山药对卵巢切除大鼠骨质疏松症的治疗作用及其机理探讨

目的:探讨山药对卵巢切除所致大鼠骨质疏松症的治疗作用,并通过观察其对OB和MSC OPG、RANKL蛋白及其mRNA表达的影响,探索其作用机理。方法:将60只雌性Wistar大鼠随机分为5组,即空白对照组、假手术组、模型组、阳性对照组和山药组,每组12只。摘除大鼠双侧卵巢1个月后,灌胃给予山药水煎剂,共给药3个月。采用骨组织形态计量学的方法对大鼠胫骨不脱钙骨切片进行形态计量;采用免疫组化和原位杂交的方法分别检测OB和MSC OPG、RANKL蛋白及其mRNA的表达。结果:与模型组比较,山药组大鼠胫骨TBV%显著增高,TRS%以及TFS%、MAR、OSW和mAR均明显降低;同时OB和MSC OPG蛋白和mRNA表达皆显著增高,而RANKL蛋白和mRNA表达皆显著降低。结论:山药对卵巢切除所致的骨质疏松症具有明显的治疗作用,能促进OB和MSC OPG的表达并抑制RANKL的表达,是其能够治疗骨质疏松症的机理之一。

三种水蛭的薄层色谱与电泳法鉴别

中国的水蛭近百种,与医药有关的有十几种。《中国药典》(1990年版)收载了三种:(1)蚂蟥(宽体金线蛭,Whitmania pigra Whitman):(2)水蛭(日本医蛭,Hirudo nipponica Whitman);(3)柳叶蚂蟥(尖细金线蛭,Whitmaninia acranulata Whitman)。其中宽体金线蛭和尖细金线蛭是非吸血水蛭,日本医蛭是吸血小蛭。关于它们的理化鉴别方法,文献上未见报道。本文研究了日本医蛭和菲牛蛭Poecilobdella javanica及宽体金线蛭的薄层层析(TLC)、电泳(SDS-PAGE)鉴别方法。

降血压食品功能因子对造模性高血压大鼠功效的研究

目的 :建立药物诱发的高血压大鼠模型 ;通过观察实验性高血压大鼠评价降血压食品功能因子的降压效果。方法 :应用左硝基精氨酸诱导鼠高血压模型 ,分组给予食品及药物进行干预。结果 :模型组大鼠血压出现明显稳定的升高 ,实验各组血压及生化指标有不同程度改善。结论 :药物诱发的高血压大鼠模型成功 ,降血压食品功能因子有降压作用。

补肾益精方药对老年大鼠不同组织DNA TOPOⅡ活性的影响

目的 :研究补肾益精方药对老龄大鼠肝、肾、睾丸、脾DNATOPOⅡ活性的影响 ,初步探讨补肾益精方药抗衰老的机理。方法 :用雄性老年大鼠为肾虚模型 ,观察左归饮、益肾宝对TOPOⅡ活性的影响。结果 :老年大鼠TOPOⅡ的活性明显低于青年大鼠 ,经灌喂左归饮、益肾宝后 ,老年大鼠TOPOⅡ的活性显著提高。结论 :补肾益精方药能提高老年大鼠TOPOⅡ的活性 ,起到延缓衰老的作用。

3种检查方法对早期邻面龋诊断水平的评价

目的 :体外评价比较平行投照的牙合翼片 (BWR)、激光荧光法 (LF)和模拟临床检查 (CE)等 3种诊断方法对早期邻面龋的诊断水平。方法 :分别对模拟临床排列的 81颗离体牙的 162个早期龋损和正常邻面进行BWR、LF、CE检查 ,以组织学结果为金标准 ,评价准确性、敏感性、特异性 ,以及与组织学深度的相关性和一致性水平等指标。结果 :BWR的准确性、敏感性、一致性水平明显优于CE和LF ,但敏感度仍属中等 ,观察者自身一致性不理想。结论 :平行投照的BWR是目前较好的临床诊断方法 ,对于早期邻面龋有一定的诊断能力 ,但诊断水平尚有待提高。LF法诊断效果总体上不如BWR法 ,主要与其对于邻面的可操作性差有关。

基于右归饮与肾阳虚证方证相应关系探寻肾阳虚证标志蛋白质的初步研究

目的:探寻肾阳虚证动物模型大鼠肝、肾组织脏器的肾阳虚证标志蛋白质。方法:将大鼠分为对照组、模型组与给药组3组,对其肝、肾组织蛋白质提取液分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析。根据右归饮与肾阳虚证的方证相应关系,把右归饮将模型组差异表达的蛋白质调节为正常表达的那些蛋白质判定为肾阳虚证标志蛋白质。结果:在给药组的肝、肾组织中分别发现28和31个右归饮调节为正常表达的蛋白质点,这些蛋白质点即为肾阳虚证标志蛋白质。结论:以右归饮与肾阳虚证方证相应关系作为切入点,运用蛋白质组学技术探寻肾阳虚证标志蛋白质是可行的。

