炭疽杆菌双毒力因子荧光PCR检测方法的建立及应用

由炭疽杆菌(Bacillus anthracis)引起的炭疽(anthrax)是严重危害人类和家畜健康的重大传染病。为了提高出入境口岸对不明粉未快件样品的查验效率,防范通过包裹夹带生化武器,本研究使用TaqMan探针技术,建立了针对炭疽杆菌两种毒力质粒pOX1和pOX2的双重荧光PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和稳定性进行了试验。结果显示:本研究建立的炭疽杆菌双重荧光PCR检测方法具有较强的特异性,只特异性检出炭疽杆菌pOX1和pOX2,而与金黄色葡萄球菌等19种对照病原菌均无交叉反应;灵敏度与单重荧光PCR方法相近,最低检测限可达10 copies/μL;稳定性好,反应体系低温保存2、4、6、8个月后,检测阳性质粒的Ct值和峰值相差不大。应用该方法检测600份猪牛羊组织样本,均未检出炭疽杆菌阳性核酸。本研究建立的双重荧光PCR检测方法为炭疽杆菌的快速检测提供了技术支撑。

假型病毒的应用研究进展

一种病毒的核酸被另一种病毒编码的包膜蛋白所包被,称为假型病毒。假型病毒在细胞内只能进行单一周期复制,安全性好,并具有广泛的宿主范围,更高的转染效率,更容易浓缩成高滴度,能抵抗血清补体的攻击,非细胞周期依赖性地高效转染静止细胞等优点,因而假型病毒在研究病毒进入过程、受体鉴定、中和抗体检测、疫苗评价等方面具有重要作用。

北京市MSM人群HIV感染者合并HCV与梅毒感染的状况及相应免疫指标与病毒载量的变化

目的 了解北京市男男性接触者（MSM）的艾滋病病毒（HIV）感染及宿主的免疫状态。方法 2005年7～12月对招募的MSM进行HIV感染检测，采集阳性感染者的外周血，对分离毒株进行鉴定，并对阳性感染者的免疫状态包括CD4^＋、CD8^＋T细胞的数量，以及感染者体内病毒载量进行了分析。结果在招募的526名MSM中，HIV感染的主要流行亚型为欧美B亚型，1例为CRF01-AE重组亚型，后者主要为异性间HIV感染的流行亚型。HIV感染者中合并HCV或者梅毒的感染率分别为17．65％与35．29％，合并感染者的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞数量明显降低，病毒载量明显升高。结论 MSM人群中HIV感染者合并STD感染，明显降低宿主免疫系统控制病毒复制的能力，同时存在着MSM人群与其他高危人之间通过性途径相互传播HIV的趋势。

上海口岸截获的粉蝇属DNA条形码鉴定及系统发育研究

使用传统形态学分类方法进行干制标本的物种鉴定通常比较困难。本文按照《国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程》对上海口岸截获的粉蝇属干制标本进行DNA条形码研究。经BOLD System v4比对,结果显示所得序列分别属于5个种:粗野粉蝇Pollenia rudis、伪粗野粉蝇P.pediculata、游荡粉蝇P.vagabunda、匈牙利粉蝇P.hungarica和Pollenia sp.。引入1条COⅠ序列作为外群对全部序列构建系统发育树(NJ树),结果显示不同物种各自聚为一支。因此,COⅠ条形码技术可以弥补传统形态学分类方法的不足,提高蝇类干制标本鉴定的成功率。

新型冠状病毒样本查杀一体化系统关键技术

新型冠状病毒肺炎是由新型冠状病毒感染引发的一种急性呼吸道传染病,自爆发以来已对世界经济发展和人民健康安全造成威胁。鉴于目前多种病毒变异株的出现,防控难度不断升级,快速、简便、大规模的检测手段对疫情控制起到关键作用。该文基于傅里叶变换红外光谱检测技术、模式识别算法及等离子体消毒技术开发了一种新型冠状病毒样本查杀一体化系统,并初步测试了该系统的检测及消毒有效性。“查”方面,该文将数据库规模从115例血清样本扩大至857例,并应用偏最小二乘分类、卷积神经网络两种模式识别算法建立对新冠阳性、对照阴性、免疫异常干扰样本的分类模型,预测准确率分别可达到91.97%和98.29%。“杀”方面,为了解决操作安全性问题,基于放电等离子体技术开发了样本干燥消毒模块和柔性消毒薄膜,对仪器重点位置进行有效保护,经实验室模拟消毒试验,两模块对大肠杆菌杀灭率均可达到99.9%以上,符合《消毒技术规范》2002版中的规定。综上,该文在新冠样本光谱检测过程中的“查”、“杀”两部分均进行了技术创新,并实现检测与消毒功能的结合,有助于光谱检测方法的应用推广。

