2007—2008年肠道病毒71型北京地区分离株的VP4基因序列分析

为了解2007-2008年北京地区流行的肠道病毒71型(EV71)是否存在基因序列变异及其与病毒毒力的关系,我们选择2007年分离的3株EV71(其中1株分离自重症手足口病患儿的咽拭子标本,其余2株分离自普通手足口病患儿咽拭子标本)和2008年分离的5株EV71(其中3株分离自重症手足口病患儿的咽拭子或鼻拭子标本,2株分离自普通手足口病患儿的疱疹液标本),提取基因组RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增得到VP4基因片段,并进行核苷酸序列测定,使用生物信息软件与GenBank中的EV71 VP4基因进行序列及病毒型别分析。结果表明,所测得的8株EV71 VP4基因全长均为207bp,编码69个氨基酸,理论相对分子质量(Mr)为7×103。8株EV71病毒VP4基因的核苷酸同源性在94%～100%,与GenBank中其他EV71病毒株VP4的核苷酸同源性为82%～100%,与阜阳、深圳和台湾等地区流行的EV71 VP4的核苷酸同源性比其他地区高。除了与印度报道的VP4编码的氨基酸在第7和54位不同外(印度株:7位蛋氨酸,54位苏氨酸;其余株7位苏氨酸,54位丙氨酸),这8株EV71VP4编码的氨基酸序列之间以及与其他EV71 VP4编码的氨基酸同源性均为100%。8株EV71病毒VP4与文献报道的3株重症感染病毒株VP4(BrCr、MS和NCKU9822)核苷酸有较大差别,而8株病毒株中从重症感染(BJ97、BJ110B、BJ110Y和BJ4243)与轻症感染(BJ25、BJ47、BJ65和BJ67)分离到的毒株之间VP4基因序列未见明显改变,只有几个核苷酸存在差别。VP4核苷酸序列的进化树分析表明,这8株EV71均属于C4亚型,显示2007-2008年北京地区流行的EV71的VP4基因相当保守,分离自伴有神经系统感染的重症手足口病和普通手足口病患儿的EV71的VP4基因之间在核苷酸水平未出现同样的变异。结果提示,近2年来北京地区所流行的EV71属C4亚型。

高校毕业生心理问题研究

高校毕业生存在焦虑、自卑等较严重的心理问题。通过重点分析高校毕业生心理问题的表现和产生原因,提出解决高校毕业生心理问题的对策,以期对毕业生心理问题的矫正有所裨益。

我国高校就业指导队伍建设存在的问题及对策

高校就业工作需要强大的就业指导教师队伍作支撑,高校就业工作的重要性、复杂性,要求这支队伍具有高度的专业化和职业化素质。然而,我国高校就业指导队伍存在着种种弊端,如人员配备不足,工作强度过大,待遇偏低,不能安心工作,工作能力有待加强等。为了提高高校就业指导队伍的专业化、职业化水平,必须认真落实党和国家的政策,提高他们的待遇,吸引优秀人才进入高校就业指导队伍,加强培训及考核来提高他们的专业化、职业化水平。

高校贫困大学生心理问题研究

贫困大学生因家庭经济贫困，容易产生心理问题。文章通过对贫困大学生心理问题的表现及产生原因的分析，提出解决贫困大学生心理问题的建议，以期为解决我国贫困大学生心理问题提供借鉴。

大学生厌学问题探究

目前，大学生中弥漫着一股厌学风气，如果任其发展，将造成不可估量的后果。文章对大学生中存在的厌学风气进行了剖析，并提出了解决的对策，以引起人们的重视。

高校辅导员队伍建设

辅导员队伍建设具有重要的意义,但是,长期以来,辅导员队伍建设没有得到足够的重视,导致辅导员队伍工作成就感不强、高校地位较低、发展机会较少、整体素质不高等问题,建议通过落实政策、提高待遇、提高辅导员队伍专业化和职业化水平、健全辅导员工作考评和激励机制、保持辅导员队伍的动态平衡等途径来促进高校辅导员队伍的发展。

