活体检测吲哚-3-乙酸的电化学传感器研究

吲哚-3-乙酸(IAA)作为一种重要的植物激素,在植物生长发育的整个过程中起着至关重要的作用。本文根据植物活体检测的实际需要,发展了适合植物茎秆活体检测的四阵列电极及用于植物果实活体检测的六阵列电极,通过一步法在铂(Pt)丝工作电极上沉积铂纳米颗粒(PtNPs)和还原氧化石墨烯(rGO)纳米复合膜,从而增强催化效果,提高生物传感器的灵敏度。实验结果表明,所研制的传感器在IAA浓度0.1~200μmol/L范围内,具有良好的线性关系,相关系数为R~2=0.986,检测限为0.01μmol/L(S/N=3)。进一步利用所制备的传感器活体检测了黄瓜茎秆和黄瓜果实(CF)内的IAA含量,表明该传感器在植物生理状态的活体检测中具有重要应用前景。

油菜素内酯原位检测电化学免疫传感器

[目的/意义]植物激素的调控对于作物生长至关重要。油菜素内酯作为一种重要的植物内源激素,在作物的生长发育、产量提高以及抗逆性增强等方面扮演着举足轻重的角色。传统的油菜素内酯检测方法不仅繁琐耗时,而且难以实现原位、快速检测。为了突破这一技术瓶颈,本研究提出了一种利用丝网印刷(Screen-printed electrode,SPE)电极构建的电化学免疫传感器,旨在实现对油菜素内酯的快速、准确检测。[方法]首先利用电化学工作站电沉积金纳米颗粒(AuNPs)将其固定在SPE电极表面,然后在电极上滴加氯化铜纳米线(CuCl2NWs),氯化铜纳米线不仅可以提高电极的导电性,其中Cu2+还可以作为传感器的氧化还原探针。最后选择Mxene和聚多巴胺纳米复合材料(Mxene@PDA)作为SPE电极的修饰材料,因为Mxene具有表面积大和导电性好的优点,可以进一步放大Cu2+的信号。但Mxene在空气中很容易被氧化而不稳定。聚多巴胺(Polydopamine,PDA)含有大量的邻苯二酚和氨基等基团,通过多巴胺自聚合后包覆在Mxene的表面,切断氧渗透的路径,使Mxene难以被氧化。Mxene@PDA还可以作为偶联剂在电极表面固定更多的抗体,提高整体的生物相容性。[结果和讨论]传感器具有较宽的线性检测范围:0.1μg/ml^(1) mg/ml,检出限低至0.015 pg/ml (S/N=3)。此外,通过SPE电极对小麦内源的油菜素内酯含量进行离体检测和后续的加标实验,计算出其回收率为98.13%-104.74%。在验证该传感器准确性的同时,也展示了其优越的稳定和灵敏性。与其他油菜素内酯的检测方法相比,本研究中开发的免疫传感器有更加出色的分析性能。除此之外,在对小麦叶片的油菜素内酯的原位检测中,传感器也表现出了极佳的实际应用潜力。[结论]本研究首次研制了用于原位检测油菜素内酯的电化学免疫传感器,不仅为原位检测植物叶片中的油菜素内酯提供了良好的电化学平台,同时在精准农业中具有巨大的应用潜力。

脐针联合来曲唑治疗肾虚痰湿型PCOS伴不孕症患者的疗效观察

目的 探讨脐针联合来曲唑治疗肾虚痰湿型多囊卵巢综合征(PCOS)伴不孕症患者的临床疗效。方法 选取80例肾虚痰湿型PCOS伴不孕症患者,按照随机数字表法分为脐针联合来曲唑组(治疗组)与来曲唑组(对照组),每组40例,比较两组临床疗效、排卵期子宫内膜厚度、促黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)及妊娠率。结果 治疗组总有效率90.00%显著高于对照组的70.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组HOMA-IR、FINS、FBG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组HOMA-IR、FINS、FBG水平均有下降趋势,且治疗组明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前FSH、LH、T水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后两组FSH、LH、T水平均出现下降趋势,两组FSH水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗组LH、T水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前子宫内膜厚度比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组子宫内膜厚度均出现升高趋势,且治疗组显著厚于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组的临床妊娠率明显高于对照组,自然流产率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 脐针联合来曲唑可通过调整激素水平、增加子宫内膜厚度治疗肾虚痰湿型PCOS不孕症显著提高妊娠率。

