翻转课堂在临床小讲课教学中的应用

目的探析翻转课堂在临床小讲课教学中的实践效果,为临床教学改革创新提供依据。方法在2018年1月—2021年12月开展教学研究,将2020—2021年在武汉大学第二临床学院胃肠外科及甲乳外科实习的55名本科专业学生作为试验组,以2018—2019年相同科室实习的55名本科专业学生作为对照组;其中,对照组采用传统小讲课教学法,组采用“翻转课堂”教学法,在教学完成后通过考核测试两组专业理论成绩、临床操作成绩及病案分析成绩,并用自学能力评分表、批判性思维能力量表评估两组学生的自学能力和临床思维能力,并调查学生的临床教学满意度。结果在临床教学完成后考核,试验组专业理论知识、临床实践操作及临床病案分析的分数为(96.32±1.84)分、(95.54±2.08)分、(95.26±2.15)分,对照组分别为(90.21±2.33)分、(88.91±2.32)分、(86.22±2.52)分,差异有统计学意义(P<0.05)。通过评估,试验组实习后的批判性思维能力、自学能力均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),在实习前组间差异无统计学意义(P>0.05)。试验组临床教学满意度为96.36%,显著高于对照组的76.36%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论在临床小讲课教学中应用翻转课堂教学法,有助于提高实习生的学习成绩,提升临床思维能力和自学能力,且受到临床实习生的欢迎。

PQ401的体内外抗炎效应研究

目的研究胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF-1R)的选择性抑制剂PQ401在体内外的抗炎效应。方法体外实验:小鼠RAW264.7细胞株经0.1、1、10μmol/L PQ401预作用1 h后,加入10μg/m L脂多糖(LPS)作用12 h,采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β、IL-6)的含量。另将小鼠RAW264.7细胞株经10μmol/L PQ401预作用1 h后,加入10μg/m L LPS作用6、12、24 h后再次检测以上指标的变化。体内实验:将50只成年雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组和不同剂量PQ401组,每组10只。腹腔注射LPS 10 mg/kg制备急性炎症反应小鼠模型,对照组腹腔注射等量二甲基亚砜(DMSO),PQ401组分别腹腔注射LPS 10 mg/kg和PQ401 25、50、100 mg/kg。于给药12 h后通过ELISA检测血清和肝组织中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量;用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及总胆红素(TBil)水平;采用Western blot检测肝细胞核内核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的含量。结果与LPS单独作用组相比,PQ401呈浓度和时间依赖性降低RAW264.7细胞上清中TNF-α、IL-1β、IL-6的水平。在LPS诱导的小鼠急性腹膜炎模型中,小鼠经LPS注射12 h后表现为精神萎靡、活动减少,而PQ401组小鼠的精神状态、活动均好于模型组。PQ401治疗后能有效降低LPS所致急性腹膜炎小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6的含量,降低肝组织TNF-α、IL-1β的水平和NF-κB p65的含量。结论 PQ401在体内外对LPS诱导的炎症因子分泌具有明显的抑制效应。

肝门部胆管癌的诊治进展

肝门部胆管癌（hilar cholangiocarcinoma,HCCA）也称Klatskin肿瘤,是指位处于胆管分叉2cm以内的胆管细胞癌。其解剖位置特殊,肿瘤易侵袭、浸润,手术处理难度很高。在几十年以前手术治疗只能达到缓解作用且普遍效果不佳,最近20年由于术前影像技术的进步和对肿瘤生长特性认识的加深,手术治疗效果有了明显的改善。现将肝门部胆管癌的诊治进展作一综述。1临床特征1.1流行病学胆管细胞癌是仅次于肝细胞癌的肝脏第2原发肿瘤,其发病率逐年上升。在美国,每年有近5 000例的新发病例被检出,约占所有消化道肿瘤的3%。胆管细胞癌中近60%～70%的位于肝门部,20%～30%位于远端胆管,