宽严相济刑事政策在大学生犯罪中的应用

大学生犯罪作为一个特殊的社会现象,受到人们关注。大学生犯罪与他们所受到的学校教育、家庭因素及社会环境影响有关,大多数人身危险性较低,具有从宽处罚的理由。在大学生犯罪中贯彻宽严相济的刑事政策,应严格依法掌握宽和严的界限,当宽则宽。在侦查、起诉、审判、执行阶段都要认真贯彻宽严相济的刑事政策,酌情从宽处理。需要关注大学生犯罪后的一些权益保障问题。

吡喃糖氧化酶底物特异性研究

目的:评价吡喃糖氧化酶(PROD)对不同的糖底物、甘油和乙二醇的催化作用。方法:应用相同酶试剂和固定参数对12种糖、甘油和乙二醇进行催化率实验。结果:将其对葡萄糖的催化作用定为100%时,PROD对单糖中的山梨糖催化率最高(87.51%),其次是木糖(83.17%)和1,5-脱水-D-山梨醇(82.32%),半乳糖为40.69%,对果糖、甘梨醇、山梨醇几乎无催化作用;PROD对双糖中的麦芽糖催化率为3.19%,对乳糖、蔗糖、纤维二糖几乎无催化作用;对同等浓度的非糖类物质甘油和乙二醇的催化作用很小,但是对高浓度的甘油和乙二醇(应用浓度在2.2%～3.3%)催化活性很高。结论:建立1,5-脱水-D-山梨醇测定方法前应进行PROD对不同糖底物、甘油和乙二醇的特异性催化实验。

异柠檬酸脱氢酶检测方法学研究

异柠檬酸脱氢酶（isocitrate dehydrogenase,ICD或ICDH）是一类小分子蛋白,是人体内具有重要脱羧作用的氧化还原酶,它主要分布于肝脏、心肌、骨骼肌和肾脏等组织,在肝细胞内存在于线粒体和胞浆中,因此肝病时有较明显升高。目前,测定ICD检测方法有手工比色法、固定时间比色法、连续监测比色法、分光比色法等。本研究利用酶学理论,结合全自动生化仪特点,采用终点法对ICD进行测定,结果报告如下。

大学新生人际关系改善研究

很多大学新生因人际关系不良不能很快地适应大学的生活与学习,甚至因交友不善而误入歧途。文章依据影响人际关系的交往频率、态度的相似性、时空接近性的心理学原理,从高校的现实出发,提出要改善大学新生人际关系,需要在各学科活动中渗透改善新生人际关系的内容;要积极开展团体辅导;要加强高等学校的校园文化建设,积极开展内容丰富、有利于人际交往的各项集体活动。

鼠神经生长因子对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后巢蛋白表达的影响

目的观察鼠神经生长因子(mNGF)对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后巢蛋白(nestin)表达水平的影响,研究内源性神经干细胞增殖情况,探讨mNGF可能的神经保护机制。方法新生7 d龄Wistar大鼠108只按完全随机法分为对照组、HIBD组和治疗组,每组36只。结扎大鼠左侧颈总动脉和8%低氧暴露2 h,制作新生大鼠HIBD模型。对照组仅暴露游离左侧颈总动脉,不结扎左侧颈总动脉和低氧暴露。治疗组大鼠于左侧股二头肌部位肌肉注射mNGF(10μg/kg),1次/d,连用3 d。HIBD组大鼠于相同部位注射等量生理盐水3 d。每组随机取12只大鼠分别于术后4 d、7 d、14 d处死后,制备大鼠海马部位脑组织HE及免疫组化切片。利用计算机图像分析技术检测各组nestin阳性细胞计数。结果对照组海马部位椎体细胞排列整齐,HIBD组海马部位椎体细胞排列紊乱,可见较多凋亡神经细胞,治疗组可见海马部位椎体细胞排列较整齐,可见少量凋亡神经细胞;对照组、HIBD组及治疗组大鼠术后4 d nestin阳性细胞个数分别为(15.25±3.02)个、(24.67±3.37)个、(40.33±2.68)个,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、HIBD组及治疗组大鼠术后7 d nestin阳性细胞个数分别为(17.33±2.71)个、(30.58±4.03)个、(48.75±2.99)个,差异有统计学意义(P<0.05);对照组、HIBD组及治疗组大鼠术后14 d nestin阳性细胞个数分别为(14.58±1.83)个、(22.75±2.05)个、(32.17±2.52)个,差异有统计学意义(P<0.05)。结论新生HIBD大鼠经mNGF干预后位于海马齿状回nestin表达增加,提示可能促进内源性神经干细胞的增殖、再生,在HIBD后神经再生、修复中可能发挥一定保护作用。

