人结缔组织生长因子(CTGF)的原核表达研究

随着对细胞前早期基因认识的深入,一组在多个种群中具有较高同源性的前早期基因家族——CCN(CTGF,Cyr61/Cef10,Nxov)得到了人们的注意[1]。其产物在细胞受到创伤刺激时产生,并具有促进和调节创伤修复的功能.其中的人结缔组织生长因子(CTGF)由于对成纤维细胞、结缔组织基质...

结缔组织生长因子基因的克隆

目的 克隆细胞即刻早期基因反应产物人结缔组织生长因子 (CTGF)基因 ,对分析细胞基因反应及用于创伤修复研究的理论和应用研究均具有较大意义。方法 使用组织培养的方法 ,建立了人脐静脉内皮细胞系 ,在适当刺激后 ,提取 m RNA,应用 RT- PCR方法 ,分段克隆人结缔组织生长因子基因 ,并经无义突变形成酶切位点使之连接。结果 经序列测定 ,发现该 CTGF基因具有完整编码区及不同于文献报道的 3′端非编码区结构的结缔组织生长因子基因。结论 获得一个新的人 CTGF基因。

应用核酸探针检测甲型肝炎疫苗的滴度

应用甲型肝炎病毒(HAV)cDNA 片段作为探针,分别以同位素、异羟基洋地黄毒苷配基和生物素标记该探针,对甲肝疫苗病毒培养过程中不同时期、不同接种量的病毒浓度进行了滴定,并以 ELISA 作对照。结果表明,各种标记探针检测的灵敏度均高于 ELISA。而不同标记的探针检测的结果无显著差异。

脊髓灰质炎病毒进入细胞过程的初步分析

利用经典技术，着重分析了脊髓灰质炎病毒穿越细胞膜时的结构变化，探讨了脊灰病毒的结构变化与其进入细胞的关系，并研究了脊灰病毒壳蛋白ＶＰ４在病毒穿膜过程中的作用功能。提出了关于脊灰病毒穿越细胞膜的理论模型。

一个新的即刻早期基因家族与创伤修复过程

结缔组织生长因子（ＣＴＧＦ，ｃｅｆ１０／ｃｙｒ６１ ．ｎｏｖｆａｍｉｌｓ，ＣＣＮ） 细胞因子家族属于细即刻早期基因产物， 它是包括多个物种的一组在基因序列上具有较高同源性的调节蛋白。其在细胞分化及细胞增殖周期中起到了重要的调节作用，并在创伤修复过程中具有促进成纤维细胞，血管内皮细胞等生长繁殖的作用，因而具有较大的研究意义。

脊髓灰质炎病毒重组体的构建及其抗原性状分析

以脊髓灰质炎病毒（以下简称脊灰病毒）为载体构建的重组体活病毒可以做为探讨脊灰病毒的抗原结构和特性的有益手段。在构建重组有甲型肝炎病毒小片段抗原多肽的重组脊灰病毒基础上，分析了脊灰病毒VP1上中和抗原位点I的空间构象特点，并探讨了插入的外源抗原片段对其空间结构的可能影响。

脊髓灰质炎病毒缺陷型载体瞬时表达系统Ⅰ的构建

为探索可表达较大片段外源基因的脊灰病毒重组载体，以ＨＢＶＳ基因置换脊灰病毒的Ｐ１基因，同时以另一途径提供脊灰病毒Ｐ１结构蛋白，经转染入Ｈｅｌａ细胞中形成缺陷型重组病毒颗粒，此病毒可以感染新的细胞，并表达其重组的外源基因，但不产生子代病毒。实验结果表明，这种瞬时表达系统的构建，为脊灰病毒缺陷型重组载体用于基因转导技术打下基础。

脊髓灰质炎病毒2A蛋白在重组病毒中的功能研究

应用所构建的不同脊髓灰质炎病毒-痘苗病毒(下简称PV-VV)重组体,探讨脊髓灰质炎病毒(下简称PV)2A蛋白在重组病毒中的作用。所得到的四个以不同PV基因片段插入痘苗病毒(下简称VV)TK区而形成的重组病毒均有PV抗原的表达,并可诱导抗体产生,但此表达水平明显受到2A蛋白的影响。同时,重组病毒对不同细胞的适应性亦有变化。对此,本文进行了初步的探讨。