高通量基因芯片技术在登革病毒检测和分型中的应用

目的建立能同时检测登革病毒4个亚型的基因芯片方法,并进行验证。方法使用建立的高通量快速基因芯片检测28份疑似登革热病例血清样本,与商品化荧光RT-PCR试剂盒检测结果进行比较,分析方法的结果一致性;将4个已知型别的登革病毒阳性样本混合,使用建立的芯片平台进行检测,评价该芯片在登革病毒分型中的应用价值。结果 28份疑似登革热病例的样本经高通量基因芯片检测,18份为登革病毒阳性,与商品化实时荧光RT-PCR试剂盒结果一致,符合率100%;混合样本中登革病毒4个型别均可检出。结论建立的芯片检测技术平台在登革热诊断方面具有较高的应用价值,值得在疾病预防、卫生检疫领域推广。

拉沙病毒IgG抗体间接免疫荧光检测方法的建立

目的建立简便、快速的拉沙病毒IgG抗体检测方法。方法利用293F细胞表达重组拉沙病毒糖蛋白GP1,固相化在腔室玻片上,加入GP1抗血清,最后加入荧光标记的二抗,利用间接免疫荧光法检测拉沙病毒IgG抗体。结果制备了重组拉沙病毒糖蛋白GP1,GP1抗血清效价>1∶1000000;拉沙病毒IgG抗体间接免疫荧光方法具有专一性强(检测20份健康人血清,无交叉反应),灵敏度较高(抗血清在1∶1000稀释时仍有较强信号)的特点。结论建立了拉沙病毒IgG抗体的快速间接免疫荧光检测方法,可用于口岸拉沙病毒的快速筛查。

上海口岸一起韩国输入性霍乱病例的应急处置

通过对一起韩国输入性霍乱弧菌引起的感染性腹泻病例的临床诊断、流行学调查、实验室检测和卫生检疫措施的实施,探讨口岸突发公共卫生事件的快速反应对策。国境卫生检疫应在排除检疫传染病情况下,扩大疾病检测范围,以控制常见的、多发的、易引起突发公共卫生事件的传染病为重点;加强口岸卫生检疫核心能力建设,建立应对突发公共卫生事件快速反应体系的新机制,为防止疾病的跨境传播提供技术保障。

高通量基因芯片在压载水中检测致病菌的应用

在口岸压载水检测中发现有多种食源性致病菌的存在,给公共卫生和口岸生态环境带来极大风险。目前对食源性致病菌的检测主要是通过细菌的培养及生化鉴定、荧光PCR等方法,但是不能同时检测多种致病菌。本研究针对一种能检测12种食源致病菌的芯片进行了应用研究,用参比菌株和实验室自分离的菌株检测该芯片的特异性,结果表明该芯片的特异性良好,在所检测的菌株之间无交叉反应。在DNA水平上可以检测到110~7 000 copy的DNA分子,在菌裂解液的水平上可以检测到104~105copy数目的菌体,样品添加实验证明1 cfu/m L的菌浓度就可以通过增菌后芯片检测到。该芯片可鉴别金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、霍乱弧菌、志贺氏痢疾杆菌、空肠弯曲杆菌、单增李斯特菌、副溶血性弧菌、弯曲肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、蜡样芽孢杆菌和产气荚膜杆菌等。研究证明该芯片的灵敏度比PCR水平略低,但是其具备高通量、快速、准确,简单易操作等优点,可以应用于口岸压载水中携带食源致病菌的快速检测。