基于网络药理学和生物信息学探讨小柴胡汤治疗肝细胞癌的作用机制

目的采用TCGA数据挖掘和网络药理学方法分析小柴胡汤治疗肝细胞癌(HCC)的药效物质基础及药理机制。方法通过TCGA数据库挖掘HCC差异表达基因、通过TCMID、TCMSP数据库和文献检索得到小柴胡汤的活性成分及其作用靶点;绘制韦恩图获得小柴胡汤-HCC共有靶点。通过Cytoscape软件构建疾病-药物-有效成分-靶点相互作用网络;利用R软件对共有靶点进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果共获得HCC差异表达基因4880个,小柴胡汤治疗HCC潜在有效成分142个,包括槲皮素、山柰酚、黄芩素、汉黄芩素等,这些有效成分共作用于242个靶点,其中有100个与HCC相关,其潜在调控信号通路61条,包括IL-17、TNF、HIF-1等与癌细胞生长和凋亡密切相关的信号通路。结论小柴胡汤可能通过多成分、多靶点、多途径的方式发挥治疗HCC的作用,为其临床应用提供科学依据,也为经典方剂的防病治病机制研究提供参考思路。

肠道病毒71型北京分离株VP4基因序列及蛋白抗原性分析

为探讨肠道病毒71型（EV71）VP4基因序列与手足口病（HFMD）不同临床类型之间的关系,分析重组蛋白EV71 VP4的抗原性,并初步探讨其与柯萨奇病毒A16（CA16）重组蛋白VP4是否存在交叉反应性,对2007~2009年从北京患HFMD儿童标本分离到的10株EV71的VP4基因进行克隆测序,运用生物学软件对测序结果进行比较分析,并选择其中1株与1株同期分离的CA16的VP4分别进行原核表达;用表达产物对189份正常体检的成人及来首都儿科研究所就医的非HFMD患儿血清中的IgG进行Western Blot检测,并分析14份确诊为EV71感染和12份CA16感染患者急性期血清中的IgM抗体。分析表明这10株EV71 VP4基因核苷酸同源性为94.20%~100.00%,所推导的氨基酸序列则完全相同,从重症与轻症患儿分离的毒株之间VP4的核苷酸序列未见一致性的差异,基于EV71 VP4基因核苷酸序列的进化树分析表明2007~2009年北京地区所流行的毒株均属于C4亚型;本研究中EV71和CA16的VP4核苷酸序列的同源性为69.60%,所推导的氨基酸序列的同源性为78.60%,在运用Western Blot检测189份血清中的VP4特异性IgG时,EV71 VP4的血清阳性率为38.10%,说明其具有良好的抗原性,CA16 VP4的血清阳性率为58.20%,两者差别具有显著统计学意义（2χ=15.30,P〈0.01）,提示EV71 VP4与CA16 VP4没有交叉反应性;在用表达的VP4检测已确诊为相应病毒的特异性IgM时,两者皆为阴性,提示感染后机体对VP1和VP4产生不同的反应。

