碱性成纤维细胞及角蛋白对丝素蛋白膜改性的实验研究

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及角蛋白对丝素蛋白膜改性后的生物相容性改变。方法还原法制备水溶性人发角蛋白,用共混法使人发角蛋白与丝素蛋白形成共混膜;化学交联法用bFGF对丝素膜进行表面修饰形成交联膜。通过MTT法及荧光显微镜观察检测3T3细胞在三种丝素基材料上的增殖情况。通过接触角测定,对上述三种材料亲水性进行表征。不同的丝素基材料对细胞增殖的促进情况以及接触角的测定2组间SUV_(max)比较采用两样本t检验。结果制备的人发角蛋白分子量范围在44-66KDa之间,条带清晰。MTT法及显微镜观察表明,含角蛋白40﹪共混膜对细胞生长的促进作用最为明显(0.718±0.03,P<0.05),交联膜次之(0.545±0.022,P<0.05),最后是丝素膜(0.463±0.027,P<0.01)。接触角测定结果表明,共混膜的接触角(17.5±1.6,P<0.01)最小,交联膜(47±1.8,P<0.01)次之,丝素膜的接触角(61±1.5,P<0.05)最大,即共混膜黏附性最好。结论制备的40﹪共混膜具有最强生物相容性,b FGF修饰的丝素蛋白交联膜次之,最后是丝素膜。

丝素蛋白膜表面亲水基团对细胞黏附作用的影响

目的通过交联剂分别对丝素蛋白膜表面主要基团氨基、羟基及羧基的屏蔽,测定其表面亲水性基团的作用效果。方法以只铺加丝素膜的聚苯乙烯板为对照,采用乙二醇二缩水甘油醚(EGDE)对丝素蛋白膜表面介导细胞黏附的主要基团氨基、羟基和羧基进行屏蔽,确定屏蔽反应的最适反应时间及最适p H值,并采用MTT方法间接检测屏蔽效果。EGDE对羟基、氨基、羧基的屏蔽作用2组间SUVmax比较采用两样本t检验进行统计学分析。结果 EGDE均可以起到屏蔽羟基(0.514±0.020,P<0.01)、氨基(0.583±0.036,P<0.01)、羧基(0.523±0.023,P<0.01)的目的,且对丝素蛋白膜表面亲水性基团屏蔽的最适时间为10 h,屏蔽羧基所选用的缓冲液最适p H为4。通过MTT法检测丝素蛋白膜表面三种亲水性基团(羟基、羧基、氨基)介导细胞黏附作用总和的大小,羟基、羧基、氨基的屏蔽率分别为:16.67﹪、14.05﹪、10.44﹪,而在丝素蛋白膜表面:含羟基氨基酸、酸性氨基酸、碱性氨基酸的数量比例为17:4:2。结论对于单个羟基、羧基、氨基亲水性基团来讲,介导细胞黏附作用的大小为:氨基>羧基>羟基;但三种亲水基团介导细胞黏附作用的总和是:羟基>羧基>氨基。