SPF级KM小鼠繁殖及生长发育性能测定

目的在屏障环境下，对本中心饲养的SPF级KM小鼠繁殖及生长发育性能进行测定。方法从繁殖鼠中选80对，雌雄1：1长期同居，在生产过程中统计繁殖性能参数；从大群中随机选40窝刚出生0日龄仔鼠，统计其生长发育指标。结果SPF级KM小鼠的平均窝产仔数为12．97±0．47只，平均离乳率均为97．94％，平均胎间隔为22．69±0．47d。离乳后小鼠的体重有一个快速增长期：5周龄后，增长速度放慢；10周龄时基本达到体成熟。结论设施环境对KM小鼠繁殖性能及生长发育有明显影响。

Uncv无毛小鼠无毛基因的分子克隆及序列分析

目的探讨Uncv无毛小鼠的无毛性状与无毛基因(hairless gene,hr)的相关性。方法参照Gen-Bank上公布的小鼠的hr序列,设计5对引物,用RT-PCR方法对本单位培育的Uncv无毛小鼠hr的编码区序列进行了克隆与分析。结果获得了Uncv无毛小鼠及野生型hr的全部编码区序列(3546 bp)。Uncv无毛小鼠hr基因与野生型小鼠hr基因的长度及序列完全一致,同源性为100%。与GenBank上发表的国外小鼠hr基因序列(Z32675)相比,同源性为99.7%,共10个碱基发生了突变,其中2个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;和昆明小鼠的hr(AY547391)相比,同源性为99.6%,共12个碱基发生了突变,其中3个碱基突变导致了相应的氨基酸突变;但这些突变是由种属差异造成的。结论 Uncv无毛小鼠的无毛性状产生与hr基因无关。

黑线仓鼠白化突变系抑制差减文库的构建及初步分析

目的构建黑线仓鼠白化突变系的抑制差减文库，分离获得黑线仓鼠发生被毛突变的相关基因片段，并进行初步分析。方法以黑线仓鼠作为实验组（tester），以其白化突变系作为驱动组（driver），采用抑制差减杂交技术构建差减文库（SSH）。对阳性克隆进行测序并分析。结果共获得126个有生物学意义的表达序列标签（ESTs），包括21个骨架蛋白，42个转录因子，24个代谢酶基因，25个转运分子及其调节蛋白和4个未知基因。差异基因中没有发现常见的白化疾病相关基因，发现多种与溶酶体的形成及内吞作用相关的基因，推测黑线仓鼠白化突变性状的产生可能与黑色素的运输障碍有关。结论成功构建了黑线仓鼠白化突变的抑制差减文库，获得126个白化突变的相关基因，为进一步寻找白化突变相关基因，揭示其分子机制奠定了基础。

基于电化学传感器检测农副产品黄曲霉毒素B1的研究进展

黄曲霉毒素B1是农副产品中最常见的真菌毒素之一,具有诱变、致畸、免疫抑制和致癌的作用。为了减少黄曲霉毒素B1带来的危害,开发可靠的方法来检测农副产品中的黄曲霉毒素B1十分重要。传统的检测方法难以满足现代农业中现场、快速检测的需求,而电化学传感器具有制备简单、便于携带、灵敏度高和选择性强等特点,因而备受关注。根据识别元件的不同,黄曲霉毒素B1的电化学传感器可以分为基于适配体的传感器、基于免疫反应的传感器、基于分子印迹的传感器。研究者们又根据不同的感知策略、纳米材料研发了多种类型的黄曲霉毒素B1电化学传感器。该研究综述了近5 a来(2019—2023年间)黄曲霉毒素B1电化学传感器的研究进展,列举了具有代表性的实例,讨论了基于不同识别元件的传感器的传感机理和不同的信号产生策略,对这些传感器的性能进行了对比。并分析了不同识别元件的优缺点,探讨了基于不同原理的黄曲霉毒素B1电化学传感器的不足之处和发展方向,如需要开发新型的识别元件、研发新的纳米材料并提高纳米材料的制备技术、不同传感策略的联合应用、研发多种毒素同时检测的传感器、简化修饰步骤提高传感器稳定性等,以期为实现黄曲霉毒素B1电化学传感器的实际应用提供参考。