血清胎球蛋白A、基质金属蛋白酶14在胃癌中表达及意义

目的探讨血清基质金属蛋白酶14(MMP-14)、胎球蛋白A(AHSG)在胃癌中的表达及其临床意义。方法选取自2010年1月至2013年1月收治的160例胃癌患者纳入胃癌组,另选同期160例健康体检者纳入健康组,比较两组血清MMP-14、AHSG水平;根据肿瘤病灶直径、病理组织分化、病理组织类型、TNM分期及淋巴结转移等临床病理特征比较血清MMP-14、AHSG水平差异;Kaplan-Meier生存曲线评估血清MMP-14、AHSG水平与胃癌患者术后5年总存活率的关系。结果胃癌组患者血清MMP-14、AHSG水平高于健康组,两组间比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、肿瘤组织分化、淋巴结转移、远处转移胃癌患者的血清MMP-14、AHSG水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。联合检测曲线下面积为0.877(95%可信区间0.812~0.941,P=0),敏感度和特异度分别为0.870和0.833。Kaplan-Meier生存分析显示,血清MMP-14低水平患者的存活率高于血清MMP-14高水平患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清AHSG低水平患者的存活率高于血清AHSG高水平患者,差异有统计学意义(P<0.05)。单因素和多因素分析结果显示,肿瘤TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)、肿瘤低分化、淋巴结转移、血清MMP-14、AHSG水平升高是影响胃癌患者预后的独立危险因素。结论AHSG、MMP-14在胃癌患者血清表达水平升高,两者联合检测有助于评估胃癌患者的生存预后。

全腹腔镜与腹腔镜辅助右半结肠切除术治疗右半结肠癌临床研究

目的比较全腹腔镜右半结肠切除与腹腔镜辅助右半结肠切除治疗右半结肠癌的临床效果。方法分析常州市第二人民医院2020年10月至2023年10月收治的82例施行腹腔镜下右半结肠切除术患者资料, 全腹腔镜组和腹腔镜辅助组各41例。使用t检验、χ^(2)检验或确切概率法对比分析全腹腔镜组及腹腔镜辅助组的术中指标(手术时间、淋巴结清扫数目)及术后指标(术后排气时间、住院时长、辅助切口长度、术后疼痛程度、并发症例数), 两组比较采用t检验。结果全腹腔镜组手术时间[(152.76±8.84) min比(151.59±9.31) min, t=0.086, P>0.05]、淋巴结清扫个数[(21.27±1.52)比(21.65±1.41), t=0.065, P>0.05]、并发症发生率[19.5%(7/41)比17.1%(8/41), χ^(2)=0.085, P>0.05]与腹腔镜辅助组基本相似, 差异均无统计学意义。全腹腔镜组术后排气时间明显早于腹腔镜辅助组[(2.00±0.24) d比(3.14±0.37) d, t=11.209, P<0.01];住院时间明显短于腹腔镜辅助组[(6.03±0.24) d比(7.40±0.35) d, t=12.976, P<0.05];术后疼痛程度明显低于腹腔镜辅助组[(2.49±0.51)分比(4.32±0.47)分, t=6.101, P<0.05];辅助切口长度明显短于腹腔镜辅助组[(3.91±0.25) cm比(5.37±0.49) cm, t=16.055, P<0.01], 差异均有统计学意义。结论右半结肠癌患者行全腹腔镜右半结肠切除可有效减小辅助切口长度, 减轻术后疼痛程度, 缩短患者住院时长, 促进术后康复, 更符合快速康复理念, 疗效显著。

