对脐血CD34^+CD38^-细胞的研究揭示脐血移植成人的可能性

通过在生长因子依赖的长期培养体系中加入转化生长因子β1(TGF-β1)的反义核酸或抗TGF-β1抗体以阻断TGF-β1的抑制作用,比较了脐血和骨髓的CD34^+CD38^-及CD34^+CD38^+亚群在长期培养中的增殖反应以及产生早期造血前体细胞的能力。结果显示:脐血中CD34^+CD38^-细胞占CD34^+的比例为4％,比骨髓多4倍;和成人骨髓移植平均所需的骨髓标本相比,一份常规脐血标本含有的CD34^+CD38^-细胞所产生的CFU-GEMM和骨髓相当,CFU-GM为骨髓的2倍,BFU-E为骨髓的3倍;由脐血产生的集落明显大于由骨髓产生的集落。提示脐血更富含造血干细胞并具有较高的增殖潜能。脐血中晚期祖细胞量低于骨髓。以上研究结果提示脐血可用于成人进行造血细胞移植。

SCF和TGF-β反义寡核苷酸对CD34^+造血细胞的协同作用

转化生长因子-β1(TGF-β1)反义寡核苷酸能使骨髓中幼稚的CD34^+细胞从静息期进入细胞周期,从而促进CFU-GEMM及早期BFU-E的集落形成。由于干细胞因子(SCF)对CD34^+细胞的集落形成也有类似的作用,作者对SCF的作用是否与阻断TGF-β的抑制效应有关进行了研究。结果表明,与TGF-β1反义核酸、SCF单用相比,两者合用对骨髓CD34^+细胞集落形成的促进作用优于递加作用,对脐血的促进作用略低于递加作用。这说明SCF仅可使部分被TGF-β维持在静息期的脐血造血细胞进入细胞周期。当TGF-β1反义寡核苷酸和SCF合用时,脐血中CFU-GEMM的绝对数比骨髓中CD34^+细胞多4倍。这与我们曾观察到的脐血所含的CD34^+CD38^-细胞,即对TGF-β1反义寡核苷酸有反应的细胞群比骨髓中多4倍的结果相一致。

脐血造血干细胞移植成人的研究

自1989年Gluckman等首次成功地开展了世界上第一例脐血移植以来,已在世界各地进行了大约200例脐血移植。尽管HLA相合与不相合的脐血移植都取得了令人满意的结果,但以往报道的脐血移植都是在儿童身上进行的。由于单份脐血可采量有限,近年来人们一直在致力于脐血移植成人的可能性研究。最近。

贫血对肿瘤化疗疗效影响的实验研究

目的 :在小鼠实体瘤模型中研究贫血对化疗疗效的影响。方法 :用单次剂量的卡铂 (5 0mg/kg)静推造成Hb较长时间的降低。在另一组中 ,用卡铂前 7天始予rHuEPO(1 0 0 0IU/kg)皮下注射 3次 /周预防贫血的发展。两组均于卡铂用后的第 4天自小鼠的右侧腋部皮下植入肿瘤 (S1 80 小鼠肉瘤 )。植入肿瘤后的第 5天用单次剂量的CTX(6 0mg/kg)静脉注射。结果 :rHuEPO可以防治化疗所致的贫血。化疗后可见到肿瘤生长受到抑制 ,随后肿瘤又再生长。贫血组的肿瘤生长延缓时间要短于非贫血组 (6 3天比 9 3天 ) ,被纠正的贫血组的肿瘤生长延迟时间与对照组大致相仿 (9 3天 )。结论 :贫血可导致肿瘤化疗疗效的降低 ,其机制可能与肿瘤组织的低氧供有关。

[Ln(Phen)_2(5-Fu)_3(NO_3)](NO_3)_2的合成、表征及体外抗肿瘤活性研究

目的研究稀土元素的生物化学作用和无机、有机抗肿瘤药物的协同作用。方法用稀土硝酸盐、邻菲罗啉(Phen)、氟尿嘧啶(5-Fu)合成了7种稀土配合物。用MTT,SRB法进行体外抗肿瘤活性研究。结果经过元素分析、摩尔电导率测定、差热分析、红外光谱测定和核磁共振谱测定,初步确定配合物化学式为[Ln(Phen)2(5-Fu)3(NO3)](NO3)2。配合物对K562(人粒细胞白血病细胞株)、CA(人肝癌细胞株)、SGC-7901(人胃癌细胞株)、HCT(人结肠癌细胞株)、GLC-82(人肺癌细胞株)和CNE(人鼻咽癌细胞株)增殖有很强的抑制作用。结论配合物产生了抗肿瘤协同作用。