γ-氨基丁酸对断奶仔猪生长性能和血清激素水平的影响

本试验研究了不同水平的γ-氨基丁酸(GABA)对断奶仔猪生产性能和血液激素水平的影响,旨在探讨GABA对断奶仔猪的生长和激素变化的调节作用。试验采用随机区组设计将45头28日龄杂交断奶仔猪分为3个处理,每个处理5个重复,每个重复3头猪,分别饲喂添加0、0.04%和0.08%GABA的日粮。试验期28 d。试验结果表明:在43～56日龄,GABA显著改善了仔猪的平均日增重(P=0.048 9)和日采食量(P=0.035 6),但对料重比无显著影响(P>0.05)。在试验全期(28～56日龄),随着日粮中GABA水平的增加,仔猪的日采食量(P=0.110 7)和平均日增重(P=0.131 7)呈增加趋势。0.08%的GABA可以显著增强42日龄仔猪血清胃泌素水平,0.04%和0.08%GABA均可显著增强56日龄仔猪血清胃泌素水平(P<0.05)。0.08%GABA均能显著提高42日龄和56日龄仔猪血清胰岛素水平(P<0.05)。42日龄时,2个GABA组血清游离脂肪酸较对照组有显著升高,56日龄时,日粮添加0.08%的GABA显著了提高血清游离脂肪酸水平(P<0.05)。42日龄时,日粮添加0.08%GABA的仔猪血清脂肪酶活性较对照组有显著升高(P<0.05);56日龄时,2个GABA组血清脂肪酶活性均显著升高,且0.08%GABA组较0.04%GABA组也有显著增强(P<0.05)。本试验结果提示GABA能够短期改善仔猪的采食量和日增重,并调节与采食关系较为密切的胃泌素变化。

盐胁迫对苗期向日葵内源激素含量的影响

对水培20 d的苗期向日葵进行浓度为0、50、100 mmol·L-1以及时间为10、20、30 h的盐胁迫处理,运用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定了各组向日葵的根部、茎秆和叶片中内源激素的浓度变化。结果表明:随着盐浓度的增加以及胁迫时间的延长,向日葵根、茎、叶中四种激素呈现不同的变化趋势。IAA,ABA和ZR三种激素总体表现为先增后降的趋势,盐浓度越大,植物激素上升或下降的幅度越大,变化速度也越快。GA没有显著变化且波动在±2.0 ng·g-1范围内。而根、茎、叶中IAA/ABA,GA/ABA,(ZR+IAA+GA)/ABA的比值总体呈下降趋势,表明了盐胁迫对生长的抑制。盐胁迫下向日葵叶片和茎秆中这几种激素的变化更为明显,而根部的变化则较为缓慢。

F-肌动蛋白与负电荷磷脂膜的相互作用研究

细胞膜的内膜含有大量的负电荷磷脂,研究F-肌动蛋白与负电荷磷脂的相互作用将有助于更深入地了解细胞骨架与细胞膜的体内相互作用机制。在金片和金电极上分别构建了负电荷磷脂的杂化双层磷脂膜,通过表面等离子体共振方法(SPR)和电化学阻抗技术研究了F-肌动蛋白与负电荷磷脂膜的相互作用。结果表明,F-肌动蛋白可以在没有中间联系蛋白的情况下,直接与负电荷磷脂膜发生相互作用。钙离子可以有效地促进它们的相互作用,表明钙离子在其中发挥了重要作用。高浓度的KCl显著抑制它们的相互作用,表明这种相互作用主要受静电作用影响。实验结果进一步证明在F-肌动蛋白与负电荷磷脂膜相互作用时,除了可以通过其它蛋白发生间接相互作用外,还可以与磷脂膜发生直接的相互作用。