上海口岸入出境船舶压载水的致病微生物携带情况调查

据国际海事组织统计,每年在全球运输的压载水超过100亿吨,每天约有超过7 000种生物随船舶压载水在全球范围内迁移,这些迁移的生物极易造成生物入侵。为了评估上海及附近海域受外来生物"侵袭"的风险,尤其是上海口岸入境的国际航行船舶压载水中致病微生物携带情况,我们采用自制采样器采集洋山、崇明及外高桥等港口入境船舶压载水样,参照国标GB/T5750.12—2006和生活饮用水规范(2001),对样品进行实验室培养和检测。结果显示在调查的20艘来自国外船舶的压载水中,检测到了肠致病性的气单胞菌和肠球菌,在某些船的压载水中还检测到了铅黄肠球菌。在3艘外来船舶的4个样本中检测到大肠菌群,细菌总数检测在10~3~10~4cfu/m L,霍乱弧菌未检出。研究结果说明当前上海口岸入境船舶压载水中存在风险,也警示我们应该加强压载水的管理。对于新发现的单胞菌,也应加强检测方法及标准的建立。为更好地应对实施的国际压载水海洋公约,我们应该针对入境的船舶压载水,展开更广泛地调查,采集更多的数据,对外来微生物进行更详细的风险评估。

虫媒病毒性传染病实验室检测技术研究进展

虫媒传染病是由病媒生物传播的自然疫源性疾病,常见的虫媒传染病包括登革热等虫媒病毒性疾病,鼠疫等虫媒细菌性疾病,恙虫病等虫媒立克次体与埃立克体疾病和疟疾等虫媒寄生虫病等[1].常见的传播媒介生物有鼠、蚊、蜱、螨、蜚蠊、虱、蚤、蠓、蚋和白蛉等[2-3].在我国每年传染病总发病病例中虫媒传染病约占5％-10％,但病死人数占传染病总死亡人数的30％-40％[2].我国虫媒生物种类繁多,分布情况复杂,对虫媒传染病病原体进行早期、快速检测和鉴定对疾病防控有着至关重要的作用.

国际船舶压载水管理及《公约》生效后检验检疫监管措施的思考和建议

在《国际船舶压载水和沉积物控制与管理公约》即将生效之际,作者综述了检疫部门多年来对压载水政策的发展,分析了近年来出入境检验检疫局在压载水检测中发现多批次船舶压载水超标的情况,分析了入境船舶压载水排放的风险。面对当前入境船舶压载水监管在立法、监管、技术、认识等的诸多问题,作者认为:应该尽快构建压载水管理信息系统,积极开展入境船舶压载水的风险评估;加快压载水检测实验室建设,加强入境压载水监管方面的技术研究标准建设和信息交流;完善相关法律法规体系,统一压载水管理的技术和排放标准;加强部门协作,建立多部门的协调管理机制;加强船舶检疫监管,提高压载水管理水平;加大宣传力度,提高民众法律意识。压载水的检疫监管不仅是关系到公共卫生安全和生态环境安全,还关系到贸易发展和经济社会发展,应该引起社会和相应部门的高度重视。

2014—2016年上海地区出入境人员肺结核检出情况分析

目的系统回顾分析2014—2016年在上海国际旅行卫生保健中心接受健康评估的出入境人员的肺结核监测情况,以期为口岸结核病防控提供依据。方法选取2014年1月—2016年12月在上海国际旅行卫生保健中心接受健康评估的出入境人员,包括申请在中国工作、居留、学习1年以上的外籍人员,及申请出境居住或工作1年以上的中国籍人员。对所有胸片显示有异常的人员行连续3d空腹晨痰检测,用浓缩集菌法处理痰液,经痰涂片抗酸染色和结核分枝杆菌复合群培养,培养结果为结核分枝杆菌复合群视为阳性;对阳性的菌群进行药敏测定。结果 2014年的肺结核检出率为0.0387%(31/80176),其中,入境人员的检出率为0.0476%(19/39952),出境人员的检出率为0.0298%(12/40224);2015年的检出率为0.0209%(16/76654),其中,入境人员的检出率为0.0307%(12/39089),出境人员的检出率为0.0106%(4/37565);2016年的检出率为0.0285%(21/73734),其中,入境人员的检出率为0.0376%(14/37271),出境人员的检出率为0.0192%(7/36463)。来自发展中国家、出境人员、年龄较低的人员,培养结果阳性较多(P<0.05)。共发现耐药肺结核20例,其中耐药(非耐多药)肺结核15例,耐多药肺结核5例。不同性别、年龄、人员类型的耐药情况组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论上海口岸出入境人员肺结核检出人员具有一定特征,结核病防控工作力度仍需加强。