细胞显微光谱研究竹红菌甲素在癌细胞内的滞留效应

利用细胞显微光谱技术 ,在 2 0 0 0 0～ 12 0 0 0cm- 1 范围内测量了经过浓度为 2 0 μg·mL- 1 竹红菌甲素(HA)培养 2 3个小时的小鼠淋巴癌细胞和未经HA培养的小鼠淋巴癌细胞的光谱。结果显示两者有明显的差异 ,说明HA使癌细胞发生了改变 ;在经HA培养的细胞光谱中还检测到HA的荧光峰 ,提示HA在癌细胞中滞留。发展了利用显微光谱研究细胞在药物作用下的变化这一技术。

人卵巢癌鸡胚尿囊膜血管生成模型的建立

目的 :研究人卵巢癌鸡胚尿囊膜血管生成模型的建立方法。方法 :在鸡胚尿囊膜上接种卵巢肿瘤细胞株 ,根据接种细胞株的种类分为HO8910PM、TYK、SKOV3等 3组 ,每组根据接种细胞数量的不同分为 8个亚组 ,阴性对照组、1× 10 4 、1× 10 5、1× 10 6 、1×10 7、1× 10 8、1× 10 9、1× 10 10 组 ,每一亚组 10只 10日龄鸡胚 ,根据分组在鸡胚尿囊膜上接种相应的细胞数。孵育 3d后观察比较血管生成与接种细胞种类、数量的关系。结果 :将细胞株HO8910PM、TYK、SKOV3接种于鸡胚尿囊膜上后 ,随着接种细胞数量的增多 ,血管生成逐渐增强 ,与阴性对照PBS相比 ,细胞株HO8910PM、TYK、SKOV3引起血管显著生成的细胞数每只鸡胚分别为 1× 10 6 ,1× 10 7,1× 10 7;能使血管生成达到高峰的接种细胞数量分别为每只鸡胚 1× 10 8、1× 10 9、1× 10 9。结论 :应用人卵巢肿瘤细胞株接种鸡胚尿囊膜建立肿瘤血管生成模型 ,适宜的接种细胞数为每只鸡胚 1× 10 8～ 1× 10 9。

秋水仙碱的氨(胺)解反应及其衍生物体外抗癌活性研究

This paper reported the aminolysis of colchicine and antitumor activity of its derivatives.The results of leukeamia K562 cell growth inhibition tests in vitro showed that all derivatives had moderate antitumor activities and no cytotoxic activity to SGC 7901 cell line.

寻常性银屑病患者外周血单一核细胞产生IL-2及IL-4能力的研究

目的 探讨寻常性银屑病患者外周血单一核细胞（ＰＢＭＣｓ）产生白介素２（ＩＬ－２）及白介素４（ＩＬ－４）的能力与病程演变的关系。方法 用生物活性法检测产生ＩＬ－２、双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法检测产生ＩＬ－４的水平。结果与１２例健康人比较，患者组ＩＬ－２低于对照组（Ｐ＜０．０１），静止期组较进行期组降低更明显；患者组ＩＬ－４低于对照组（Ｐ＜０．０５），进行期组明显低于对照组（Ｐ＜０．０１），而静止期组与对照组比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论患者从进行期向静止期演变可能与ＰＢＭＣｓ产生ＩＬ－２及ＩＬ－４的能力改变有关。

钌-乙二胺或邻菲罗啉-氟尿嘧啶配合物的合成及体外抗肿瘤活性

目的寻求高效低毒的新型钌配合物抗肿瘤药物。方法用RuCl3·3H2O,乙二胺(en)或者邻菲罗啉(Phen),氟尿嘧啶(5-Fu)为原料,设计合成了[Ru(en)(5-Fu)2Cl2]Cl,[Ru(Phen)(5-Fu)2Cl2]Cl配合物。并用改良MTT,SRB法,选用K562,A549,Bel-7402,BIU-87,Bcap-37细胞株对其进行体外抗肿瘤活性测定。结果合成的[Ru(en)(5-Fu)2Cl2]Cl,[Ru(Phen)(5-Fu)2Cl2]Cl配合物的化学结构由元素分析和红外光谱初步证实。获得配合物细胞株体外抗肿瘤活性数据IC50值。结论[Ru(Phen)(5-Fu)2Cl2]Cl配合物与5-Fu相比,似有进一步研究的价值。

