禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒灵敏性试验

为了确定深圳出入境检验检疫局和深圳太太基因工程有限公司联合研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型禽流感的灵敏度,通过测定已知鸡胚半数致死量(ELD50)的标准毒株的进行了定量。利用9～11日龄SPF鸡胚,对深圳出入境检验检疫局保存的H5和H9亚型标准禽流感毒株进行了鸡胚半数致死量(ELD50)的测定,结果为H5亚型禽流感毒株的半数致死量为10-7.75/0.2mL,H9亚型禽流感毒株的半数致死量为10-8.5/0.2mL。用所研制的禽流感H5、H7、H9亚型多重实时荧光RT-PCR检测试剂盒对H5和H9亚型标准禽流感毒株原液进行10倍连续稀释,进行实时荧光RT-PCR灵敏度的测定,结果发现:试剂盒检测H5亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10-5倍稀释液,该稀释液含有281ELD50病毒量;检测H9亚型标准禽流感毒株的灵敏度为标准毒株10-8倍稀释液,该稀释液含有15.8ELD50病毒量。同时检测H5和H9时,试剂盒的灵敏度要比单独检测一个亚型时的灵敏度增加一个数量级。本灵敏度已经能够检测到感染鸡的喉拭子和(或)泄殖腔拭子所采集的病毒量,能够满足检验检疫的实际需要。

鸭病毒性肝炎(DHV)诊断方法的研究

鸭病毒性肝炎（ｄｕｃｋ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ＤＨＶ）病毒（ＡＴＣＣ株）用鸡胚胚传一代后，测出其鸡胚半数致死量（ＥＩＤ５０）为１０－５．５。７株ＤＨＶ毒株用鸡胚中和试验的结果是：胚传一代尿囊液死亡率为２／８－５／８，１：１０血清中和保护率为对 ８／８； １： １０００肝病料死亡率为 ３／８－ ８／８， １： １０血清中和保护率 ８／８，正常对照全部存活。雏鸭中和实验的结果是：２４小时内１：１０肝病料死亡率为３／８－８／８，１：５血清中和保护率为８／８，正常对照全部存活。

鸭病毒性肝炎实验室诊断方法的研究

将鸭病毒性肝炎病毒 (duckhepatitisvirusDHV) (ATCC株 )用鸡胚传一代后 ,测出此病毒的鸡胚半数致死量 (ELD50 )为10 -5.5。通过多次重复试验 ,建立了利用鸡胚中和试验和雏鸭中和试验检测鸭病毒性肝炎 (DVH)的诊断方法。 7株DHV毒株在鸡胚中和试验中的结果是 :胚传一代尿囊液死亡率为 2 / 8～ 5 / 8,1∶10血清中和保护率为 8/ 8,1∶10 0 0肝病料死亡率为 3/ 8～8/ 8,1∶10血清中和保护率为 8/ 8,正常对照全部存活。雏鸭中和试验的结果是 :2 4小时内 1∶10肝病料死亡率为 3/ 8～ 8/ 8,1∶5血清中和保护率为 8/ 8。