黑线仓鼠及其白化突变系TYR、TYRP1的基因表达水平比较分析

目的本研究旨在研究TYR、TYRP1基因在黑线仓鼠与白化突变系皮肤组织中的表达情况,探索其与白化毛色性状的产生是否具有相关性。方法以黑线仓鼠和白化突变系皮肤组织为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术,分别得到黑线仓鼠与白化突变系TYR和TYRP1基因的相对表达量。结果黑线仓鼠皮肤中的TYR和TYRP1基因的mRNA相对表达量分别是白化突变系皮肤组织中的2.5倍和5.3倍。结论表明黑线仓鼠皮肤中TYR、TYRP1的基因表达水平存在表达差异,白化突变系TYR、TYRP1基因发生表达下调,揭示出了TYR、TYRP1基因的表达量与白化突变系白化性状的产生有关。

一种比格犬雌二醇β受体剪切异构体的克隆和序列分析

目的分析比格犬下丘脑-垂体-性腺轴,雌二醇β受体剪切异构体的存在情况。方法根据NCBI数据库上的比格犬雌二醇受体的基因序列,设计两对特异性引物,以比格犬的卵巢、子宫、下丘脑和垂体的总RNA为模板进行反转录,并利用两对特异性引物扩增比格犬雌二醇受体的基因,对其中的主要条带进行克隆测序。结果获得了比格犬雌二醇受体的全长cDNA序列,对主要条带进行克隆测序的结果表明,该序列是一种比格犬雌二醇受体的剪切异构体。结论比格犬雌二醇β受体剪切异构体与小鼠和人的组成有较大的不同,需要进一步系统研究。

印度尼西亚源食蟹猴干扰素-γ基因的克隆和序列分析

目的获得印度尼西亚食蟹猴的干扰素-γ基因,为常用实验猕猴干扰素-γ的基因工程生产奠定基础。方法根据GenBank上公布的恒河猴干扰素-γ基因序列设计特异性引物,从印度尼西亚食蟹猴的外周血液中分离单核淋巴细胞,利用Trizol试剂,提取淋巴细胞的总RNA,通过RT-PCR的方法获得干扰素-γ基因片段,并对该片段进行克隆、鉴定和序列分析。结果扩增到一498bp的目的片段,经序列测定证实为印度尼西亚食蟹猴的干扰素-γ基因,与恒河猴、人及狒狒的干扰素-γ基因相比,同源性分别为100%、96%、99%。结论常用的两种实验猕猴食蟹猴与恒河猴的干扰素-γ基因完全相同。

便携式黄曲霉毒素B1检测系统设计与试验

为实现农副产品中黄曲霉毒素B1 (AFB1)的现场快速检测,设计了一款基于差分脉冲伏安法(Differential pulse voltammetry,DPV)、以STM32F103ZET6为核心处理器的便携式检测系统。系统主要包括硬件检测设备和手机App两部分,二者通过Wi-Fi通信连接。硬件检测设备主要包括DPV波形生成电路、恒电位电路及微电流检测模块;上位机App在安卓环境下开发,主要完成信号采集、数据存储等任务。应用实验室自制的AFB1传感器,在0.1 fg/ml~100 pg/ml范围内系统可以对AFB1实现有效检测。标准溶液中的测试结果与电化学工作站CHI760e相比,最大相对误差为7.37%。对加入不同浓度AFB1的花生油样品进行检测,以CHI760e检测结果为标准,回收率为96.8%~106%;对发霉程度不同的花生样品中进行测试,与CHI760e相比,最大相对误差为7.10%。本便携式检测系统在农副产品中AFB1的现场快速检测中具有广阔的应用前景。