外伤血瘀证和阳虚血瘀证动物模型血液流变学的比较研究

目的:探讨外伤血瘀证和阳虚血瘀证的血液流变学变化。方法:外伤血瘀模型采用悬垂重物砸伤方法,阳虚血瘀模型采用禁食加冷冻的方法。结果:外伤血瘀模型组血浆纤维蛋白原浓度、活化部分凝血活酶时间、血小板聚集功能和凝血时间4项指标明显延长,凝血酶原时间、血浆黏度和凝血斜率明显下降。阳虚血瘀模型组纤维蛋白原浓度、血小板聚集功能、凝血时间明显下降,凝血斜率显著上升。结论:尽管两种血瘀证的血液流变学指标与各自对照组比较具有统计学意义,但两种血瘀证之间却有很大差别,不同原因导致的血瘀证在血液流变学层面是不同的。该结果可能对临床用药有参考意义。

左归饮与肾阴虚证方证相应机理的蛋白质组学研究

目的:采用蛋白质组学技术在蛋白质表达水平探讨左归饮与肾阴虚证方证相应的机理。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、肾阴虚证模型组与左归饮组3组,对其肝、肾组织蛋白质提取液及血清分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析,找出左归饮调节纠正的蛋白质,并进行质谱分析鉴定。结果:找出左归饮调节纠正的蛋白质点21个,质谱鉴定出18种蛋白质。结论:左归饮可以调节纠正肾阴虚证模型动物有关的糖代谢、脂肪代谢、信号传导等酶类非正常表达的蛋白质。

补肾益精方药对老年大鼠染色体端粒DNA重复序列长度的影响

目的 :观察补肾益精方药对老年大鼠细胞染色体端粒DNA重复序列长度的影响 ,探讨其延缓衰老的机理。方法 :以经方左归饮及自拟方益肾宝为补肾益精方药给予老年大鼠。以本实验室建立的PCR法测定老年大鼠肝、肾、睾丸及白细胞染色体端粒DNA重复序列的相对长度。用紫外分光光度计测端粒DNA扩增产物 ,以光密度值表示端粒DNA重复序列相对长度。结果 :左归饮和益肾宝两组大鼠除睾丸组织外 ,肝、肾和白细胞端粒DNA扩增产物光密度值均大于老年对照组 ,统计学处理具有显著性差异。结论 :左归饮和益肾宝补肾益精方药可使体细胞染色体端粒DNA重复序列减缓缩短 ,这可能就是补肾益精方药延缓机体衰老的作用机制之一。

关于中医证候物质基础研究路径的思考

证候均应有相应的方剂予以调整,否则该证候的命名和研究便失去了意义。如果此论可立的话,就可将某一方剂在治疗相应证候的患者或动物模型时所调节与纠正的那些物质视为该证候的物质基础,因为正是该方剂在机体内发挥其药理作用过程中调节与纠正了这些物质,才使该证候得以缓解或消失。蛋白质组学、代谢组学等新技术为找到这些物质提供了条件,从而为建立真正有意义的中医证候动物模型提供了进一步的可能。

一种检测端粒DNA重复序列相对长度的新方法—PCR法

目的 :为了观察补肾益精方药对端粒DNA重复序列长度的影响 ,创建一种新的简便的测定端粒DNA重复序列相对长度的方法。方法 :其原理是端粒DNA重复序列越长 ,其扩增产物越多 ,反之就少。根据端粒DNA重复序列 ,设计合成特殊的引物 ,引物 1为 5′CCCTAA3′ ,引物 2为 5′ ,TTAGGG3′ ,同时使用Taq和PfuDNA聚合酶 ,对端粒DNA重复序列进行PCR扩增。结果 :琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,端粒DNA重复序列得到扩增 ,λDNA对照没有扩增。结论 :端粒DNA重复序列确实得到了扩增 ,创建的此方法获得了成功。