2007-2008年北京地区儿童手足口病的病原学分析

目的通过病毒分离和鉴定了解2007-2008年春夏北京地区手足口病的病原学特征，为手足口病防治工作提供科学依据。方法分别于2007年4—8月及2008年5—9月收集256例手足口病患儿的咽拭子和疱疹液标本共356份，其中咽拭子255份（包括10份重症患儿标本），疱疹液标本101份。将所有标本接种Vero细胞进行病毒分离，分离阳性的毒株用RT—PCR进行鉴定；对10份重症患儿标本除病毒分离外，还直接进行RT—PCR检测病毒核酸。结果256例被检测患儿中188例为肠道病毒阳性，阳性率为73．4％。356份标本中共分离到239株肠道病毒，总阳性率为67．1％。其中疱疹液标本分离阳性率为75．2％（76／101），咽拭子标本分离阳性率63．9％（163／255），但两种标本接种细胞后出现病变的速度没有差别。重症患儿标本病毒分离阳性率50％（5／10）。2007年的45例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测均为阳性，分型PCR显示，其中CA16占95．6％（43／45），EV71占4．4％（2／45）；而2008年的143例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测142例为阳性，PCR分型显示，EV71占82．4％（117／142），CA16占16．8％（24／142）。10份重症患儿标本直接分型检测结果均为EV71。结论北京儿童手足口病病原体以EV71和CAV16为主，2007年与2008年流行的优势型别不同，2007年主要为CA16，而2008年主要为EV71。本组重症手足口病患儿的病原均为EV7I。

儿童急性呼吸道感染中腺病毒环介导等温扩增技术检测方法的建立

目的利用环介导等温扩增技术（LAMP），建立一种快速可靠的儿童急性呼吸道感染标本中腺病毒检测方法。方法根据腺病毒六邻体基因序列设计特异性LAMP引物，使用实时浊度仪对所建立的LAMP方法进行特异性与灵敏度评估后，对3、7、14型腺病毒分离株共11株进行了检测，随后对经直接免疫荧光法（DFA）鉴定为腺病毒阳性的呼吸道标本36例、腺病毒阴性的呼吸道标本72例分别应用巢式多重PCR和LAMP两种方法进行检测。结果所建立的LAMP方法最低检出腺病毒DNA浓度为1．9×10^2拷贝／ml；方法特异性好，与其他病毒间无交叉反应；11株腺病毒分离株应用LAMP方法检测全部为阳性；36例已经过DFA鉴定为腺病毒阳性的标本中，应用LAMP法共检出腺病毒DNA阳性34例；72例DFA鉴定为腺病毒阴性的标本应用LAMP方法检测5例阳性。本研究建立的LAMP方法与DFA的总符合率为93．5％；与巢式多重PCR的总符合率为98．1％。结论本研究建立的LAMP方法耗时短、灵敏度好、特异性高、操作简便，适用于儿童呼吸道标本中腺病毒的宴聆窜懊谏榆测．具右糖好的章际席用前罱．

变应原特异性免疫治疗致全身不良反应的观察及防控管理

目的:通过观察变应原特异性皮下免疫治疗(subcutaneous immunotherapy, SCIT)注射后出现的全身不良反应,分析危险因素及处理措施,以便更安全地实施SCIT。方法:对2017年1月至2020年12月在淄博市中心医院过敏门诊行SCIT后发生全身不良反应的病例资料进行回顾性分析。结果:在739例患者的16 337次注射中,共16例患者发生了18次全身不良反应,全身不良反应的发生率为2.2%,以皮肤、结膜和呼吸道症状为主,其中Ⅰ级6次,Ⅱ级8次,Ⅲ级4次。速发型反应16次,迟发型反应2次。发生在初始治疗剂量快速上升阶段和维持治疗阶段共17次。10岁以下儿童易发生全身不良反应,sIgE 4级以上的患者易发生重度全身不良反应。结论:全身不良反应多发生在初始治疗剂量快速上升阶段和维持治疗阶段,多为速发型反应,低龄、伴多种过敏性疾病、感染、接触变应原、剧烈运动、情绪应激等都是诱发全身不良反应的危险因素。医护人员应在每次注射前询问患者的病史以及与危险因素相关的生活史。根据患者的健康状况、前次注射时的反应等及时调整变应原剂量,提高临床对药物不良反应的预防、鉴别和处理能力。