脊髓灰质炎病毒缺陷型重组载体系统

第一代脊髓灰质炎病毒重组载体系统由于受到构象的限制而不能有效地表达外源抗原,缺陷性重组载体系统则可利用外源基因置换脊髓灰质炎病毒结构蛋白P1编码区而插入较大片段的外源基因,因此具有较广阔的前景。其基本原理是以外源基因置换脊髓灰质炎病毒的P1基因,同时以另一途径提供P1结构蛋白,形成缺陷性病毒颗粒。此颗粒可以感染新的细胞,并表达其重组的外源抗原,但不产生感染性病毒颗粒。此系统为利用脊髓灰质炎病毒表达大片段外源抗原提供了技术的可能。

甲型肝炎病毒的抗原性质

本文从抗原结构基础、各结构蛋白成份、特别是VP1、VP3的免疫学性质以及与这些抗原相关的基因结构等方面对甲型肝炎病毒抗原性质的研究进展作了综述。并对当前发展的三种甲型肝炎疫苗的免疫特性作了比较。

EV71可感染幼龄中缅树鼩

树鼩是灵长类动物的近亲,且具有体型小、繁殖周期短、饲养管理成本低等优点,长期以来被认为有望替代灵长类动物用于人类疾病的动物模型研究。该文研究了肠道病毒EV71对幼年中缅树鼩的感染特点,探索建立EV71感染树鼩动物模型及替代灵长类动物的可行性。实验分别采用灌胃、滴鼻和尾静脉注射3种方式,感染3月龄树鼩,定期观察动物临床症状和血常规变化和定期采集血液和粪便样品,并使用中和抗体试验、reverse transcription-PCR(RT-PCR)和Real-TimePCR等技术,检测相关样品中和抗体效价、病毒核酸及载量变化。结合组织病理学检查,分析感染病变特点。研究结果发现,实验组树鼩体温在第4天前后开始升高,白细胞、淋巴细胞也有类似趋势;3种攻毒方式均可检测到病毒载量,峰值出现在第10天前后,灌胃途径尤为明显,血清的最大中和抗体效价为1:16。感染EV71病毒的树鼩2周左右出现急性松弛性瘫痪,大体解剖发现伴有尿潴留症状,组织病理学检查发现在脑、肺、肠、脾脏、肾脏等部位发生病变。结果表明,EV71病毒通过灌胃、滴鼻和静脉注射3种方式均可以感染中缅树鼩,并使之出现神经系统及相关病变,该实验为将来研究EV71感染树鼩致病机理、建立手足口病树鼩动物模型奠定了理论基础。

甲型肝炎病毒的组织培养特性

本文介绍了近年来对甲型肝炎病毒的组织培养特性的研究进展,着重讨论了甲型肝炎病毒的体外培养的一般性质、体外生长繁殖的动力学和细胞致病作用。

利用HCV多表位复合抗原制备高效价抗体

目的利用HCV多表位复合抗原免疫家兔制备高效价抗HCV多克隆抗体,为改进丙型肝炎病毒抗原的诊断试剂盒提供必要条件。方法HCV多表位复合抗原与完全弗氏佐剂混合免疫家兔,获得高效价抗血清,经硫酸铵沉淀及PrintA/G亲和层析纯化。结果已获得效价大于1∶16000的抗HCV多克隆抗血清,经纯化后达电泳纯。该抗体能与HCVNS3、NS5及C抗原特异性结合。结论HCV多表位复合抗原具有较好的免疫原性,可用于改进HCV病毒抗原诊断试剂。

CTGF对角膜成纤维细胞生物学功能的影响

目的 观察结缔组织生长因子(CTGF)对体外培养的角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和合成细胞外基质的影响。 方法 体外培养兔角膜成纤维细胞,经0.5、5、50和500 ng／mL CTGF处理24 h后,分别进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色、银染核仁组成区染色(AgNOR)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)免疫组化染色以及Ⅲ型胶原(CA-Ⅲ)、纤维连接蛋白(FN)和层黏蛋白(LM)免疫组化染色,检测CTGF对角膜成纤维细胞增殖、向肌成纤维细胞转化和细胞外基质合成的影响。 结果 与对照组相比,0.5、5、50和500 ng／mL的CTGF能剂量依赖性地促进角膜成纤维细胞PCNA表达,增加核仁银染颗粒数,促进α-SMA的表达,同时能促进角膜成纤维细胞CA-Ⅲ、FN和LM的合成(P<0.01)。结论 一定质量浓度的CTGF可能在角膜损伤修复过程中发挥重要作用。