上海口岸出境人员预防接种及旅行保健知识、态度和行为调查

目的了解上海口岸出境人员对于预防接种及旅行保健知识、态度和行为状况,为旅行前健康服务提供科学依据。方法采用分层随机抽样方法对上海口岸出境人员进行《预防接种及旅行保健影响因素的相关知识、态度和行为问卷》调查。结果共调查542人。调查对象中80.99%有出境旅行史,但其中仅29.16%有出境前预防接种和旅行咨询史。"知道境外目的地的传染病疫情动态"、"了解到在境外时相关的饮食卫生方法"、"准备随身携带的防病常用药物或医疗用品"3项,已接种者的知晓率高于未接种者,1项"需要保健中心提供您到境外的个人防病药物或医疗用品",未接种者的需求明显高于已接种者,此4项差异均有统计学意义(P <0.05)。67.71%调查者认为旅行前预防接种和旅行保健咨询非常重要,48.52%调查者认为国内预防接种和旅行保健的宣传教育力度不够。结论上海口岸出境人员预防接种及旅行保健知识欠缺,认识水平有待提高。

上海出入境检验检疫局发现我国首例库波热病毒

针对西非安哥拉回国的不明原因发热病人,筛查其可能携带的传染病病原体。采用荧光PCR的方法对口岸重点关注的黄热病毒、寨卡病毒、登革病毒等病原体进行筛查;采用深度测序的方法,搜索病毒库、细菌库、寄生虫库,进行序列比对筛查各类病原体,采用全基因组测序的方法获得病原体全基因组序列。2017年1月2日凌晨1点,上海出入境检验检疫局国家国境口岸卫生监督检测重点实验室接到一份紧急样本,样本来自1名安哥拉回国的28岁男子。该男子在安哥拉当地医院初筛黄热病阳性,该男子要求自行回国治疗。针对病人的血液样本和尿液样本,开展黄热病毒、登革病毒、寨卡病毒、裂谷热病毒、基孔肯雅病毒、西尼罗病毒、流行性乙型脑炎病毒、疟原虫等多种虫媒病原体的荧光PCR检测,结果显示阴性。通过对血液样本的深度测序发现,该病人感染了一种新型的弹状病毒,中文命名为库波热病毒,并获得了库波热病毒全基因组序列,与尼日利亚发现的库波热病毒比较,同源性为96%。

全球传染病疫情信息自动收集系统的研发

目的利用人工智能技术构建全球传染病疫情信息自动收集系统。方法采用主题爬虫、自动化信息抽提、自动翻译、自然语言处理等技术实现目标网页和目标信息的自动获取,通过机器深度学习和数据挖掘等技术制作日报,并持续改进;搭建网站作为数据交互载体,方便用户使用。结果租用境内外服务器,构建了基于网络的全球传染病疫情信息自动收集系统,每天两次自动爬取全球传染病疫情信息,自动翻译为中文,生成快报。搭建了网站,方便人机交互,将结果以网页形式展示,并能够根据用户需求自动生成疫情报告。结论传染病疫情自动收集系统覆盖面广、效率高,能自动生成疫情报告,能够满足国境口岸疫情收集的需要。

高通量基因芯片在口岸疟原虫检测中的应用

目的验证及应用一种同时快速检测4种疟原虫的高通量基因芯片方法。方法收集上海口岸现场经显微镜镜检及荧光PCR确认后的间日疟、恶性疟、三日疟、卵形疟病例血样,采用高通量基因芯片对4份疟原虫阳性血样同时进行验证检测。提取4种疟原虫DNA,采用实时荧光定量PCR进行定量,使用芯片检测经梯度稀释的疟原虫DNA样品,评价芯片的灵敏度。将4种疟原虫DNA和相同数量级浓度的诺氏疟原虫、微小隐孢子虫、结肠小袋纤毛虫DNA进行交叉反应检测,评价芯片的特异性。采集50例云南现场疑似疟疾病例血样,采用芯片进行检测,并与镜检结果进行比较。结果芯片检测上海口岸4份疟原虫阳性血样的结果与镜检和PCR结果相符,检测过程仅需2 h。芯片灵敏度检测结果显示,其对疟原虫DNA的检测下限分别为间日疟原虫78 copies/μl、三日疟原虫87 copies/μl、恶性疟原虫135 copies/μl、卵形疟原虫302 copies/μl。芯片特异性检测结果显示, 4种疟原虫均可检出,诺氏疟原虫、微小隐孢子虫、结肠小袋纤毛虫均未检出,无交叉反应。云南现场采集的50份疑似疟疾病例血样芯片检测结果显示,间日疟原虫阳性18份、恶性疟原虫阳性12份、三日疟原虫阳性1份,与镜检结果相符。结论该高通量基因芯片可以同时检测4种疟原虫,具有快速、准确、灵敏度高的特点,适合现场筛检及疟疾疫情防控的需要。

