猪肠道非致病性且无耐药性大肠杆菌的分离鉴定、生长特性和基因组进化分析

【目的】从猪肠道中分离出无毒力基因且无抗生素耐药性的大肠杆菌,并分析其生长性能和遗传进化规律,以期为开发猪用微生态制剂或口服疫苗奠定基础。【方法】采集广东省2个地区养猪场的11头和15头健康成年猪的粪便样本。首先,采用培养方法从麦康凯培养基中分离出疑似大肠杆菌的菌株,通过16S rRNA序列分析鉴定其是否为大肠杆菌菌株;然后,采用PCR方法验证所选大肠杆菌是否含有13种常见的猪致病性大肠杆菌毒力基因,并以7类(14种)抗生素进行药敏试验;最后,对筛选出的优质大肠杆菌菌株进行生长动力学分析,并提取其全基因组DNA,构建全基因组系统进化树。【结果】在260株疑似为大肠杆菌菌株中,经16S rRNA序列分析确认后有206株属于大肠杆菌。其中,107株大肠杆菌不含13种常见毒力基因,25株大肠杆菌对7类(14种)抗生素敏感。在这25株菌株中,有23株非致病性且无抗生素耐药性大肠杆菌(编号为2-9、3-2、3-4、5-1、6-1、6-2、6-9、6-10、8-2、8-9、10-5、B-4、B-6、B-7、B-10、D-10、E-2、E-10、J-1、J-4、K-6、L-6和O-9)的生长性能与大肠杆菌Nissle1917、MG1655相似,其他2株大肠杆菌(编号为6-4和5-2)的生长速度高于Nissle 1917和MG1655。此外,有10株菌株(编号为E-10、E-2、6-4、6-9、8-2、O-9、3-2、6-2、J-1、K-6)耐酸性能较好,可能适合长期定殖于猪胃肠道内。基于SNP核心基因组系统进化树分析,发现这25株菌株中有9株菌株(编号为3-2、6-10、10-5、6-1、8-9、5-2、L-6、O-9、K-6)在系统进化树开端处属于同一大类群,表明它们极可能为猪原生大肠杆菌的祖先群。【结论】综合上述大肠杆菌的抗生素敏感性、生长性能和全基因组进化树和胃液环境耐受性能分析,菌株O-9在这4个方面均具备优势,该菌株与大肠杆菌Nissle 1917、MG1655的生长动力学相似甚至更优,意味着O-9菌株可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌,具有极大研究潜力。

仔猪阶段使用过抗生素的陆川猪母猪肠道和乳汁中大肠杆菌的耐药性及毒力基因分析

【目的】尽管替抗减抗政策已出台多年,但为预防和治疗疾病,在仔猪早期使用抗生素仍然是集约化养殖场养殖管理的一个重要环节。研究养殖场中仔猪阶段使用过抗生素的母猪体内不同部位(肠道和乳腺)大肠杆菌的耐药性和毒力差异情况,为集约化养殖场抗生素使用的优化提供科学依据。【方法】记录广东省湛江市某集约化陆川猪场母猪从仔猪出生后至约420日龄的抗生素使用情况,从同一批次约420日龄的健康母猪中收集初乳(分娩后2 h内)、常乳(分娩后24~72 h内)及肛门内新鲜粪便样品,通过麦康凯鉴别培养基分离出疑似大肠杆菌。通过药敏试验分析大肠杆菌耐药性和PCR检验毒力基因存在情况。【结果】通过麦康凯鉴别培养基分离出疑似大肠杆菌共704株,其中粪便大肠杆菌300株、初乳大肠杆菌220株、常乳大肠杆菌184株。药敏试验显示,粪便大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为96.3%(289/300),对其他常规抗生素的耐药率为63.6%(7/11),总耐药率98.7%(296/300);初乳大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为99.5%(219/220),对其他常规抗生素的耐药率为100%(1/1),总耐药率100%(220/220);常乳大肠杆菌对氨苄西林和四环素的耐药率为40.8%(75/184),对其他常规抗生素耐药率为67.9%(74/109),总耐药率81.0%(149/184)。最终鉴定出39株无耐药性的大肠杆菌。PCR检测显示,39株无耐药性的大肠杆菌中大多数不含猪致病性大肠杆菌常见毒力基因(占比89.74%,35/39)。此外,无耐药性常乳大肠杆菌中含毒力基因的菌株占比仅为2.86%(1/35),无耐药性粪便大肠杆菌中含毒力基因的菌株高达75.0%(3/4)。【结论】仔猪阶段使用过抗生素防控病害的陆川猪,到生长成初产母猪后,从其肛门和乳腺中分离的大肠杆菌菌株中仍存在少数无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌菌株。其中,粪便中的无耐药性且无毒力基因大肠杆菌占比极少,仅为0.33%(1/300);分娩2 h内的初乳中未能分离出无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌,占比0%(0/220);但分娩后24~72 h内的常乳中仍存在较高比例的无耐药性且无毒力基因的大肠杆菌,占比18.48%(34/184)。