胍丁胺对脂多糖诱导急性肝损伤的保护作用

目的观察胍丁胺（AGM）对脂多糖（LPS）诱导急性肝损伤的保护作用，并探讨其作用机制。方法将60只成年C57BL／6小鼠按随机数字表法分为对照组（20只，腹腔注射磷酸盐缓冲液10mg／kg）、模型组（20只，腹腔注射LPS10mg／kg）和胍丁胺组（20只，腹腔注射LPS10mg／kg和胍丁胺200mg／ks），各组于制模后6h和24h分别处死10只小鼠，采集血和肝组织制备组织匀浆。制模后6h采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清和肝组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-6）的含量；制模后24h用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及总胆红素（TBil）水平；制模后6h采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肝细胞核内核转录因子-κB（NF—κB）p65的含量；制模后24h观察肝组织病理学改变。结果制模后6h，模型组小鼠表现为精神萎靡、蜷缩少动、禁饮食水；胍丁胺组小鼠精神和活动明显好于模型组。胍丁胺治疗后能有效降低LPS所致急性肝损伤小鼠血清中TNF—α（μμg／L：296．3±42．5比627．2±81．3，t=7．327，P=0．002）、IL-1β（μg／L：109．1±12．3比264．2±18．8，t=11．958，P=0．001）、IL-6（mg／L：11．4±1．9比23．6±2．5，t=6．729，P=0．003）、ALT（U／L：107．94±8.5比189．9±13．6，t=8．856，P=0．001）、AST（U／L：347．4±24．9比716．8±60．4，t=9．793，P=0．001）、TBil（μmol／L：8．3±0．9比10．6±0．5，t=3．869，P=0．018）的含量，减少肝组织TNF—α（ng／g：287．4±32．5比461．5±31．4，t=6．673，P=0．003）、IL—1β（pg／g：146．7±13．5比351．6±28．7，t=11．190，P=0．001）和核内NF—κBp65蛋白表达[NF—κBp65／核内参（灰度值）：0．515±0．060比0．853±0．080，t=5．849，P=0．0043。LPS注射后24h肝脏出现明显病理改变，如肝细胞肿胀、坏死、充血和炎性细胞浸润等；胍丁胺治疗后肝组织损伤明显缓解。结论胍丁胺可能通过抑制LPS诱导的NF—κB入核，减少炎症因子的合成和释放．进而减轻小鼠肝组织的损伤。

短期规范化临床技能强化培训对外科基本技能水平的影响

目的探讨短期规范化临床技能强化培训对外科基本技能水平的影响。方法选择2018年5月至2019年12月在该院胃肠外科轮转的住院医师规范化培训(简称规培)和实习医生共289人作为研究对象。对所有学员实施包括入科标准化模拟教学、临床递进式操作培训和站式考核3部分内容的短期(3~4周)规范化临床技能强化培训,比较培训前后不同学员类别、规培年限等结扎和缝合技能评分,评估培训效果。结果在基线评估时结扎技能评分低于60分13人,缝合技能评分低于60分19人,培训后低于60分均仅有1人。培训前后规培医师结扎、缝合技能评分均高于实习医生,差异有统计学意义(P<0.001)。和入科时基线评分相比,无论学员类别、规培年限,培训后的结扎、缝合技能出科评分均明显升高(P<0.001)。结论短期规范化临床技能强化培训能提高外科基本技能水平。