应用24孔板培养法检测甲肝疫苗感染性滴度

目的 应用２４孔培养板检测甲肝疫苗（ＨＡＶ）感染性滴度。方法 采用２４孔培养板培养单层细 胞，接种适宜稀释度的病毒，每稀释度接种６－８孔，１００μｌ／ 孔，培养到期，用胰酶消化后收集细胞，每管沉淀细胞加 ２５０ｕｌ细胞裂解液裂解细胞，释放ＨＡＶ，然后用ＥＬＩＳＡ法检测ＨＡＡｇ。结果 ＨＡＶ（Ｈ２株）在２４孔板上的增殖高峰为 ２１－２４ｄ；板间差异平均为０．１０５Ｌｏｇ；８批样品经２次重复检测，重复性较好，其差值的平均值为０．１０６Ｌｏｇ，标准差为 ０．０９９。用此方法检测１２批样品，其结果与小方瓶培养法差异无显著意义（Ｐ＞０．５）。结论 ２４孔板培养法有望用 于甲肝疫苗感染性滴度检测。

单纯疱疹Ⅰ型病毒即刻早期基因上游调控序列分析

感染人体的单纯疱疹病毒(HSV)在宿主细胞中,以级联反应的方式表达病毒蛋白.作为最早表达的立即早期基因,其上游都具有相似的调控序列.通过α4基因上游转录相关元件的依次递减,以CAT作为报告基因,评估了在病毒感染细胞早期阶段中,各DNA序列对立即早期基因转录所发挥的可能作用.实验数据表明,HSV立即早期基因在细胞中的表达受到多种元件的共同调控,这些成簇分布的调控元件的排列分布将为深入了解HSV的复制周期提供有益的线索.

甲型肝炎减毒活疫苗免疫程序的探讨

５２名ＨＡＶ抗体阴性的儿童，按０、３个月免疫程序，经２针低剂量（５．５０ｌｇＣＣＩＤ５０／ｍｌ）甲型肝炎减毒活疫苗免疫，于第２针接种后７天检测ＨＡＶ抗体阳转率为１００％，抗体效价ＧＭＴ值为１∶１４；全部接种儿童的ＡＬＴ均在正常范围内（２～２４μｌ）；免前ＨＡＶ抗体阳性的儿童，经２针免疫后。

抗-HCV多表位抗体在检测HCV抗原中的应用

目的 应用丙型肝炎病毒多表位抗体，探索从血浆或血清样品中检测丙型肝炎病毒抗原（HCAg）的可能性，为献血员筛选及临床早期诊断提供检测方法。方法 利用原核系统表达的丙型肝炎病毒（HCV）7个高度保守区基因的多表位复合抗原免疫动物，制备抗-HCV多克隆抗体，采用ELISA双抗体夹心法检测血浆或血清中的HCAg，并与RT-PCR法进行比较。结果 制备的抗-HCV多表位复合抗原多克隆抗体，在用ELISA法检测HCAg中表现出较高的特异性及灵敏性，Cutoff值为0．239，批内CV值为5．60％～6．65％，批间CV值为7．80％。与RT-PCR比较，相关系数为0．816，灵敏度为88．89％，特异度为96．30％，一致性为95．24％，调整一致性为90．82％，阳性预测值为80．00％，阴性预测值为98．11％。HCAg检出率与美国ORTHO公司HCV—C抗原检测试剂盒差异无显著意义（P=0．06）。结论 用HCV多表位复合抗原制备的多克隆抗体，采用ELISA双抗体夹心法检测HCAg，具有灵敏、特异、快速的优点，有望开发成为HCAg诊断试剂盒。

人肠道病毒71型感染免疫抑制恒河猴的分析

目的:通过建立人肠道病毒71型(EV71)感染在免疫抑制恒河猴的动物模型,进一步分析人EV71在免疫抑制动物体内病毒增殖、病理变化以及病毒抗原在不同组织的表达情况。方法:按照每天15 mg/kg的剂量给8只恒河猴口服环孢菌素A连续7 d后造成其免疫抑制状态,再经呼吸道和消化道感染EV71病毒FY23株,对其进行14 d的临床观察后处死,采集各器官组织进行病毒载量检测,同时对不同的组织进行病理学分析和免疫组化分析。结果:感染EV71病毒后,免疫抑制组的临床症状、病毒载量、病理分析和免疫组化结果都明显比非免疫抑制组严重,从病毒对机体造成的影响来看呼吸系统感染较消化系统感染明显严重。结论:本实验分析了人EV71在免疫抑制动物体内病毒增殖的情况,为建立用于EV71疫苗评价的恒河猴动物模型提供了依据,并对未来的EV71疫苗的使用人群范围做出了新的限定。