川西亚种猕猴Mamu-A^＊01等位基因的筛查

目的对川西亚种猕猴Mamu-A^＊01等位基因的存在情况进行初步筛查。方法随机筛选2007年出生的猕猴101只，股静脉采取抗凝血200μl，提取基因组。根据Mamu．A^＊01等位基因的特异性序列设计引物，利用序列特异性引物PCR（PCR—SSP）筛查101只猕猴Mamu—A^＊01等位基因的存在情况。结果从101只猕猴中筛选到6只携带Mamu—A^＊01等位基因的猕猴，但扩增所得到的序列与印度猕猴对应序列的同源性只有96％。结论在川西亚种猕猴群内存在Mamu—A^＊01类似等位基因，但与印度猕猴有一定的差异，其作用和功能需要进一步的研究。

中老年腰痛患者进行康复护理联合心理疏导的有效性评价

目的:分析和评价康复护理联合心理疏导对于中老年腰痛患者的有效性。方法:根据研究需求,收集本院中老年腰痛患者109例,病例纳入起始时间是2021年1月,截止时间是2022年6月,分两组,分组方式取随机数字表法,具体组别是对照组、观察组,前者54例,后者55例。对照组应用常规护理,观察组则采用康复护理联合心理疏导。观察比较的指标有:护理前后的焦虑、抑郁情绪评分、腰痛评分、肢体运动功能评分、住院时间及对护理工作的满意度。结果:护理后,两组患者焦虑情绪评分、抑郁情绪评分、腰痛评分均降低,且观察组更低;在肢体运动功能评分、住院时间和护理满意度方面,观察组结果更优,数据之间差异显著(P<0.05)。结论:康复护理联合心理疏导在中老年腰痛患者护理工作中的应用效果显著,在缓解症状并促进肢体运动功能恢复的同时,改善负面情绪,值得临床应用和推广。

植物叶片葡萄糖活体检测双通道传感器的制备及应用

【目的】制备植物叶片葡萄糖活体检测传感器,以实时检测植物体叶片的葡萄糖浓度,为了解霜霉病侵染黄瓜的抗病状态提供支持。【方法】采用双通道丝网印刷电极为基底电极,使用1 mg/mL氯金酸溶液在传感器表面生成金纳米颗粒用于提高其导电性及活性面积,将5 mg/mL壳聚糖和180 mg/mL葡萄糖氧化酶混合以提高酶的固载量和活性,滴加10%的Nafion水溶液以增加对阳离子的选择性并提高电极稳定性。在此基础上研制出一种适用于活体检测植物扁平叶片中葡萄糖浓度的双通道电化学传感器。采用扫描电镜、X射线能谱、红外光谱、循环伏安法及电化学阻抗谱,对所制备传感器进行形貌、结构及电化学的表征;基于优化条件,对所制备的葡萄糖传感器进行性能测试;进一步使用黄瓜果汁进行传感器的加标试验,并应用该传感器对正常与带菌斑黄瓜叶片的葡萄糖浓度进行测定和比较。【结果】所制备植物叶片葡萄糖活体检测传感器的形貌、结构及电化学表征结果显示电极制备成功,其对葡萄糖具有良好的催化效果,反应为扩散控制过程;所设计的植物活体叶片葡萄糖检测双通道传感器的线性检测范围为1~150 mmol/L,检出限为0.784 mmol/L。采用3种不同浓度黄瓜果汁进行加标回收试验,回收率为97.17%~103.05%,相对标准误差≤4.52%,表明该传感器准确可靠。应用所制备的传感器检测结果表明,在双通道检测条件下,正常黄瓜叶片和霜霉菌侵染黄瓜叶片在通道1的葡萄糖浓度分别为(8.03±0.96)和(28.71±2.03)mmol/L,在通道2的葡萄糖浓度分别为(12.15±1.46)和(25.57±1.81)mmol/L,霜霉菌侵染黄瓜叶片的葡萄糖浓度较相应正常叶片增长了257.53%(通道1之间)和110.45%(通道2之间),表明不同生理条件下同种植物叶片的葡萄糖浓度因为霜霉菌侵染而存在显著差异(P<0.05);病斑区域葡萄糖浓度的检测结果还显示,通道1的葡萄糖浓度高于通道2,表明通道1检测的侵染区域抗病响应迅速,侵染区相应代谢物质会发生明显变化导致邻近区域的葡萄糖逐步出现积累。【结论】所制备的传感器能够检测植物在不同生理环境下的葡萄糖浓度,可为活体植物叶片葡萄糖的实时检测提供技术支持。