微小RNA-6791-5p靶向磷酸呋喃酸性簇分选蛋白2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-6791-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭功能的影响及其分子机制。方法采集培养人结直肠癌细胞系RKO、SW480、DLD1、HCT116以及人正常结肠上皮细胞NCM460。通过反转录实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-6791-5p在各细胞系中的表达水平(表达倍数为0.52±0.04、0.83±0.06、0.60±0.12、0.68±0.07),并构建miR-6791-5p模拟物(miR-6791-5p mimic)及其阴性对照Negative control,并将其转染至RKO细胞。使用RT-qPCR检测miR-6791-5p和PACS2 mRNA的表达水平(表达倍数为0.468±0.032)。利用蛋白质印迹法(Western blot)检测PACS2蛋白的表达水平[RKO:(51.590±6.018)%]。使用两样本t检验进行统计分析,结果以均数±标准差(±s)表示,以P<0.05为差异有统计学意义。结果miR-6791-5p在人结直肠癌细胞系表达水平显著低于人结肠上皮细胞,其中RKO和DLD1下调最明显(RKO组低于460组:0.52±0.04比1.00、DLD1组低于460组0.60±0.12比1.00),差异有统计学意义(RKO:t=17.811,P<0.0001;DLD1:t=5.372,P<0.01)。RKO转染后,mimic组miR-6791-5p表达水平高于mimic NC组(3.28±0.44比1.00),差异有统计学意义(RKO:t=8.764,P<0.01)。细胞计数试剂(CCK-8)检测表明mimic组24、48、72、96 h细胞吸光度值显著低于mimic NC组(24 h吸光度值为0.185±0.004比0.250±0.030,48 h吸光度值为0.275±0.040比0.376±0.020,72 h吸光度值为0.497±0.120比0.657±0.010,96 h吸光度值为0.691±0.004比0.905±0.019),差异有统计学意义(RKO:t=10.821,P<0.01)。平板克隆实验表明mimic组集落形成数低于mimic NC组(115.70±12.51比176.00±19.18),差异有统计学意义(RKO:t=4.581,P<0.05)。划痕愈合实验显示miR-6791-5p mimic组划痕愈合率低于NC组[(14.960±0.848)%比(36.480±1.340)%],差异有统计学意义(t=23.491,P<0.0001)。Transwell迁徙和侵袭实验显示穿透微孔膜的细胞数mimic组低于mimic NC组(迁移数目miR-6791-5p mimic组比NC组42.330±3.512比125.700±7.760,侵袭数目分别为54.33±4.16比159.30±7.76),差异有统计学意义(Transwell迁移t=16.931,P<0.01)、(Transwell侵袭t=20.641,P<0.01)。在线靶预测软件(miRWalk、mirtarbase、targetscan)预测miR-6791-5p可能的靶基因,并通过qRT-PCR及Western blot验证,mimic组PACS2的mRNA及蛋白表达水平低于mimic NC组[比例为(51.590±6.018)%比1.00],差异有统计学意义[mRNA(RKO:t=27.951,P<0.0001);Western blot(RKO:t=13.931,P<0.001)]。结论miR-6791-5p在结直肠癌细胞中低表达,过表达miR-6791-5p能抑制结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,并且明显下调PACS2的mRNA和蛋白表达水平,说明miR-6791-5p可能通过PACS2调控结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

Delta吻合在全腹腔镜远端胃癌根治术消化道重建中的安全性和远期疗效的临床分析

目的:探讨Delta吻合在全腹腔镜远端胃癌根治手术中手术技巧、安全性及远期疗效。方法:回顾性分析我院41例在2015年7月—2021年8月实施全腹腔镜远端胃癌根治术Delta吻合的关注指标、围手术期情况、并发症和远期生存疗效。对手术和重建时间、术中出血量、手术切口长度、疼痛感、下床、通便和进食时间、术后并发症、住院日、淋巴结清扫数目、营养状况等进行分析。术后均全程随访,随访截止日期为2021年8月31日。结果:41例患者均顺利进行手术,手术时间为165(147,184)min,消化道重建时间为51(43,77)min,术中出血量为85(60,110)mL,腹壁切口长度4~6 cm,38例患者在术后1~2 d拔除胃管,均未发现明显的吻合口出血。所有患者均无明显的术后疼痛,在术后1~2 d下床运动。37例患者在手术3~5 d之内恢复肠道通气。35例患者术后4 d内进流质饮食。41例均未出现伤口感染和腹腔感染,6例患者出现肺部感染,5例患者出现淋巴瘘。全部患者均未出现吻合口漏、吻合口狭窄和吻合口出血。分别有2例患者出现反流性胃食管炎和胃功能不全。术后住院时间平均(6.0±1.7)d。全组患者未出现手术相关死亡。所有病人均行标准的D2根治手术,清扫淋巴结数量为36(28,48)枚,阳性淋巴结数量为2(0,3)枚。术后TNM分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期分别有16例、23例和2例。全部患者均获得全程跟踪随访,随访率100%,术后1月内复查患者总蛋白和血清蛋白以及前白蛋白,均恢复到正常值水平。在随访期内未发现肿瘤复发或者转移。结论:Delta吻合在腹腔镜胃癌根治性术消化道重建中是安全可行的,可提高患者术后生存质量,同时可获得良好的远期疗效。