基于网络药理学探讨丹参治疗骨质疏松症的作用机制

目的:采用网络药理学方法分析中药丹参防治骨质疏松症(osteoporosis,OP)的药效物质基础及其分子作用机制。方法:通过TCMSP数据库筛选出丹参的活性成分及其作用靶点;检索OMIM、GeneCards和DisGeNET数据库获得OP的相关靶基因;绘制韦恩图获得丹参-OP共有靶点。通过Cytoscape软件构建疾病-药物-有效成分-靶点相互作用网络;利用Bioconductor工具对共有靶点进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。结果:共获得OP相关基因2 026个,丹参抗OP潜在有效成分21个,包括丹参素、丹参酮ⅡA、隐丹参酮、木樨草素等,这些有效成分共作用于474个靶点,其中有53个与OP相关,其潜在调控信号通路139条,包括AGE-RAGE、PI3K-Akt、JAK-STAT等与各种骨细胞增殖、分化密切相关的信号通路。结论:丹参抗OP具有多成分、多靶点、多途径的作用特点,网络药理学为丹参抗OP作用机制的阐明提供了科学依据,并为中药的防病治病机制研究提供参考思路。

四氢异喹啉类新化合物SYT-1抑制肿瘤细胞增殖的机制

探讨四氢异喹啉类新化合物SYT-1对肿瘤细胞增殖抑制作用及其机制。采用CCK-8(cell counting kit-8)法检测细胞增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;JC-1探针法检测细胞线粒体膜电位;DCFH-DA(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate)探针法检测细胞内活性氧水平;Annexin V-FITC/PI(fluorescein isothiocyanate/propidium)复染法检测细胞凋亡;Western blot法检测相关蛋白表达水平。实验结果表明,SYT-1对6种人源癌细胞的增殖具有显著抑制作用,其中对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用最强,半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为5.87μmol·L^(-1),优于顺铂(IC_(50)为8.92μmol·L^(-1))。进一步研究表明,SYT-1可剂量依赖性抑制MCF-7细胞的单克隆形成能力,并能引起细胞线粒体膜电位下降和活性氧水平升高。此外,SYT-1可以显著抑制PI3K-Akt(phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B)信号通路的激活并诱导MCF-7细胞的凋亡。上述研究结果表明,作为一种新型四氢异喹啉类化合物,SYT-1具有抑制肿瘤细胞增殖的潜力。

巴戟天低聚糖类成分研究进展

巴戟天药用历史悠久,具有广泛的药用价值,为临床常用中药之一。现代研究表明低聚糖类成分是巴戟天中的主要药效物质,具有抗痴呆、抗抑郁、抗氧化应激、提高学习记忆能力、增强免疫力及性功能等作用,上述药理作用均具有较高的开发利用价值。通过查阅大量文献资料,发现巴戟天的许多临床疗效均与其低聚糖类成分的药理作用有关,这些药理作用也科学地诠释了中药巴戟天补肾、主骨、益脑的传统功效。因此,国内外学者对巴戟天低聚糖类成分做了大量的实验研究工作,尤其是巴戟天低聚糖对神经系统保护作用方面的研究,相关研究结果显示其抗痴呆、抗抑郁、提高学习记忆等活性显著,具有开发成治疗神经退行性疾病药物的潜力。笔者通过检索中国知网,万方,Pub Med,Science Direct,Springer等数据库,对近20年关于巴戟天低聚糖类化学成分的提取纯化工艺、成分检测方法、药理作用及机制等方面的研究,进行了整理和总结,分析其研究和开发前景,系统地综述了巴戟天低聚糖类成分的研究进展,以期为巴戟天低聚糖的深入研究和开发利用提供理论参考。