高盐胁迫下小麦幼苗离子吸收动态及耐盐性筛选

耐盐能力评价是小麦引种、筛选和育种的研究基础。为利用离子流检测技术快速筛选耐盐小麦品种提供依据,本文以普通小麦耐盐品种‘德抗961’和‘薛早’、中度耐盐材料3D232、盐敏感品种‘辽春10号’和‘京411’为试验材料,利用动态离子流检测技术对250 mmol·L^(−1) NaCl胁迫下小麦苗期根部对K^(+)、Na^(+)、Cl^(-)的吸收情况进行检测,并对小麦生长性状及离子浓度变化进行测定,以确立离子吸收与小麦耐盐性的关系。研究结果表明:1)与无盐胁迫(CK)相比,250 mmol·L^(−1) NaCl胁迫24 h后,盐敏感小麦品种‘辽春10’和‘京411’的K^(+)由内流转变为外流,中等耐盐材料3D232表现出K^(+)外流速度减少,耐盐品种‘德抗961’和‘薛早’则表现出维持K^(+)的内流或K^(+)外流变为内流;Na^(+)均表现为胁迫后外排速度增大,速度值区间由13.86~46.88 pmol·cm^(−2)·s^(−1)变为61~150 pmol·cm^(−2)·s^(−1);相较Na^(+),Cl^(-)外排速度升高幅度较大,其中‘辽春10号’外排量变化最大,外排速度是胁迫前的10倍,Na^(+)、Cl^(-)外排速度变化与品种耐盐性无明显相关性。2)高盐胁迫下,盐敏感小麦的根苗比降低,耐盐小麦根苗比升高;盐敏感小麦品种鲜重较CK显著下降,耐盐小麦品种变化不显著。3)盐胁迫条件下,耐盐及中等耐盐小麦品种,根部及地上部K^(+)含量较CK分别增加57%~88%和18%~112%,盐敏感小麦则分别降低40%~44%和24%~42%;耐盐小麦地上部Na^(+)增加倍数小于盐敏感材料,将更多的Na^(+)阻隔在根部,表现出了较好的区隔Na^(+)能力。4)盐胁迫后K^(+)流速与耐盐性评价指标根冠比变化量、鲜重变化率均呈高度的相关,其拟合度分别为0.972和0.832。250 mmol·L^(−1) NaCl胁迫24 h后小麦根部成熟区K^(+)流速可以作为小麦耐盐性筛选的重要生物标记。

结直肠上皮内瘤变组织中Ki-67的表达及其意义

采用免疫组化SP法对59例结直肠上皮内瘤变(IEN),32例大肠癌和25例大肠正常黏膜组织中的核蛋白Ki-67进行检测。结果显示,Ki-67在正常黏膜表达呈阴性,在低、高级别IEN和高分化腺癌中呈阳性表达(P<0.05),且阳性表达结果近似(P>0.05)。认为IEN是大肠癌的早期事件。

活体监测植物葡萄糖的微型传感器研究

葡萄糖是植物体内的一种重要的可溶性糖,为了实时监测植物活体内葡萄糖的含量变化,开发了一种新型葡萄糖微型电化学生物传感器。利用葡萄糖氧化酶(GOD)催化葡萄糖,通过醋酸纤维素(CA)提高葡萄糖氧化酶的固载量,通过聚氨酯-环氧树脂(PU-Epoxy)提高传感器的选择性和稳定性。该传感器线性范围宽,检测限低,并且具有较高的灵敏度和选择性、良好的重现性及稳定性。并利用所研制的生物传感器成功地对芦荟体内的葡萄糖含量变化进行了实时检测。