长程2型糖尿病对胰腺导管腺癌肿瘤相关巨噬细胞和预后的影响

目的探讨病程较长(≥3年)的糖尿病是否影响胰腺癌中肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的极化,以及对胰腺癌患者预后的影响。方法收集2011年至2016年在武汉大学中南医院接受胰腺癌手术的患有长程2型糖尿病或无糖尿病患者的标本83例。采用免疫组织化学法分析组织切片中CD68和CD163的表达。运用Kaplan-Meier曲线和Log-rank检验分析生存曲线,Cox回归模型进行单因素和多因素分析。结果长程2型糖尿病(DM)组的CD68^(+)TAMs(P<0.05)、CD163^(+)TAMs(P<0.01)及CD163^(+)/CD68^(+)比例(P<0.01)均高于非糖尿病(NDM)组,差异有统计学意义。长程2型糖尿病与患者的组织分化程度、局部浸润和CA19-9的水平明显相关(P均<0.05)。长程2型糖尿病和CD163^(+)/CD68^(+)比例是无复发生存期(RFS)和总生存期(OS)的独立影响因素(P均<0.05),长程2型糖尿病明显缩短患者的RFS和OS。结论长程2型糖尿病与胰腺癌的恶性程度明显相关,并吸引更多的巨噬细胞聚集于肿瘤中,这些巨噬细胞同时大量极化为M2型TAMs。长程2型糖尿病和CD163^(+)/CD68^(+)比例是RFS和OS的独立影响因素。

早期胃癌淋巴结转移列线图预测模型的建立及验证

目的:构建列线图预测模型以预测早期胃癌患者淋巴结转移,以分选不适宜内镜下切除的早期胃癌患者。方法:收集2004年至2016年SEER数据库中诊断为早期胃癌并接受手术的4035例患者的临床病理资料并进行随机分为主要队列和验证队列。采用单因素和多因素Logistic回归分析确定早期胃癌淋巴结转移的危险因素并构建列线图模型。ROC曲线、C指数及校准曲线评估列线图模型的预测准确性和判别能力,决策曲线分析评估模型的临床应用价值。在内部验证队列中对模型进行内部验证。结果:本研究共纳入早期胃癌4035例,其中774例(19.2%)发生淋巴结转移。多因素Logistic回归分析显示,年龄、分化程度、肿瘤大小和浸润深度是早期胃癌淋巴结转移的独立危险因素。据此构建列线图预测模型,校准曲线显示预测概率与实际概率之间具有良好的一致性,C指数为0.702。列线图在内部验证队列中也有很好的区分度(C指数=0.708)和良好的校准。临床决策曲线分析表明该列线图预测模型的临床应用价值。结论:基于SEER数据库构建预测早期胃癌淋巴结转移风险的列线图模型具有良好预测能力,有助于为早期胃癌患者做出合适的临床决策。

应用生物信息学方法筛选与验证肝癌预后相关的关键基因

目的通过生物信息学方法筛选出肝癌中的关键基因,并预测其在肝癌发生中的潜在分子机制及其对肝癌预后的影响。方法通过基因表达综合数据库(GEO)下载3个肝癌微阵列数据集,进行差异分析并取其交集。利用DAVID数据库对187个差异表达基因(DEGs)进行功能富集分析。通过STRING数据库及Cytoscape软件构建DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络及筛选关键基因。利用GEPIA、GSCALite数据库进行关键基因通路、表达验证及预后分析。结果获得185个3个数据集交集的DEGs,包括54个上调基因和131个下调基因,这些基因生物功能主要富集在细胞分裂和细胞凋亡,主要参与细胞周期、DNA复制、Rap1信号通路的调节。在PPI网络中筛选出10个关键基因,分别为胸苷激酶1(TK1)、细胞分裂周期相关5(CDCA5)、甲状腺激素受体相互作用体13(TRIP13)、着丝粒蛋白M(CENPM)、异常纺锤形微管组件(ASPM)、着丝粒蛋白F(CENPF)、微型染色体维护复合体组件49(MCM4)、霍利迪连接体识别蛋白(HJURP)、母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)、非染色体结构维护凝缩蛋白Ⅰ复合体G亚基(NCAPG)。关键基因在肝癌中高表达,除UBE2C外,关键基因高表达与肝癌患者总生存率低相关。结论关键基因与肝癌的发生和预后不良有关。