25株猪肠道无毒力且不耐药大肠杆菌的分离鉴定、生长特性及遗传进化分析

该研究旨在从猪肠道中分离出无毒力基因且无耐药性的大肠杆菌菌株,分析其生长性能和遗传进化关系,进行致病性大肠杆菌常见的13个毒力基因的PCR检测和7类(14种)抗生素敏感性试验。测定无毒力且不耐药菌株的生长曲线,构建16S rRNA基因系统进化树。结果显示,该研究共分离鉴定出206株大肠杆菌,107株大肠杆菌不含13种常规毒力基因,其中25株对7类(14种)抗生素敏感,这25株无毒力且不耐药大肠杆菌的生长曲线与3株典型大肠杆菌相似。16S rRNA进化树分析显示,有4株大肠杆菌与典型益生菌菌株的进化关系接近。综合生长曲线和16S rRNA进化树的结果,4株大肠杆菌可能是优质的猪肠道原生大肠杆菌菌株,具有研究潜力。

中药鉴定技术在中药房管理中的应用

当前各大医院的中药房管理普遍存在中药材采购不规范、储存不合理等问题,导致很多珍稀的中药材无法发挥出理想的药效,不仅降低了治疗效果,还会降低患者对中医药的信任。利用中药鉴定技术,可以大大提高中药房管理质量,保证中药材的有效成分。然而中药鉴定技术众多,怎样选择并科学应用,最大程度发挥出中药鉴定技术在中药房管理中的应用效果是关键。本文详细阐述了中药传统鉴定技术的理论基础与常用方法,并分析中药鉴定技术对中药材质量把控的作用以及在中药房管理中的应用方向,以期能够进一步提高中药鉴定技术在中药房管理中的应用效果。

基于“利益”视角下的“两免一补”政策分析

"两免一补"政策是我国政府对义务教育阶段学生就学实施的一项政策。主要内容是对义务教育阶段的学生"免学杂费,免课本费,补生活费"。国务院决定:从2008年秋季学期开始在全国范围内全面免除城市义务教育阶段学生的学杂费。这项政策有效的推行实施,将有利于全民素质的提高和国家的发展,对国家、社会、个人都具有利益。本文回顾了国家对义务教育的政策历史,分析了义务教育政策并进行了"两免一补"教育政策的利益分析,提出了推进"两免一补"政策实施的建议。

统计方法在心理与教育研究中的应用综述

心理与教育统计学是一门工具性学科,对研究心理学和教育学领域的诸多问题有着重要作用。本文通过文献查阅法,加以典型特例为代表逐一分析不同统计学方法在心理学与教育学文章中的应用,对近几年来心理与教育学统计方法在实际问题研究中的应用情况进行概述。

黑色素瘤免疫治疗耐药机制的研究进展

黑色素瘤作为恶性程度最高的皮肤肿瘤,具有发病率低、致死率高、生存期短的特点。随着对黑色素瘤发病机制的深入研究,基于免疫治疗的方法和药物不断涌现,彻底地改变黑色素瘤治疗现状,生存期显著延长。但免疫治疗耐药的出现影响了免疫治疗应用的临床疗效,因此对免疫治疗耐药机制的研究与总结显得尤为重要,本篇综述将从肿瘤微环境、基因突变、肠道菌群、代谢重塑等方面阐述黑色素瘤免疫治疗耐药机制的研究现状及治疗策略。

术前留置双J管时间对输尿管软镜治疗上尿路结石疗效的随机对照研究

目的探讨将双J管留置时间缩短为1周后,对输尿管软镜手术操作安全性和有效性的影响。方法随机将患者分为对照组和试验组,再根据结石直径最大径分为1.0 cm、1.0～1.5 cm和1.5～2.0 cm组,分别留置双J管2周和1周。术前统计发生血尿和下尿路刺激症状的患者人数,以及使用解痉药物(盐酸坦索罗辛、索利那新)的人数,统计术中留置输尿管鞘周径、手术时间、手术并发症和结石清除率,根据结石大小分组进行统计分析。结果试验组与对照组出现血尿及下尿路刺激症状者比较,差异无统计学意义,但对照组使用解痉药物明显高于试验组,试验组与对照组中留置12/14F和13/15F周径鞘比率,差异无统计学意义(P>0.05),但留置最大周径鞘14/16F输尿管鞘比率,差异有统计学意义(P <0.05),1.0 cm和1.0～1.5 cm两组术中平均手术时间、手术并发症、结石清除率试验组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但在1.5～2.0 cm结石患者中,平均手术时间和结石清除率两组比较,差异有统计学意义(P <0.05),两组手术并发症比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后拔管前复查B超结果显示,试验组结石残留率高于对照组。结论短期留置双J管能明显减轻患者痛苦,且对输尿管软镜操作无明显影响,安全有效,但对于相对复杂和较大结石(>1.5 cm),应该常规时间留置双J管。

高原地区体外循环术后异常的观察及护理

体外循环手术中，因灌注压力、时间、氧合等问题易造成脑血管痉挛、脑缺氧、脑检塞、脑水肿等多种精神、神经症状，只有细致的观察才能及时发现，综合治疗及护理，使病人早日康复。

浅谈幼儿园开展区角活动

区角活动是幼儿园一日活动中重要的教育形式之一,也是幼儿一种重要的自主活动形式,对幼儿的健康发展具有重要意义。随 着幼儿教育得到广泛重视,有效创设区角活动,促进幼儿自主全面发展已经成为新时代幼儿教育的重点,也是教育工作者的重要课题。论 文围绕幼儿园区角活动开展,通过文献调研、访谈咨询等方式,对当前存在的问题和有效创设的建议展开讨论和探究,为有效开展区角活 动提供参考和建议。