极低出生体重儿的早期肠道菌群特征及影响因素研究

极低出生体重儿(VLBWI)是指出生时体重<1500 g的早产儿,由于其发育未成熟,易发生各种并发症和感染性疾病,在新生儿中死亡率较高。肠道菌群是人体中最重要、最复杂的微生物群,而VLBWI因受到多种因素影响,其肠道菌群更易失衡。近年来有多项研究阐述了肠道菌群与疾病的发生密不可分,VLBWI的并发症便与其独特的肠道菌群有关,因此,研究VLBWI早期肠道菌群的特征对其疾病的防治具有重要意义。本文从VLBWI肠道菌群的构成、演变及其影响因素作一综述。

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在抗病毒免疫作用中的研究进展与展望

细菌、真菌以及寄生虫可以刺激中性粒细胞,活化的炎性中性粒细胞在感染或炎症应答期主动释放一种串珠样纤维网状物质——中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs),其产生的过程被称为NETosis。NETs可以杀死病原体,或者阻止病原体在宿主组织内的局部传播,但大量的NETs也可能造成局部或系统损伤。研究表明,病毒也能诱发NETosis,且产生的NETs也具有一定的抗病毒作用。中性粒细胞作为体内最多的免疫细胞,在抵御细菌、真菌以及寄生虫的第一道防线发挥重要作用,但其在控制病毒感染中的作用还不清楚。本文主要就病毒诱导NETs生成的机制、病毒如何逃避NETs以及NETs在抗病毒免疫中的作用予以综述。

蓝氏贾第鞭毛虫α-19贾第素的单克隆抗体制备与亚细胞定位研究

目的制备蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lamblia,简称贾第虫)α-19贾第素的特异性抗体,并通过免疫荧光对该贾第素的亚细胞定位进行鉴定。方法经PCR获得α-19贾第素编码区片段,双酶切将目的片段连入原核表达载体pET-28a(+)-α-19,重组载体转化E.coli Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE及Western blot验证表达情况;采用设计的合成抗原肽免疫小鼠经细胞融合和筛选制备特异性单克隆抗体,分别用贾第虫滋养体裂解物和α-19贾第素重组蛋白Western blot验证抗体特异性和结合力,选择特异性最好的单克隆抗体通过免疫荧光技术对α-19贾第素的亚细胞定位进行观察。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-19,经SDS-PAGE及Westernblot分析显示重组载体在大肠杆菌中表达出相对分子量约49 kD的重组蛋白,与理论值相符;Western blot显示单克隆杂交瘤细胞株α-19-3-7-3-5分泌的抗体结合力和特异性俱佳,可用于定位研究;免疫荧光定位结果表明α-19贾第素主要位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。结论制备了α-19贾第素的特异性单克隆抗体,免疫荧光显示α-19贾第素定位于贾第虫滋养体的腹鞭毛。

蓝氏贾第鞭毛虫末端结合蛋白1基因的克隆与原核表达

目的克隆并原核表达C2株蓝氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia,简称贾第虫)末端结合蛋白1(End-binding protein 1,geb1)基因,获得重组gEB1蛋白。方法由于geb 1基因无内含子,我们以C2株贾第虫基因组为模板,以国际标准株WB株geb 1基因序列为参考序列,设计引物克隆geb 1基因,经NcoⅠ和XhoⅠ双酶切与原核表达载体pET-28α(+)连接,转化感受态E.coli TOP10,经筛选和测序验证后导入大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖(IPTG)诱导gEB1蛋白表达,产物经SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证。结果成功构建了表达C2株贾第虫geb1基因的原核表达载体pET-28α(+)-gEB1,转化入大肠杆菌E.coli Rosetta(DE3),重组菌株经0.1 mmol/L IPTG,30℃低温诱导5 h,SDS-PAGE和Western blot显示,在相对分子量约29 KDa的位置出现目的蛋白条带,与理论值一致。结论用大肠杆菌成功表达了gEB1蛋白,为gEB1蛋白的功能研究和抗体制备提供了材料。