微小RNA-17-5p通过抑制转移生长因子β受体2的表达促进结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA(miR)-17-5p对人结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭功能的影响及其机制。方法培养人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116和人正常结肠上皮细胞NCM460,以上细胞购自美国典型培养物保藏中心。利用反转录实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-17-5p在各细胞系内的表达,构建miR-17-5p抑制剂miR-17-5p inhibitor及其阴性对照negative control并转染至RKO细胞,分别设为miR-17-5p抑制剂(miR-17-5p inhibitor)组和阴性对照(NC)组。qRT-PCR法检测miR-17-5p表达。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活性。平板克隆实验检测细胞克隆形成能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力。qRT-PCR和蛋白印迹法(Western blot)检测转染后细胞内转移生长因子β受体2(TGFBR2)表达水平变化。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA)。结果人结直肠癌细胞RKO、SW620、LOVO、HCT116中miR-17-5p的表达倍数均高于人正常结肠上皮细胞NCM460(3.22±0.72、1.99±0.36、2.26±0.51、1.77±0.60比1.07±0.05,F=5.153,P<0.05),差异有统计学意义。miR-17-5p inhibitor组miR-17-5p表达水平低于NC组(0.55±0.07比1.03±0.06,t=9.714,P<0.05),差异有统计学意义。CCK-8实验证实miR-17-5p inhibitor组细胞增殖能力低于NC组(24、48、72、96 h吸光度值分别为(0.21±0.00比0.33±0.03,0.33±0.01比0.54±0.01,0.54±0.02比0.79±0.00,0.83±0.05比1.10±0.08,t=5.041、16.840、17.530、3.977,P<0.05),差异有统计学意义。平板克隆实验提示miR-17-5p inhibitor组细胞克隆形成能力低于NC组[克隆形成数目(327.33±9.53)个比(504.67±10.96)个,t=27.290,P<0.05],差异有统计学意义。划痕及Transwell实验结果显示,miR-17-5p inhibitor组细胞迁移及侵袭能力显著低于NC组[划痕实验细胞迁移率(16.83±1.21)%比(35.70±1.04)%,Transwell迁移实验细胞迁移数目(46.00±3.27)个比(146.33±4.92)个,Transwell侵袭实验细胞侵袭数目(131.00±5.35)个比(243.00±5.10)个,t=16.700、24.020、21.420,P<0.05],差异有统计学意义。生物信息学预测并筛选出miR-17-5p靶基因TGFBR2,qRT-PCR法检测提示miR-17-5p inhibitor组TGFBR2 mRNA表达水平高于NC组(3.22±0.81比0.99±0.07,t=3.888,P<0.05),差异有统计学意义;Western blot结果表明miR-17-5p inhibitor组TGFBR2蛋白表达水平高于NC组。结论miR-17-5p在结直肠癌中表达升高,并且可以通过调控TGFBR2表达水平促进结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

基于生物信息学分析筛选三阴性乳腺癌相关的预后标志物

目的分析三阴性乳腺癌(TNBC)与非三阴性乳腺癌(non-TNBC)的基因表达谱,寻找可能参与TNBC发生发展的差异表达基因(DEGs)。方法从GEO数据库下载4个mRNA芯片数据集进行分析,获得基因表达谱。通过STRING和Cytoscape构建了DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,并筛选出核心基因。京东基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)用于功能富集分析。使用UCSC、Oncomine和Kaplan-Meier在线网站来分析核心基因的表达和生存水平。结果在TNBC和non-TNBC中共识别出287个DEGs和10个核心基因。Kaplan-Meier生存曲线显示,TNBC患者表皮生长因子受体(EGFR)高表达或ESR1、胰岛素样生长因子(IGF)-1低表达与更差预后相关。Non-TNBC患者的预后特征与TNBC患者差异有统计学意义(P<0.05)。结论ESR1、EGFR和IGF-1可能导致TNBC的不良预后与复发。

