有10种差异代谢物水平显著降低(P<0.05或P<0.01),包括2,5-二氧戊二酸、古龙酸、L-亚油酸、D-核酮糖、L-精氨酸、D-脯氨酸、L-苯丙氨酸、牛磺酸、顺乌头酸、溶血磷脂酰胆碱(18∶0)。丹贝益肺方处理则能明显纠正模型组大鼠代谢异常。结论:丹贝益肺方对肺纤维化合并抑郁症大鼠具有一定疗效,其机制可能与调节碳水化合物、溶血磷脂酰胆碱以及多种氨基酸代谢有关。

Th17细胞在抑郁发病机制中的作用研究进展

抑郁症是一种常见的精神疾病,其临床表现为持续性的情绪低落、负罪感、自我价值感丧失、睡眠障碍、食欲不佳、疲倦及注意力不集中等,抑郁程度严重时患者可出现自杀倾向。抑郁症可通过缩短端粒长度、加速大脑老化和表观遗传老化来促进生物体衰老,增加罹患其他疾病的风险。

柴胡加龙骨牡蛎汤对2型糖尿病合并抑郁患者肠道菌群的影响

目的观察柴胡加龙骨牡蛎汤联合黛力新对2型糖尿病合并抑郁患者肠道菌群的影响。方法选取2型糖尿病合并抑郁患者共计86例,随机分为试验组和对照组,每组43例。对照组予口服氟哌噻吨美利曲辛片(黛力新)治疗,每日2次,早晨及中午各1片;试验组予黛力新联合柴胡加龙骨牡蛎汤,中药每日2次,每次1袋。干预疗程均为8周。比较两组治疗前后空腹血糖(FPG)、餐后血糖(2hPG)、糖化白蛋白(GA)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)、五羟色胺(5-HT)、汉密尔顿抑郁量表(HAMD-17)评分、抑郁自评量表(SDS)评分、中医证候评分的变化,通过16s rDNA高通量测序对肠道菌群OUT数量、多样性指数及差异菌群进行综合分析和评价。结果最终纳入统计80例患者,试验组和对照组各40例。与本组治疗前比较,治疗后两组患者的FPG、2hPG、GA、IL-6、CRP水平均降低(P<0.05),5-HT水平升高(P<0.05),其中试验组GA、IL-6、CRP、5-HT的改善程度明显优于对照组(P<0.05)。与对照组治疗后比较,试验组HAMD-17评分、中医证候积分均降低(P<0.05)。Alpha多样性分析显示,治疗后试验组Shannon指数、Chao指数、Ace指数均升高(P<0.05),Simpson指数降低(P<0.05)。Beta多样性分析显示,治疗后试验组患者肠道微生物群落的分布位置和象限区间较基线发生明显变化。LefSe差异分析显示,试验组治疗前后有4个差异菌门、7个差异菌科、9个差异菌属,与对照组同期相比主要表现为厚壁菌门(Firmicutes)丰度上调,变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)丰度下调。结论柴胡加龙骨牡蛎汤能够有效改善2型糖尿病合并抑郁患者的临床症状,其机制可能与下调炎症细胞因子水平、上调5-HT浓度以及调节肠道菌群有关。

不同中医证型2型糖尿病与外周血巨噬细胞表型的相关性

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者中医证型与外周血巨噬细胞M1和M2表型的相关性。方法:选取102例T2DM患者及20名健康者作为健康对照组,检测122名受试者的空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素、空腹C肽、巨噬细胞表型及血清炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-4、IL-10)的含量在不同证型患者中的差异。并经Pearson分析各组患者巨噬细胞表型与T2DM中医证型的相关性。结果:T2DM患者外周血M1型巨噬细胞百分比与IL-1β、IL-6呈正相关,与IL-4、IL-10呈负相关;M2型巨噬细胞百分比与IL-1β、IL-6呈负相关,与IL-4、IL-10呈正相关。与健康受试者比较,T2DM患者的FBG、HbA1c、空腹胰岛素、空腹C肽、M1型巨噬细胞百分比、M1/M2比值、IL-1β、IL-6水平均显著升高,M2型巨噬细胞百分比、IL-4、IL-10水平均显著下降(P<0.05)。T2DM各中医证型患者的FBG、HbA1c、空腹胰岛素、空腹C肽、M1型巨噬细胞百分比、M1/M2比值、IL-1β、IL-6含量由高到低排序为痰热互结组、血瘀脉络组、阴阳两虚组、肝肾阴虚组、气阴两虚组,而M2型巨噬细胞百分比、IL-4和IL-10水平由低到高排序为痰热互结组、血瘀脉络组、阴阳两虚组、肝肾阴虚组、气阴两虚组。结论:各中医证型的T2DM中,M1型巨噬细胞百分比含量最高的组是痰热互结组,最低的组是气阴两虚组;M2型巨噬细胞百分比含量最高的是气阴两虚组,含量最低的是痰热互结组。T2DM的病情变化可能与巨噬细胞的极化调控有关。