人胚胎干细胞在血清和无血清培养体系中的特性比较

目的探讨血清培养体系和无血清培养体系对人胚胎干细胞(hES cells)生长特性的影响。方法将人胚胎干细胞株BG02接种在丝裂霉素C处理灭活的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,分别在含血清hES完全培养基或无血清培养基中连续培养25～30代。在不同培养体系下比较人胚胎干细胞形态、集落贴壁率;运用BrdU掺入法检测人胚胎干细胞增殖,用细胞计数法计算细胞倍增时间;采用免疫荧光染色检测人胚胎干细胞特异性分子标志的表达;用流式细胞仪检测人胚胎干细胞Oct-4,Nanog阳性的比例;RT-PCR检测成纤维细胞生长因子(FGFs)家族基因的表达。结果在两种培养体系的BG02细胞都具有人胚胎干细胞的形态特征。在含血清培养体系下,BG02细胞集落贴壁率和表达OCT-4,Nanog的阳性细胞明显高于无血清培养体系(P<0.05)。无血清培养体系中,BG02细胞生长速度明显高于含血清培养体系,细胞倍增时间分别为(33.8±4.3)h、(45.9±5.7)h,(P<0.05)。无血清培养体系的BG02细胞高表达FGF2、FGFR2、FGFR4。结论两种不同培养体系中人胚胎干细胞的体外培养特性存在一定的差异,可能与BG02细胞FGFs家族基因激活有关。

树鼩微卫星DNA的多态性研究

目的探索并建立一种检测树鼩群体遗传多样性的方法。方法利用聚合酶链反应(PCR)扩增技术对30只树鼩个体的11个微卫星位点进行了遗传检测。结果所选的11个微卫星DNA位点中,有9个具有高度多态性,2个微卫星DNA位点多态性较差。结论所研究的树鼩微卫星位点中,有9个符合遗传标记特点,可用于检测树鼩群体的遗传多样性。

益血胶囊对辐射损伤小鼠造血功能的影响

目的:研究益血胶囊对辐射损伤小鼠造血功能的影响。方法:对外周血白细胞、血小板及骨髓有核细胞计数,用内源性脾结节形成法、造血祖细胞集落培养法观察益血胶囊对4Gy_(60)Co-γ射线辐照后小鼠的造血功能的影响。结果:益血胶囊对辐射后d7小鼠外周血白细胞、血小板、骨髓有核细胞、骨髓巨核细胞系祖细胞(CFU-MK)、粒单系祖细胞(CFU-GM)均有明显升高作用;使辐射后d14小鼠脾脏指数、脾结节数(CFU-S)明显增加。结论:益血胶囊对小鼠造血功能辐射损伤具有明显治疗作用。

FGF-2对人骨髓间充质干细胞增殖和向成骨细胞分化的影响

探讨体外培养条件下,成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和地塞米松(Dex)对第7代人骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖和向成骨细胞分化的作用以及两者联合使用的效应。MSCs经含FGF-2或/和Dex的培养液作用后,于不同时间采用MTT法测定细胞增殖情况;对硝基苯磷酸(pNPP)法测定碱性磷酸酶(ALP)活性;ELISA法测定骨钙蛋白(OC)含量;茜素红S染色法对沉积的钙盐进行染色。发现:⑴FGF-2组细胞的生长速度为对照组的1.31倍,Dex/FGF-2组细胞的生长速度为FGF-2组的1.12倍。⑵Dex组的ALP活性、OC含量和细胞外基质钙盐沉积分别为对照组的17.0倍、2.12倍和10.56倍,并能形成成熟的羟基磷灰石(HA)结晶和骨结节;FGF-2组的ALP活性比对照组降低了76.7%,虽然OC含量、钙盐沉积增加,但不能形成成熟的HA结晶和骨结节;FGF-2对Dex诱导的ALP活性增加和HA结晶形成有拮抗作用。由此证明:⑴FGF-2可促进MSCs的增殖,Dex对MSCs的增殖无明显作用;Dex能增强FGF-2对MSCs的促增殖效应。⑵Dex可使MSCs分化为成熟的成骨细胞,是一个有效的成骨细胞分化诱导剂;FGF-2可使MSCs分化为未成熟的成骨细胞;FGF-2拮抗Dex诱导MSCs分化为成熟的成骨细胞。