应用生物信息学方法对着丝粒蛋白L进行泛癌中的免疫分析

目的探究着丝粒蛋白L(CENPL)在泛癌中的表达,并研究CENPL表达与免疫浸润之间的关系。方法通过人类蛋白质图谱(HPA)和TIMER数据库探讨CENPL在人体正常组织及33种癌症类型中的基因表达情况。应用R语言计算了33种癌症的免疫细胞浸润、ESTIMATE评分、肿瘤突变负荷(TMB)、微卫星不稳定性(MSI)及免疫检查点基因相关性。结果CENPL的mRNA表达水平在16种肿瘤中高于相对应的癌旁组织(P<0.01)。CENPL表达与31种肿瘤中的免疫细胞浸润相关(P<0.05)。此外,CENPL的表达水平与免疫评分相关性最高的肿瘤是肾上腺皮质癌(R=-0.43,P<0.01);基质评分相关性最高的肿瘤是睾丸癌(R=-0.43,P<0.01);免疫综合评分相关性最高的肿瘤是肾上腺皮质癌(R=-0.39,P<0.01)。CENPL表达与18种肿瘤的TMB呈正相关,与2种癌症的TMB呈负相关。CENPL表达与5种癌症的MSI呈正相关,与3种癌症的MSI呈负相关(P<0.05)。在肾透明细胞癌中,CENPL的表达与40个免疫检查点的表达具有显著相关性(P<0.05),差异有统计学意义。结论CENPL在泛癌中表达升高,与多种癌症的免疫浸润相关。

基于生物信息学分析筛选与鉴定结直肠癌的关键生物标志物

目的通过生物信息学分析结直肠癌组织与正常癌旁组织的基因表达数据集,筛选出参与并影响结直肠癌发生发展的关键差异表达基因。方法从基因表达谱(GEO)数据库中下载3个结直肠癌组织信使RNA(mRNA)芯片数据集,为数据集GSE35279,数据集GSE50746和数据集GSE87211,共包括173个正常癌旁组织和297个结直肠癌组织。进行分析筛选,获得差异表达基因(DEGs)。使用标注可视化和集成发现数据库(DAVID)用于富集分析。通过STRING和Cytoscape数据库构建蛋白与蛋白相互作用网络,并得到关键DEGs。利用UALCAN、基因表达谱动态分析(GEPIA)等数据库分析关键基因的表达和生存分析,使用Log-rank检验方法。结果在结直肠癌和正常癌旁组织中共识别出212个DEGs和10个核心基因。GEPIA总生存期曲线显示,金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP1)、分泌型磷蛋白1(SPP1)、蜗牛家族转录抑制因子1 (SNAI1)和胰高血糖素(GCG)的表达水平与结直肠癌患者总体生存率有关。高表达组TIMP1、SPP1和SNAI1结直肠癌患者总体生存率分别显著低于低表达组患者,并且低表达组GCG结直肠癌患者总体生存率显著低于高表达组患者,其结果具有统计学意义(P<0.05)。结论筛选出4个结直肠癌临床诊断和预后的生物标志物,为进一步研究结直肠癌发病分子机制以及早期诊断和预后提供基础依据。

结直肠癌免疫检查点治疗现状与展望

免疫检查点抑制剂(ICIs)的出现,开启了肿瘤免疫治疗的新时代。对于高度微卫星不稳定(MSI-H)结直肠癌患者,ICIs往往有较好疗效,其临床应用也逐渐从晚期后线移至一线治疗;然而对于微卫星稳定(MSS)结直肠癌患者,ICIs单药并无明显作用。近年来,随着ICIs联合放化疗等治疗方案的应用,ICIs治疗MSS型结直肠癌患者效果得到改善。本文拟对近年来免疫检查点治疗在结直肠癌上的应用进行总结与展望。