蓝氏贾第鞭毛虫滋养体体外诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成

目的通过定性和定量分析蓝氏贾第鞭毛虫(简称贾第虫)滋养体对中性粒细胞胞外诱捕网的诱导能力。方法采用中性粒细胞分离试剂盒提取健康人血中的中性粒细胞,与等数量贾第虫滋养体(均为4×10^(5))加入2 ml M199培养基中分别培养30、60、120、180、240 min,收集各时间段的培养上清,使用PicoGreen染色法定量检测上清双链DNA(dsDNA)的浓度,ELISA检测上清中髓过氧化物酶(MPO)的含量;另取中性粒细胞与贾第虫滋养体(均为4×10^(5)/ml)各200μl为实验组,加至24孔板中,37℃混合培养4 h后,用蓝色荧光标记DNA、绿色荧光标记瓜氨酸化组蛋白H3、红色荧光标记MPO,激光共聚焦显微镜下观察中性粒细胞胞外诱捕网的形成情况;阳性对照组为100 nmol/L佛波酯处理的中性粒细胞,阴性对照组为未处理的中性粒细胞。应用SPSS 19.0软件进行统计学分析,数据用独立样本t检验进行比较。结果分离获得的健康人血中性粒细胞纯度达75%以上,镜下可观察到核呈杆状或分叶状的中性粒细胞。PicoGreen染色法检测结果显示,中性粒细胞和贾第虫滋养体等数量混合30、60、120、180、240 min后,上清中dsDNA吸光度(A530值)分别为7.30±1.12、11.15±1.10、21.69±2.71、26.35±2.26、29.29±3.27,均高于阴性对照组的3.79±0.48,且dsDNA浓度随着培养时间的延长而升高(P<0.05)。ELISA检测结果显示,阴性对照组、实验组和阳性对照组上清中MPO含量的A530值分别为0.2094±0.0182、0.6115±0.0607、0.7217±0.0879,实验组的MPO含量高于阴性对照组(P<0.05)。激光共聚焦显微镜下观察到实验组的中性粒细胞和贾第虫滋养体之间有红色和绿色网状荧光物质存在,其中含有大量组蛋白和MPO。结论贾第虫滋养体在体外具有刺激中性粒细胞释放胞外诱捕网的能力。

儿童肠道病毒组的研究进展

病毒组是指病毒或病毒颗粒物及其所携带遗传信息的总和。儿童肠道病毒定植自出生后开始,逐步发展成熟。肠道病毒组在调控宿主免疫稳态,维护肠道屏障等方面发挥重要作用,但同时受出生方式、喂养方式与饮食及地理环境因素等影响。相对成人肠道病毒组的研究,儿童肠道病毒组相关研究可查资料相对较少,本文就儿童肠道病毒组组成、定植演化过程、功能、影响因素及儿童肠道病毒组与疾病关系进行综述。

中性粒细胞胞外诱捕网在抗寄生虫免疫中的作用研究进展

中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)是活化的炎性中性粒细胞在感染或炎症应答期主动释放的一种串珠样纤维网状物质,由染色质DNA和多种胞内蛋白成分组成,可通过缠绕致病菌限制其扩散,同时通过各种抗菌蛋白杀伤致病菌,被认为是中性粒细胞除吞噬和脱颗粒作用外的第三种杀菌机制。近年研究显示,NETs也参与抗寄生虫免疫过程。本文就NETs在抗寄生虫免疫中作用的研究进展作一综述,以期为寄生虫病发病机制研究以及相关治疗药物开发提供参考。

河北省唐山市曹妃甸区3~6岁儿童肠道寄生虫感染情况调查及分析

目的了解当前河北省唐山市曹妃甸区3~6岁儿童肠道寄生虫感染情况,为学生肠道寄生虫的防治工作提供指导作用。方法收集3~6岁儿童粪便,采用生理盐水涂片法、饱和盐水浮聚法以及透明胶带肛拭法检查肠道寄生虫虫卵,运用SPSS Statistics对感染情况进行卡方检验。结果共调查824例粪便样品,该地区肠道寄生虫总感染率为2.06%,不同性别儿童肠道寄生虫感染情况比较差异无统计学意义(P>0.05);农村组儿童肠道寄生虫感染情况明显高于城市组,该结果具有统计学意义(P<0.05)。结论儿童肠道寄生虫感染情况在农村区域仍然相对较高,应科学减少感染肠道寄生虫的机会,确保儿童的身体健康。