缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用

目的:分离提取缺氧预适应(HPC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分泌的微囊泡(MVs),探讨HPC-EMVs对正常H9c2心肌细胞的作用和其Caspase 3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用HPC方法诱导HUVECs释放MVs,将其和正常培养的大鼠H9c2心肌细胞孵育,通过MTT法检测细胞存活率和比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;通过Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;比色法测定培养液中Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:HPC模型构建过程中,与缺氧/复氧(H/R)组相比,HPC组细胞存活率显著升高(P<0.01),即成功构建HUVECs的HPC模型;HPC-EMVs处理H9c2细胞结果发现,与对照组H9c2细胞相比,HPC-EMVs 30、60μg/m L组细胞存活率显著降低(P<0.001),且LDH活性和Caspase 3活性显著升高(P<0.01或P<0.001),凋亡细胞量增加,Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.001)。结论:成功采用HPC的方法诱导HUVECs释放MVs,HPC-EMVs通过影响正常H9c2细胞Caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥促凋亡作用。

黄芪苷Ⅳ对微囊泡损伤的大鼠胸主动脉环舒张功能的保护作用

目的:以缺氧/复氧诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放的微囊泡(H/R-EMVs)处理大鼠胸主动脉环,造成其舒张功能损伤,探究黄芪苷Ⅳ(AST)对大鼠胸主动脉环舒张功能的影响及相关机制。方法:采用缺氧12h/复氧4 h的方法诱导体外培养的HUVECs产生MVs,H/R-EMVs保存于D-Hank’s液中备用。雄性Wistar大鼠开胸取出胸主动脉,制备3~4 mm宽、内皮完整的胸主动脉环。实验分为6组:H/R-EMVs组,在孵育胸主动脉环的培养基中加入H/R-EMVs,使其终浓度为10μg/ml;不同剂量AST组分别采用10、20、40、60 mg/L AST与10μg/ml H/R-EMVs共同孵育胸主动脉环;对照组给予等体积的D-Hank’s溶液。孵育时间为4 h,每组各测定5个血管环。观察AST对舒张功能的影响,检测一氧化氮(NO)含量及t-eNOS、p-eNOS、t-Akt、p-Akt、ERK1/2和p-ERK1/2蛋白质水平。结果:H/R-EMVs对大鼠胸主动脉环舒张功能有明显的抑制作用(P<0.01)。与H/R-EMVs组相比,AST20、40和60 mg/L组剂量依赖性地提高大鼠胸主动脉环的舒张率(P<0.01),使NO含量增加(P<0.05,P<0.01);t-eNOS、t-Akt和ERK1/2蛋白质水平不变,p-eNOS、p-Akt和p-ERK1/2蛋白质水平增高(P<0.01)。结论:AST可显著改善H/R-EMVs损伤的大鼠胸主动脉环的舒张功能,其机制与提高NO含量及增加p-eNOS、p-Akt和pERK1/2蛋白质水平有关。

心肌缺血预适应大鼠循环血微囊泡中miRNAs表达谱分析

目的:分离提取心肌缺血预适应(IPC)模型大鼠循环血中的细胞微囊泡(MVs),探究IPC处理对循环血MVs中microRNAs(miRNAs)表达的影响。方法:健康雄性Wistar大鼠8只,随机分为IPC-MVs组和假手术对照(Sham-MVs)组,每组4只。建立大鼠心肌IPC模型,提取循环血IPC-MVs,采用Microarray分析两组循环血MVs中的miRNAs,利用生物信息学进行靶基因预测及功能分析。结果:与Sham-MVs组比较,IPC-MVs组中循环血差异表达显著上调的miRNAs共3个(P<0.01,FER<0.05):miR-1-3p、miR-133a-3p和miR-133b-3p(t=3.194、3.002、3.389,均P<0.05)。基因本体研究会数据库(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析显示,这些miRNAs可能通过调节心肌细胞中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和Ras信号通路,发挥抗心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用,可能参与调控的核心靶基因包括Ntrk2、Igf1、Gnai3和Bcl2l1。结论:IPC处理可使大鼠循环血MVs中miR-1-3p、miR-133a-3p和miR-133b-3p表达显著上调。