水蛭不同工艺提取物抗凝与纤溶活性比较及酶解物组成分析

目的:比较水蛭不同提取工艺的抗凝溶栓作用;初步确定水蛭酶解产物的化学成分组成。方法:通过活化部分凝血活酶时间(APTT)试验及纤维蛋白平板试验,比较水蛭胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶酶解、仿生酶解、醇提、水煎提取物的体外抗凝与纤溶活性差异。采用Sephadex G-100凝胶柱色谱法对优选提取物进行进一步分离纯化,并采用MALDI-TOF-质谱法对其组成进行分析。结果:与生理盐水组比较,在相同的剂量下,水蛭胃蛋白酶酶解物可明显延长大鼠APTT,并具有较强的纤溶作用,其余几种提取物的作用不明显。胃蛋白酶酶解物经Sephadex G-100凝胶柱色谱分离纯化的活性部位经MALDI-TOF-质谱法检测为分子量在700～3 200之间的一组寡肽。结论:胃蛋白酶酶解是水蛭较为理想的提取方法,其有效部位的组成为寡肽。

土鳖虫胰酶酶解物抗凝活性部位分离纯化及组成分析

目的:采用溶剂萃取和凝胶柱色谱法对土鳖虫胰酶酶解物进行分离纯化,初步确定其抗凝活性部位及化学成分组成。方法:应用胰酶酶解法制备土鳖虫胰酶酶解物,以APTT(活化部分凝血酶时间)为指标,采用溶剂萃取法,获得抗凝活性部位IV,经凝胶柱色谱法对其进行分离纯化获得胰酶酶解纯化物;采用考马斯亮蓝法对纯化物进行定量分析,通过MALDI-TOF-MS检测分离部分的分子量分布范围。结果:土鳖虫胰酶酶解物部位IV有较强的抗凝活性,其抗凝活性强度与酶解物质量浓度相关;部位IV经Sephadex G-25纯化后,通过考马斯亮蓝法测得其蛋白质量分数5.5%;进一步经Sephadex G-10脱盐的纯化物,采用MALDI-TOF-MS检测,确定为相对分子质量在850～910 Da的3组多肽混合物。结论:采用凝胶柱色谱法分离纯化土鳖虫胰酶酶解物是可行的,抗凝活性组分是<1 000 Da的小分子肽类。