人胚胎干细胞在人源和鼠源饲养层上的生长特性比较

背景:不同来源饲养层条件下,人胚胎干细胞是否具有相同或相似的生物学特性尚不清楚,该问题的解决有利于建立标准化的饲养层体系。目的:观察比较人胚胎干细胞在人源和鼠源饲养层上的生长特性是否相同?设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-09/2009-02在中国科学院昆明动物所完成。材料:清洁级孕12.5～13.5d的ICR小鼠2只,由昆明医学院动物中心提供。永生化人成纤维细胞由美国约翰霍普金斯大学医学院建系并赠送,人胚胎干细胞株BG02由中国科学院昆明动物所提供。方法:无菌条件下取ICR胎鼠,组织块胰酶消化法分离培养小鼠胚胎成纤维细胞,永生化人成纤维细胞按常规培养,两种细胞经γ射线处理后,以2.5×104/cm3接种在明胶包被的6孔板中。取人胚胎干细胞,分别接种在小鼠胚胎成纤维细胞或永生化人成纤维细胞饲养层上,加入含β-巯基乙醇的DMEM/F12培养基,使用前添加碱性成纤维细胞生长因子。主要观察指标:两种饲养层上的人胚胎干细胞的形态、特异性标记表达、Oct-4阳性率、细胞倍增时间。结果:培养在小鼠胚胎成纤维细胞和永生化人成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞,其形态相似,呈圆形或椭圆形集落;均表达SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81和Oct-4,但不表达SSEA-1。与小鼠胚胎成纤维细胞饲养层比较,永生化人成纤维细胞饲养层上人胚胎干细胞Oct-4阳性细胞率明显升高(P<0.05),倍增时间明显延长(P<0.05)。结论:人源和鼠源成纤维细胞饲养层上的人胚胎干细胞体外培养生物学特性存在明显差异。

美洲大蠊提取物对3株人肺癌细胞的体外抑制作用

目的:观察美洲大蠊提取物(CⅡ-3)对3株人肺癌细胞的细胞毒作用,探讨CⅡ-3对人肺癌细胞的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法观察CⅡ-3对3株人肺癌细胞的影响。结果:CⅡ-3对3株人肺癌细胞的生长均有一定的抑制作用,在最高浓度(300μg/ml)时抑制率几乎为100%,且存在一定的剂量依赖性和时间依赖性。结论:CⅡ-3对3株人肺癌细胞生长有抑制作用,值得进一步研究。

中药促进骨质疏松性骨折愈合的作用及机制研究进展

介绍了骨质疏松性骨折的基本概况及其愈合过程,中药促进骨质疏松性骨折愈合的作用及其机制。众多研究表明,中药可通过影响调节骨生长因子,增加骨痂中钙、磷、胶原含量,增加骨密度、改善骨生物力学性能、提高血中雌激素水平等多方面的机制促进骨质疏松性骨折的愈合。

旱生香茶菜素G对S180细胞抗肿瘤活性

目的研究旱生香茶菜素G对S180细胞体内外抗肿瘤活性及其作用机制。方法采用改良噻唑蓝(MTT)法测定旱生香茶菜素G对S180细胞株增殖的影响;以荷S180肉瘤小鼠为模型,检测旱生香茶菜素G对荷瘤小鼠肉瘤质量、体质量及其主要脏器的影响;通过流式细胞术检测旱生香茶菜素G对S180细胞株和S180肉瘤组织细胞周期的影响;采用脾脏淋巴细胞转化实验法测定旱生香茶菜素G对荷瘤小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性;采用酶联免疫吸附试验双抗夹心法检测旱生香茶菜素G对荷瘤小鼠血清中白细胞介素(IL)-2含量的影响。结果旱生香茶菜素G对S180细胞株半数抑制浓度(IC50值)为19.80μg·m L^(-1)。小鼠经腹腔注射旱生香茶菜素G的LD50为121.11 mg·kg^(-1)。在剂量为3,6 mg·kg^(-1)时,对荷S180肉瘤小鼠抑瘤率分别为32.11%,41.60%,差异有统计学意义(P<0.05),小鼠胸腺、肾脏和心脏指数均有一定程度的降低。旱生香茶菜素G使S180细胞株和S180肉瘤组织细胞G0/G1期所占比例增多,对荷瘤小鼠脾脏T、B淋巴细胞具有一定的增殖促进作用(P<0.05)。小、中剂量组血清中IL-2含量分别较对照组减少约90.9%和77.1%(P<0.05)。结论旱生香茶菜素G具有一定的抗肿瘤活性,抑瘤作用可能是通过对肿瘤细胞G0/G1期阻滞,及其促进荷瘤小鼠脾脏T、B淋巴细胞增殖,增强机体免疫功能有关,而与IL-2的表达关系不密切。