非洲来华人员输入性传染病病例流行病学调查

目的调查由非洲直航或转机入境我国,曾在非洲工作、生活、游学的中国籍及外籍入境旅客(非洲来华人员)中输入性病例的重点人群、重点疾病、重点航班等流行病学因素。方法 2017年6月—2019年6月,在广州、上海口岸对非洲来华人员采取红外体温监测、医学巡查等入境检疫措施,对发现的疑似传染病病例开展流行病学调查及采样送检。结果共检出各种输入性病例184例,其中疟疾、登革热、基孔肯雅热等蚊媒传染病81例,占输入性病例总数的44.02%;输入性病例主要来自埃塞俄比亚、尼日利亚、肯尼亚等国家;亚的斯亚贝巴—上海的ET684航班,亚的斯亚贝巴—广州的ET606航班及迪拜—广州的EK362航班是病例入境的重点航班,分别占输入性病例的27.17%、25.54%和10.87%。结论蚊媒传染病疫情经由非洲来华人员乘坐重点航班携带入境的威胁较大,导致本地疫情暴发的可能性不容忽视。

一株宋内志贺菌的分离鉴定及基因组分析

目的通过对口岸腹泻样本中分离到的志贺菌鉴定及全基因组的测序和分型研究,对志贺菌从致病性、抗药性及分子分型进行全面分析,建立入境腹泻病原体风险分析流程。方法对细菌的选择性培养基进行初筛后,分离菌株通过全自动微生物鉴定仪及实时荧光PCR的方法进行鉴定。对分离菌株进行全基因组测序、组装、注释、进化分析,通过多位点序列分型(MLST)方法进行分型。结果本次从口岸腹泻样本中成功分离到的志贺菌鉴定为宋内志贺菌,得到全长基因组4 817 693 bp,GC含量51.0%,注释了4 811个编码基因。对基因组分析发现了4种耐药基因及多种志贺毒素基因,进化研究表明该菌株与宋内志贺菌Ss046同源性最高,通过MLST方法分型为ST152克隆群。结论通过对志贺菌分离菌株鉴定及基因组学分析及分型,建立入境志贺菌分型溯源及风险分析流程,为口岸传染病疫情监控提供技术支撑。

一种混合药剂的集装箱杀虫消毒效果研究

目的观察两种杀虫消毒混合药剂在集装箱中杀虫和消毒的联合应用效果。方法用机动喷雾器在体积为33.3 m^3的标准集装箱内施药。选用致倦库蚊、家蝇、德国小蠊和美洲大蠊4种试虫分别在集装箱空箱和实箱中的不同位置悬挂试虫笼并放置微生物检测纸片,施药后密闭2 h取出试虫笼和微生物检测纸片,观察24~72 h内试虫的死亡数;同时在集装箱实箱中采用自然菌采样法测定自然菌杀灭率。结果空箱内施药后,致倦库蚊和家蝇的24 h死亡率为100.00%,德国小蠊48h死亡率为100.00%,美洲大蠊72 h的死亡率为100.00%,对大肠杆菌的平均杀灭率为100.00%。实箱现场试验结果显示,致倦库蚊和家蝇48 h的死亡率为100.00%,德国小蠊和美洲大蠊72 h的平均死亡率分别为98.89%和100.00%,自然菌采样法测定的集装箱实箱自然菌杀灭率大于95.00%。结论优莱洁与绿缘保混合药剂可以用于集装箱杀虫和消毒。