微小RNA-519d-3p靶向DCAF4L2抑制结直肠癌增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620,同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示,采用两样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降,其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO:(0.311±0.165)倍比1.000倍,t=7.783,P<0.05;SW620:(0.354±0.079)倍比1.000倍,t=15.72,P<0.01],差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p,过表达组表达倍数高于对照组[RKO:(2.913±0.602)倍比1.000倍,t=5.409,P<0.01;SW620:(3.194±0.427)倍比1.000倍,t=8.765,P<0.001],差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示,过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO:0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021,t=3.064,P<0.01;SW620:0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032,t=2.432,P<0.01),差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO:(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个,t=7.127,P<0.05;SW620:(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个,t=9.387,P<0.05],差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO:(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%,t=394.900,P<0.01;SW620:(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%,t=21.350,P<0.01],差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组,迁移实验[RKO:(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个,t=44.290,P<0.01;SW620:(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个,t=16.090,P<0.01],差异有统计学意义;侵袭实验[RKO:(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个,t=33.950,P<0.01;SW620:(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个,t=50.980,P<0.01],差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测,并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示,DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC,过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组,mRNA表达倍数[RKO:(0.170±0.050)倍比1.000倍,t=18.400,P<0.01;SW620:(0.256±0.069)倍比1.000倍,t=26.800,P<0.01],差异有统计学意义;蛋白倍数[RKO:(45.504±6.076)%比100.000%,t=15.540,P<0.01;SW620:(43.567±3.760)%比100.000%,t=26.000,P<0.01],差异有统计学意义。结论结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降,并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。

维甲酸诱导2基因表达上调抑制胰腺癌SW1990细胞裸鼠皮下移植瘤的生长

目的观察维甲酸诱导2基因(RAI2)表达对胰腺癌生长的作用。方法设计并合成成慢病毒RAI2过表达质粒和阴性对照慢病毒,并在胰腺癌细胞系SW1990中进行慢病毒感染实验建立RAI2过表达细胞株,然后利用荧光定量PCR检测RAI2 mRNA水平的表达验证过表达效率。利用裸鼠皮下移植瘤模型检测RAI2过表达组和阴性对照组细胞的生长,采用Student t检验进行统计学分析。结果慢病毒感染1周后,RAI2过表达组SW1990细胞RAI2 mRNA的过表达率为(87.5±4.9)%,差异有统计学意义(t=-10.281,P<0.01)。裸鼠皮下移植瘤实验表明,与阴性对照组比较,RAI2过表达组肿瘤体积[(112.46±39.24)mm^(3)比(544.85±94.43)mm^(3),t=6.585,P<0.05]和重量[(90.83±46.53)mg比(428.60±112.60)mg,t=7.325,P<0.05]均低于阴性对照组。结论RAI2基因表达上调抑制胰腺癌的生长。

应用生物信息学的方法筛选验证胃癌预后相关的关键基因

目的基于生物信息学的方法分析胃癌的基因表达谱,探讨可能参与胃癌发生发展及影响其预后的差异表达基因(DEGS)。方法从基因表达综合数据库(GEO)数据库下载3个mRNA芯片数据集GSE33651、GSE54129和GSE118916进行分析,获得基因表达谱,以差异倍数[|log Fc(foldchange)|]>1、校正后P值(adjP)<0.05作为标准筛选差异基因,然后应用在线工具维恩图(venn)获得3个数据集的共有差异基因,获得192个上调基因和65个下调基因。通过STRING和Cytoscape构建了DEGs的蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,筛选分值最高的10个差异基因为关键基因。京东基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)用于功能富集分析。使用GEPIA、Oncomine和Kaplan-Meier在线网站来分析核心基因的表达和总体生存率(OS),以P<0.05为差异有统计学意义。结果通过3个数据集交集获得257个DEGs,其中包括192个上调基因和65个下调基因,这些基因生物学功能主要富集在糖衍生物结合、受体结合及大分子络合物结合,主要参与局部粘连、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路及细胞外基质受体相互作用的调节。在PPI网络中筛选出10个关键基因,Kaplan-Meier生存曲线显示,在胃癌患者中纤维连接蛋白1(FN1)、细胞表面跨膜糖蛋白分子44(CD44)、α1-Ⅰ型胶原基因(COL1A1)、α2-Ⅰ型胶原基因(COL1A2)、整联蛋白αM(ITGAM)、基质金属肽酶-2(MMP-2)、整联蛋白β2(ITGB2)高表达与更差预后明显相关,而重组人趋化因子8(CXCL8)高表达与更好预后相关。其中,FN1、COL1A1、CD44、COL1A2、ITGB2和CXCL8均在胃癌组织中高表达。结论 FN1、COL1A1、CD44、COL1A2、ITGB2与胃癌的发生及预后明显相关。