基于蛋白质组学方法研究左归丸治疗去卵巢所致骨质疏松症大鼠的作用机制

目的基于蛋白质组学方法研究左归丸治疗去卵巢所致骨质疏松症大鼠的作用机制,进而为阐明"肾主骨"理论的科学内涵寻找实验依据。方法将60只雌性Wistar大鼠随机分为2组,正常对照组20只和造模组40只。造模组大鼠通过摘除双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症(PMOP)模型,正常对照组大鼠只摘取卵巢周围的少许脂肪组织。手术2周后,再将40只造模组大鼠随机分为模型组及左归丸组,各20只。左归丸组予左归丸水煎剂灌胃,正常对照组及模型组予等容积蒸馏水灌胃。给药3个月后,比较3组大鼠胫骨骨小梁体积百分比(TBV%)水平,取大鼠双侧股骨骨髓进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析,筛选出左归丸干预的相关蛋白,并进行质谱分析鉴定。结果模型组、左归丸组大鼠胫骨TBV%水平低于正常对照组(P<0.05),左归丸组大鼠胫骨TBV%水平高于模型组(P<0.05)。3组大鼠共筛选出23个差异蛋白质点,其中12个蛋白质点由于蛋白质分数不具有统计学意义而未得到鉴定,11个蛋白质点得到鉴定。检索数据库显示10号差异蛋白质点alpha-enolase为α-烯醇化酶,其免疫组化法检测显示模型组α-烯醇化酶阳性表达密度高于正常对照组(P<0.05),而左归丸组α-烯醇化酶阳性表达密度低于模型组(P<0.05),这与双向凝胶电泳图谱分析和质谱鉴定结果相一致。结论左归丸可能通过调节骨髓内与细胞增殖、分化、代谢、凋亡及氧化反应等相关蛋白质来实现对PMOP的防治作用,这些差异蛋白质可能与PMOP的发生发展具有一定的相关性。

利用蛋白质组学研究技术开展中药归经理论实质的研究

中药归经是用来表示药物作用定位的药性理论。归经理论源于《内经》，成于金元时代，再经后人的不断补充和发展，至明清时代已发展成系统理论，成为中药理论的重要组成部分之一，并用来指导临床用药。

Genefinder和EB在DNA电泳谱带定量分析中的比较

[目的]比较Genefinder和EB对DNA电泳谱带定量分析的影响。[方法]用加入Genefinder或EB的琼脂糖凝胶进行PBR322DNA电泳,并用凝胶成像分析系统进行标准曲线相关性等分析。[结果]用Genefinder作染料,标准曲线相关性、样品含量百分误差、灵敏度等都比EB好。[结论]用Genefinder作染料不仅提高了定量分析的质量,而且安全、无污染,有利于保护环境。

基于方证相应学说探寻肾阴虚证的标志蛋白质

目的:基于方证相应学说,运用蛋白质组学技术探寻肾阴虚证的标志蛋白,以期在蛋白质表达水平找到肾阴虚证的物质基础,进而阐述肾阴虚证的发生机理。方法:将昆明系雄性小鼠随机分为老年肾虚证模型组、左归饮组与青年正常对照组3组,对其肝、肾、睾丸组织蛋白质提取液及血清分别进行蛋白质双向电泳并对电泳图谱进行分析,找出左归饮调节纠正的蛋白质进行质谱分析鉴定和Wstern-blot验证。结果:找出左归饮调节纠正的蛋白质点24个,质谱鉴定出20个蛋白质。结论:找到并鉴定了一组肾阴虚证标志蛋白质,根据蛋白质的功能在蛋白质表达水平初步探讨了肾阴虚证的发生机理。

端粒与中医补肾益精的关系

端粒是染色体末端独特的DNA———蛋白质结构 ,在保护染色体的完整性和维持细胞的复制能力方面起着重要的作用。端粒的长度随着年龄和细胞分裂次数的增加而逐渐变短 ,因而导致染色体不稳定 ,因此端粒长度的变化与细胞衰老密切相关。中医理论认为 ,补肾益精可以延缓衰老 ,很有可能正是通过补肾益精使端粒获得了稳定 ,从而控制了细胞的衰老。

“时相药法”对跆拳道运动员血清一氧化氮、一氧化氮合酶的影响

目的:为探讨运动疲劳相关的一氧化氮(NO)机制及中医药消除运动疲劳的方法提供实验依据。方法:以15名跆拳道专业运动员为对象,每天辰时服用“激活颗粒”,戌时服用“修养胶囊”,连续3周,同时以安慰剂作对照,检测了血清NO、一氧化氮合酶(NOS)的变化。结果:与对照组相比,中药组运动员血清NO水平升高41.7%,NOS活性升高51.5%,但没有超过对照组最高值53.6±12.0umol/L与2.03±1.62ug/ml,两组运动员血清NO水平有显著性差异(P<0.05)。结论:“时相药法”具有将运动员血清NO、NOS维持在较高的生理水平的作用,提示该作用有利于改善骨骼肌、心肌的血供以及改善睡眠,因此有利于消除运动疲劳。